基于转录组学和网络药理学探讨肉豆蔻挥发油干预低氧性肺动脉高压的作用机制

目的 基于转录组学和网络药理学探讨肉豆蔻挥发油（volatile oil from Myristica fragrans,VOMF）干预低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary artery hypertension,HPAH）的作用机制。方法 通过SwissTargetPrediction数据库获取VOMF活性成分和药物潜在靶点,应用GEO数据库获取HPAH疾病相关靶点,Cytoscape软件构建“成分-靶点-疾病”网络;运用Pymol和MOE软件对VOMF关键活性成分与作用靶点进行分子对接。采用雄性SD大鼠制备肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）,低氧处理并给予VOMF干预后,进行转录组学分析获取差异表达基因,采用Western blotting验证VOMF对细胞周期信号通路相关蛋白表达的影响。结果 网络药理学分析共得到VOMF潜在作用靶点512个,HPAH疾病相关差异靶点2 912个,交集基因80个;转录组学分析共得到40个共同差异表达基因。以P＜0.05为筛选条件将转录组学和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析结果进行交集,得到交集通路8条,其中与HPAH密切相关的包括细胞周期信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、缺氧诱导因子-1信号通路。结合文献报道和课题组前期研究,选取细胞周期信号通路进行验证。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin dependent kinase 2,CDK2）、CDK4、细胞周期蛋白D1（cell cycle protein D1,Cyclin D1）、Cyclin A2蛋白表达水平升高（P＜0.01、0.001）,p27Kip1蛋白表达水平降低（P＜0.01）;与模型组比较,VOMF组CDK2、CDK4、Cyclin D1、Cyclin A2蛋白表达水平降低（P＜0.05、0.01、0.001）,p27Kip1蛋白表达水平升高（P＜0.05、0.01）。结论 从网络药理学和转录组学角度初步阐明了VOMF能够通过干预细胞周期信号通路,进而干预HPAH的发生,可为后续的药理学研究和临床应用提供依据与参考。     

莪达夏提取物对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

目的研究藏药莪达夏水提物对体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度的莪达夏水提物处理MCF-7肿瘤细胞12、24、48 h后细胞的存活率,光镜下观察MCF-7细胞形态学的变化,用Annexin V-FITC/PI双染色凋亡检测试剂盒和流式细胞术分析水提物对MCF-7细胞凋亡的影响。结果莪达夏水提物对MCF-7肿瘤细胞的增殖产生抑制作用,且最高抑制率达62%,不同浓度的水提物作用细胞后可引起肿瘤细胞出现胞浆空泡和凋亡小体,低浓度的水提物处理细胞后,肿瘤细胞出现早期凋亡,随着药物浓度的增高,凋亡晚期的坏死细胞增多。结论莪达夏水提物可抑制体外培养的MCF-7乳腺癌细胞的增殖,其抑制作用与诱导肿瘤细胞凋亡的机制有关。     

藏药唐古特红景天对急性低氧大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

[目的]探讨藏药唐古特红景天在低氧条件下对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用和抗疲劳作用。[方法]Wistar大鼠随机分5组,为常氧对照组、低氧组和唐古特红景大、中、小剂量组。将低氧组和唐古特红景大、中、小剂量组放入模拟海拔5500m的低氧低压舱内;常氧对照组和低氧组每天0.9%生理盐水灌胃,红景天每天以成人剂量的20倍、15倍和10倍灌胃,连续给药14d,制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,测膈肌最大收缩力、最大强直收缩、强直收缩时间、疲劳时间和疲劳指数以及血清血红蛋白(Hb)、红细胞压积(HCT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的值。[结果]低氧组大鼠的膈肌最大收缩力、最大强直收缩、强直收缩时间、疲劳时间和疲劳指数均较用药组和对照组显著缩短,差异有统计学意义(P﹤0.05),唐古特红景天不同剂量组可显著降低ET-1含量(P﹤0.05),同时MDA、SOD、GSH、GSH-Px和NO与低氧组比较差异也有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]藏药唐古特红景天在低氧环境下对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。     

穴位刺激防治含顺铂方案化疗患者消化道副反应的临床研究进展

近年来恶性肿瘤发病率逐年升高,抗肿瘤药物不断更新,化疗在肿瘤治疗过程的各个阶段不可或缺。然而,化疗药物所致的消化道副反应却是临床治疗十分棘手的难题之一,尤其在含有顺铂的联合化疗方案中更常见,严重的恶心呕吐影响化疗的顺利进行。因此改善化疗药物所致的消化道副反应,不仅可以有效改善肿瘤患者的生活质量,而且对于提高肿瘤患者的化疗耐受性具有重大的意义。早期中医治疗化疗药消化道副反应临床研究多为针刺单穴或电针,近年来该领域取得了一定的成就,因此本研究分别从穴位注射、穴位按压、单纯针刺、灸法、电针等方面将近10年来相关临床研究概述如下。     

穴位注射对含顺铂化疗患者化疗相关恶心呕吐影响的临床试验研究

目的：验证中药艾迪穴位注射是否能够减轻化疗相关性恶心呕吐（C~NV）,减轻化疗后骨髓毒性反应,提高生活质量,改善中医临床证候。方法：采用随机对照临床试验研究原则,将60例含顺铂化疗方案在院患者随机分为两组：试验组30例患者实施中药艾迪穴位注射联合西药中枢止吐剂盐酸格拉司琼,对照组30例患者单纯静点西药中枢止吐剂盐酸格拉司琼,以顺铂化疗d一1,d1,d21为检测时间点,通过对患者止呕药疗效、骨髓毒性反应、生活质量以及中医证候四项关键性指标进行综合分析、科学评价。结果：试验组患者急性CINV的治疗有效率高于对照组（第一次访视试验组有效率为75．87％,对照组有效率为50．00％,P〈0．05;第二次访视试验组有效率为79．31％,对照组有效率为61．54％,P〉0．05）。两组患者治疗后血红蛋白及血小板含量均比治疗前低（P〈0．05）,两组之间相比无统计学意义（P〉0．05）;两组患者生存质量卡氏计分改善程度比较,试验组变化分值小于对照组（P〉0．05）;两组患者中医证候总计分差值比较,试验组改善分值大于对照组（P〈0．05）。结论：中药艾迪穴位注射能够有效缓解含顺铂化疗方案患者化疗后相关恶心呕吐,并且主要是缓解急性恶心呕吐;两组合顺铂方案化疗患者均合并有骨髓抑制,并且骨髓抑制主要体现在血红蛋白及血小板方面;中药艾迪穴位注射具有改善含顺铂化疗方案患者生活质量的趋势,但两组之间无统计学意义;中药艾迪穴位注射能够改善含顺铂化疗方案患者中医证候积分。     

八味沉香散对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨八味沉香散对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后心肌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法采用左冠状动脉穿线结扎法制备心肌缺血/再灌注模型。SD大鼠40只随机分成4组：假手术组（A组,n=10）,缺血/再灌注损伤模型组（B组,n=10）,缺血/再灌注损伤模型＋生理盐水对照组（C组,n=10）,八味沉香散组（D组,n=10）。心电图记录肢体Ⅱ导联ST段的变化。利用RT-qPCR检测心肌Bcl-2、Bax基因的mRNA表达情况。结果缺血/再灌注损伤模型组与假手术组比较,Bcl-2下降,Bax增高,Bcl-2/Bax下降（P〈0.05）;缺血/再灌注损伤模型＋生理盐水对照组各项指标与缺血/再灌注损伤模型组比较均无显著性差异;八味沉香散组的各项指标较缺血/再灌注损伤模型组明显改善,Bcl-2升高,Bax下降,Bcl-2/Bax升高。结论八味沉香散可能通过上调Bcl-2、下调Bax来抑制缺血/再灌注后心肌细胞凋亡,从而对缺血/再灌注心肌损伤发挥保护作用。     

心肌缺血再灌注中的棘手问题及对策

目的:探讨心肌缺血再灌注研究中的一些棘手问题,以及目前应对这些问题的主要临床辅助策略。方法:通过查阅近几年发表的有关心肌缺血再灌注研究的文献,分析该研究领域的研究现状。结果:再灌注是恢复缺血心肌血流供应的有效手段。研究发现,冠状动脉闭塞后60～90 min实施再灌注能够有效挽救缺血心肌。再灌注可以引起心律失常、微循环紊乱、受损心肌细胞死亡,导致再灌注损伤;而不利的心肌重塑则是急性心肌梗死患者主要的死亡原因之一。常规即时再灌注的实施、减轻再灌注损伤和防止不利的心肌重塑等是现在临床治疗面临的难题。采取预处理、活化再灌注损伤救援激酶、干细胞治疗等辅助措施有望解决这些难题。结论:心肌缺血再灌注虽是恢复缺血心肌血液供应最有效的手段之一,然而,再灌注引起的损伤及不利的重塑也是急需解决的难题,再灌注治疗联合辅助措施有望为解决这一问题带来突破。     

藏药唐古特红景天水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用

目的研究藏药唐古特红景天水提物对体外培养乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法利用高效液相色谱鉴定水提物的有效成分。采用MTT法检测不同浓度的水提物处理MCF-7肿瘤细胞12,24,48 h后细胞的存活率。光镜观察水提物处理后MCF-7细胞形态学的变化。使用Annexin V-FITC/PI双染色凋亡检测试剂盒,流式细胞术分析水提物对MCF-7细胞凋亡的影响。结果高效液相色谱结果证实,唐古特红景天水提物中有红景天苷和酪醇等成分的存在。MTT实验结果显示,水提物作用12 h,便对MCF-7肿瘤细胞的增殖产生抑制作用;在不同的检测时间点,从90μg/ml到450μg/ml的剂量范围对肿瘤细胞的存活均有不同程度的抑制作用,且最高抑制率高达98%。光镜观察发现,不同浓度的水提物作用后可引起肿瘤细胞出现胞浆空泡和凋亡小体。Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞检测结果显示,低浓度的水提物处理后,肿瘤细胞出现早期凋亡,随着药物浓度增高,凋亡晚期和坏死细胞增多。结论唐古特红景天水提物可抑制体外培养MCF-7乳腺癌细胞的增殖,其抑制作用与诱导肿瘤细胞凋亡的机制有关。     

三味檀香散预处理对大鼠离体心脏缺血-再灌注血流动力学的影响

目的 研究藏药三味檀香散预处理对大鼠离体心脏缺血-再灌注血流动力学的影响.方法 采用Langendorff离体心脏灌流的方法,将大鼠随机分为正常对照组、缺血-再灌组(I/R)组、三味檀香散大、中、小剂量组,除正常对照组以K-H液平衡灌流90 min外,其余各组均平衡灌流30 min、停灌30 min、再灌注30 min,模拟心肌缺血-再灌注损伤;观察不同时间点各组大鼠血流动力学的指标:心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室压力上升和下降最大变化速率(±dp/dt max)、冠脉流量(CF).结果 与正常对照组相比,离体大鼠的心脏停灌30 min、再灌注30 min,可引起明显的心功能抑制.三味檀香散预处理有明显的正性变力作用,大、中、小剂量组的LVSP、±dp/dt max明显高于I/R组(P＜0.05或P＜0.01),各组间的HR和CF无差异(P＞0.05).结论 三味檀香散预处理能有效改善左室的顺应性,增强缺血-再灌注大鼠离体心脏的收缩和舒张功能,对缺血-再灌注损伤大鼠的离体心脏有保护作用.