用高效液相色谱-同位素稀释质谱法测定川崎病患儿血浆中阿司匹林和水杨酸的药物浓度

目的 建立高效液相色谱-同位素稀释质谱(HPLC-IDMS)法测定川崎病患儿血浆中阿司匹林(ASP)和水杨酸(SA)浓度的方法。方法 血浆样品经有机溶剂沉淀蛋白后,分别以ASP-D4和SA-D4为内标,采用Phenomenex Kinetex~? XB C18色谱柱(2.6 mm×50.0 mm, 3.0μm),以0.1%甲酸-水(A)和乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1,进样量为6μL。质谱检测方式为负离子模式,多反应监测扫描。结果 ASP在1.02～4 000 ng·mL^-1线性关系良好(r²=0.995 4),定量下限(LLOQ)为1.02 ng·mL^-1。SA在1.28～5 000 ng·mL^-1线性关系良好(r²=0.998 5),LLOQ为1.28 ng·mL^-1。准确度、精密度、基质效应和稳定性均符合《中国药典》(2020年版)规定。结论 该方法操作简便快速稳定,灵敏度专属性高,可用于ASP...     

用HPLC-MS/MS法测定重症感染患儿微量血浆/血清中利奈唑胺和万古霉素浓度

目的 建立一种高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法快速测定重症感染患儿微量血浆/血清中利奈唑胺和万古霉素浓度。方法 血浆/血清10μL经甲醇沉淀蛋白后取上清液直接进样分析,内标分别为利奈唑胺-D3和去甲万古霉素;用Kinetex^? EVO C18柱(30.0 mm×2.1 mm, 2.6μm)分离,以0.1%甲酸-水和0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速：0.5 mL·min^-1,柱温：40℃,进样量：2μL,分析时长：2 min。电喷雾离子源正离子扫描下,用多反应监测模式进行质谱分析。考察该方法的专属性、定量下限和标准曲线、准确度和精密度、回收率、基质效应、稳定性、血清和血浆样品的交叉验证、溶血效应和高脂效应。结果 利奈唑胺、万古霉素及内标利奈唑胺-D3、去甲万古霉素的保留时间分别为1.18、1.03、1.17、1.01 min。利奈唑胺在0.2～25.6μg·mL^-1内呈良好的线性关系,回归方程是y=8.95×10^-1x+3.49×10^-3(r=0.997 ...     

HPLC-ESI-MS/MS同时测定癫痫患儿血浆中丙戊酸、苯巴比妥和托吡酯的药物浓度

目的建立基于高效液相色谱串联质谱技术(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定癫痫患儿血浆中丙戊酸、苯巴比妥和托吡酯浓度的方法,用于癫痫患儿的血药浓度监测及结果分析。方法样品用有机溶剂沉淀蛋白法进行前处理,分别以丙戊酸-D6、托吡酯-D12、苯巴比妥-D5为内标,采用Phenomenex Kinetex^?EVO C₁₈色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm),以0.07%甲酸-1 mmol乙酸铵-水(A)和甲醇(B)作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1。质谱检测系统采用电喷雾离子源负离子模式,多离子反应监测模式扫描。考察该方法的专属性、定量下限(LLOQ)、标准曲线、残留效应、稀释效应、准确度、精密度、基质效应和稳定性。结果丙戊酸在0.6～120μg·mL^-1线性关系良好(r=0.998 9),LLOQ为0.6μg·mL^-1;苯巴比妥在0.25～50μg·mL^-1线性关系良好(r=0.999 1),LLOQ为0.25μg·mL     

HPLC-MS/MS法同时测定微量血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦、拉莫三嗪浓度及其临床应用

目的 建立HPLC-MS/MS法测定微量血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦和拉莫三嗪的浓度,同时应用于儿童治疗药物监测。 方法 取含药血浆10 μl,用蛋白沉淀法对样本进行前处理。色谱柱为Agilent C18（50 mm×2.1 mm,1.8 μm）,流动相为0.1%甲酸水和甲醇,梯度洗脱;流速为0.4 ml/min。采用电喷雾离子源正离子模式,监测甲氨蝶呤m/z 455.1→308.2,甲氨蝶呤-D3 m/z 458.1→311.1（内标）;左乙拉西坦m/z 171.1.4→126.2,左乙拉西坦-D6 m/z 177.2→132.2（内标）;拉莫三嗪m/z 256.1→211,拉莫三嗪-13C3-D3 m/z 262.1→217.1（内标）。 结果 甲氨蝶呤在25~ 1 500 ng/ml线性关系良好,标准曲线方程：Y=0.251 6X+0.003 4（r=0.998 9）,定量下限为25 ng/ml;左乙拉西坦在1~50 μg/ml线性关系良好,标准曲线方程：Y=16.687 6X+0.000 2（r=0.991 1）,定量下限为1 μg/ml;拉莫三嗪在0.5~25.0 μg/ml线性关系良好,标准曲线方程：Y=46.369 5X-0.059 9（r=0.999 1）,定量下限为0.5 μg/ml。样本批内、批间准确度和精密度符合要求、基质效应符合规定。本方法验证后成功用于1 348例临床患儿样本的检测。 结论 本方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于人血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦及拉莫三嗪的分析,适用于儿童治疗药物监测。     

孕酮抑制Aβ诱导星形胶质细胞活化所致神经元损伤

目的探究孕酮抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化,发挥神经元保护作用及其机制,为孕酮在阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)防治中的应用提供实验依据。方法将原代培养的星形胶质细胞随机分为对照组、Aβ组及Aβ加3个浓度孕酮组,分别处理24 h后,与神经元共培养。MTT法检测神经元的存活率;ELISA检测条件培养液中炎症因子IL-1β和TNF-α的水平;免疫荧光法和Western blot检测星形胶质细胞NF-κB的活性。结果孕酮浓度依赖地抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化引起的神经元存活率下降;抑制Aβ诱导的星形胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的升高;抑制Aβ诱导星形胶质细胞NF-κB的活性增加。结论孕酮通过抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化,发挥神经元保护作用,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。