芦荟大黄素对豚鼠皮肤黑色素细胞NOS的影响--免疫组织化学研究

目的探讨豚鼠皮肤黑色素细胞在大黄有效成分的作用下,一氧化氮合酶(Nitric OxideSynthse;NOS)表达的变化,阐明大黄在活体皮肤中对黑素细胞的有效作用浓度和作用机制.方法将21只雄性豚鼠随机分成对照组及5个实验组,用芦荟大黄素5种浓度对局部皮肤皮下注射处理,48小时后取材,免疫组织化学方法(SABC)法显示NOS的表达,用光学显微镜和图象分析仪对结果进行统计分析.结果芦荟大黄素作用下,表皮黑素细胞NOS表达明显减少,光密度明显下降(P<0.05);不同浓度药物作用之间无显着差异(P＞0.05),加注侧与未加注侧之间无显著差异.结论芦荟大黄素对黑色素细胞NOS的表达具有调节作用,提示大黄对黑素细胞的调节是经NO信号介导途径,为大黄的临床应用提供实验依据.     

芒果皮炎的临床治疗及分析

目的探讨芒果皮炎发生的特点、发病机理及治疗方法,比较多种治疗方法的疗效,探索最为有效的治疗方法。方法总结分析55例芒果皮炎的临床资料。结果采用抗组胺药物、糖皮质激素、葡萄糖酸钙、维生素E、外用硼酸溶液、薄荷炉甘石洗液、尤卓尔等都有一定疗效,联合治疗疗效更佳。结论最为有效的方法是采用抗组胺药物、糖皮质激素、葡萄糖酸钙、维生素E以及外用药物等联合治疗。     

人参皂苷Rb1与芳维甲酸乙酯对光老化皮肤真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶影响的比较研究

目的通过人参皂苷Rb1与芳维甲酸乙酯对皮肤真皮体外培养光老化成纤维细胞胞质内基质金属蛋白酶表达的影响,阐明人参皂苷Rb1对光老化的防治机理,探索光老化的防治手段。方法建立体外培养真皮成纤维细胞光老化模型,用人参皂苷Rb1与芳维甲酸乙酯进行干扰,免疫组织化学技术显示基质金属蛋白酶的表达的改变。结果人参皂苷Rb1与芳维甲酸乙酯对培养成纤维细胞胞质基质金属蛋白酶的表达有显著抑制作用(P<0.05);人参皂苷Rb1和芳维甲酸乙酯对其表达的抑制作用相互之间差异无显著性(P>0.05)。结论人参皂苷Rb1对光老化成纤维细胞具有与芳维甲酸乙酯相似的防治作用,其机理与芳维甲酸乙酯的作用机理可能相同或者相似,及通过调节MMPs活性防治皮肤光老化。     

马桑内酯致痫大鼠突触结构的变化及妥泰的保护作用

[目的]电子显微镜观察马桑内酯致痫及妥泰干扰大鼠大脑运动皮质的突触结构参数的变化,探讨突触改变在癫痫发作及妥泰治疗过程中的机制.[方法]成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、癫痫组、治疗组;癫痫组、治疗组用马桑内酯注入到大鼠侧脑室,制作癫痫模型;治疗组用妥泰在癫痫发作后1h灌胃,持续每天1次;7d后取大脑运动皮质,做超薄切片,电镜观察突触超微结构改变;Soft Image System作图像分析,统计突触各参数的改变.[结果][1]癫痫组突触界面曲率、突触活性区长度、突触后致密物厚度和穿孔性突触百分率明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);[2]治疗组的各项指标有所降低,与癫痫组比较差异有统计学意义(P<0.05).[结论][1]致病剂马桑内酯使大鼠运动皮质突触的各个参数发生改变;[2]妥泰对突触的改变具有保护和改善作用.     

鼠胚神经干细胞增殖对缺氧的反应及当归的保护作用

目的：探讨宫内缺氧对胚胎大鼠神经干细胞增殖的影响及当归注射液对缺氧神经干细胞的保护作用。方法：实验于2003-09／2004-06在四川省泸州医学院动物科将12只孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组，每组4只（每只孕鼠产胎鼠5～8只）。当归组孕鼠经尾静脉注入当归注射液，然后用低张性缺氧模型致胎鼠宫内缺氧；缺氧组用生理盐水代替当归注射液，其余同当归组；对照组不缺氧，其余同缺氧组。然后在麻醉状态下处死孕鼠，快速剖腹取胎鼠，每组随机选取20个胚鼠，将各组胎鼠脑组织作神经巢蛋白免疫组化染色，并进行图像分析。结果：60个胎鼠脑室周围脑组织进入结果分析。①缺氧组胎鼠巢蛋白免疫组化反应阳性细胞的吸光度较对照组强（0．262&;#177;0．043，0．173&;#177;0．021，P〈0．05）；阳性细胞数量较对照组多[（101．4&;#177;15．76），（42．7&;#177;6．25）个／视野，P〈0．05]。②与缺氧组相比较，当归组胎鼠的巢蛋白免疫组化反应阳性细胞的吸光度减弱（0．222&;#177;0．035，P〈0．05）；阳性细胞数量减少[（58．5&;#177;12．53）个／视野，P〈0．05]。结论：缺氧后神经干细胞表达巢蛋白增加，当归注射液减弱了缺氧刺激引起的神经干细胞的增殖和分裂，提示当归对缺氧有保护作用。     

大黄素次酸对皮肤黑素细胞一氧化氮合酶的调控作用及意义

背景:在影响黑素细胞功能的诸多信号介导途径中,一氧化氮被认为是一种极为重要的信号分子。大黄有效成分大黄素次酸可以影响黑素细胞的增殖及调节细胞中酪氨酸酶的活性。目的:观察大黄有效成分大黄素次酸对豚鼠皮肤黑素细胞的一氧化氮合酶表达的影响,以期确定大黄在活体皮肤中对黑素细胞的黑素合成的有效作用浓度和作用机制。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:泸州医学院附属医院皮肤科。材料:实验于2004-01/06在泸州医学院附属医院传染科实验室和泸州医学院组织学与胚胎学实验室完成。选用成年健康雄性封闭群豚鼠24只。随机将豚鼠分为6组:对照组,大黄素次酸2,5,10,20,40mg/L组,每组4只。方法:①将大黄素次酸用二甲基亚砜溶解稀释为2,5,10,20,40mg/L,分别对大黄素次酸(中国生物医学制品检定所提供,该药品为实验室提取的白色粉末纯品)2,5,10,20,40mg/L组豚鼠臀部、背部两处局部皮肤进行相应质量浓度皮下注射处理,注射量均为1mL。24h后对其中一处皮肤加注1mL相同浓度大黄素次酸一次。48h后取材,常规石蜡切片(取对照组及大黄素次酸组未注射药物处皮肤作实验对照组)。②免疫组织化学方法法显示一氧化氮合酶的表达,用光学显微镜在高倍镜下观察,识别黑素细胞,观察细胞胞质的染色及特点。用MLAS-1000图像分析仪,每组随机选择5张切片,每张切片检测20个细胞,由计算机处理系统计算出各组黑素细胞胞质中阳性免疫产物的平均吸光度(A值)。③计量资料差异比较采用方差分析,并且用SNK-q进行组间比较。主要观察指标:免疫组织化学方法显示黑素细胞内一氧化氮合酶的表达,用光学显微镜和图像分析仪获得实验结果。结果:黑素细胞胞质中阳性免疫产物的平均A值:大黄素次酸2,5,10,20,40mg/L组明显低于实验对照组(0.126±0.118,0.103±0.082,0.118±0.097,0.122±0.095,0.112±0.078,0.196±0.066,P<0.05);大黄素次酸各质量浓度组间差异不明显(P>0.05)。结论:①大黄素次酸对黑色素细胞一氧化氮合酶的表达具有调节作用,提示大黄对黑素细胞的调节通过一氧化氮信号传导通路。②大黄素次酸在2～40mg/L的质量浓度内,一氧化氮合酶的表达不随大黄素次酸的质量浓度改变而发生变化。     

体外分离培养人皮下脂肪干细胞的生物学特性及影响因素

目的:研究证实脂肪组织提取物中存在脂肪源性干细胞,并表现出向多谱系细胞分化的特点.对来源于人皮下脂肪组织的脂肪干细胞进行体外培养,观察其形态特点、生物学特性及间充质来源细胞表面相关标志的表达.方法:实验于2005-11/2007-02在泸州医学院医学分子生物学实验室完成.①对象:行切疤植皮术的正常体质量患者8例,年龄16～45岁,均无传染性疾病,来源于泸州医学院烧伤整形科,实验前征得患者同意.②实验方法:人脂肪干细胞的分离、培养与传代:无菌条件下取患者新鲜的皮下脂肪,Ⅰ型胶原酶消化 贴壁法获取原代脂肪干细胞,生长至70%融合时传代,观察细胞的形态学变化.当原代细胞的胞质中出现较多透亮液滴后,行油红O染色.将第3代脂肪干细胞冻存,1个月后复苏,观察细胞的生长情况.选择生长状态良好的第3代脂肪干细胞,苏木精-伊红染色观察细胞形态,SABC法检测间充质来源细胞特异性标志波形蛋白的表达,SP法检测间充质干细胞表面相关抗原CD44的表达.取处于对数生长期的细胞,绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间.结果:①原代和传代过程中人脂肪干细胞的形态学变化:原代和传代培养的细胞均为长梭形贴壁生长.当原代细胞达到50%融合后,部分细胞由梭形逐渐变为多角形或椭圆形,胞质内出现油红O染色阳性的脂滴.传代细胞中此现象逐渐消失,且经冻存后复苏的活细胞率达80%以上,细胞生长、增殖能力未受影响.②间充质来源细胞表面标志的鉴定:第3代人脂肪干细胞的胞质丰富,HE染色弱嗜碱性,呈淡蓝色;波形蛋白阳性率为(97.1±2.3)%,CD44阳性率为(85.4±3.22)%.③人脂肪干细胞的生长曲线及倍增时间:传代培养的脂肪干细胞生长曲线呈"S"形,群体倍增时间为62.38h.结论:从人皮下脂肪组织分离培养出的脂肪干细胞,在体外扩增和冷冻保存后生物学特性稳定,且具有良好的增殖能力,表达间充质来源细胞表面标志波形蛋白和表面抗原CD44.     

雷公藤对豚鼠表皮c-fos基因表达及表皮再生能力的调节

目的:观察雷公藤甲素对豚鼠皮肤原癌基因c-fos表达的影响,探讨雷公藤甲素的有效作用浓度。方法:实验于2004-01/08在泸州医学院组织学与胚胎学实验室进行。将20只雄性豚鼠随机分成为4个实验组,分别为对照组、雷公藤甲素5mg/L组、雷公藤甲素10mg/L组和雷公藤甲素20mg/L组,每组5只。使用雷公藤甲素5,10,20mg/L3种浓度对局部皮肤真皮注射处理,免疫组织化学方法显示c-fos阳性细胞,用光学显微镜和图像分析仪对结果进行观察和分析。结果:20只豚鼠均进入结果分析。与对照组比较,雷公藤甲素5,10,20mg/L组豚鼠表皮角质细胞c-fos表达明显增强(149,162,144,87个/视野,P<0.05),吸光度明显增高(0.142±0.025,0.157±0.066,0.159±0.079,0.107±0.076,P<0.05)。不同浓度药物之间作用差异无显著性意义(P>0.05)。结论:雷公藤甲素对豚鼠皮肤原癌基因c-fos表达具有调节作用,其有效作用浓度范围较实验采用的5～20mg/L大。     

TSA对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及FHIT表达的影响

目的观察曲古抑菌素A（TSA）的体外抗人肝癌HepG2细胞作用及机制。方法取人肝癌HepG2细胞培养至对数生长期后随机分为TSA组、对照组、空白组,TSA组加入TSA至终浓度分别为125、250、500、1 000、2 000nmol/L,对照组加入等量二甲基亚砜（DMSO）,空白组只加培养基、无细胞,每组设6个复孔,作用24~72 h后MTT比色法测定HepG2细胞增殖抑制率（IR）,倒置显微镜和电镜观察HepG2细胞形态变化,TUNEL法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测脆性组氨酸三联体（FHIT）基因表达,Western blot检测FHIT蛋白表达。结果与对照组相比,TSA组IR随TSA浓度增加和作用时间延长而增加（P〈0.05）,透射电镜下TSA组HepG2细胞出现凋亡早期改变;与对照组比较,TSA组细胞凋亡率升高,FHIT mRNA及蛋白表达增强（P均〈0.01）。结论 TSA体外能有效抑制肝癌细胞株HepG2生长并促进其凋亡,机制可能为上调FHIT表达。     

鼠胚神经干细胞增殖对缺氧的反应及当归的保护作用

目的:探讨宫内缺氧对胚胎大鼠神经干细胞增殖的影响及当归注射液对缺氧神经干细胞的保护作用。方法:实验于2003-09/2004-06在四川省泸州医学院动物科将12只孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组,每组4只(每只孕鼠产胎鼠5～8只)。当归组孕鼠经尾静脉注入当归注射液,然后用低张性缺氧模型致胎鼠宫内缺氧;缺氧组用生理盐水代替当归注射液,其余同当归组;对照组不缺氧,其余同缺氧组。然后在麻醉状态下处死孕鼠,快速剖腹取胎鼠,每组随机选取20个胚鼠,将各组胎鼠脑组织作神经巢蛋白免疫组化染色,并进行图像分析。结果:60个胎鼠脑室周围脑组织进入结果分析。①缺氧组胎鼠巢蛋白免疫组化反应阳性细胞的吸光度较对照组强(0.262±0.043,0.173±0.021,P<0.05);阳性细胞数量较对照组多[(101.4±15.76),(42.7±6.25)个/视野,P<0.05]。②与缺氧组相比较,当归组胎鼠的巢蛋白免疫组化反应阳性细胞的吸光度减弱(0.222±0.035,P<0.05);阳性细胞数量减少[(58.5±12.53)个/视野,P<0.05]。结论:缺氧后神经干细胞表达巢蛋白增加,当归注射液减弱了缺氧刺激引起的神经干细胞的增殖和分裂,提示当归对缺氧有保护作用。