灯盏乙素介入IP3R-Ca2+途径抑制β淀粉样蛋白诱导的神经细胞凋亡

目的：观察灯盏乙素（Scu）对β淀粉样蛋白（Aβ）诱导的细胞模型中1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP₃R）-Ca²⁺途径的影响,探讨其在阿尔茨海默病（AD）病程中可能发挥的积极作用。方法：选用神经母细胞瘤细胞分为对照组、Scu处理组、Aβ处理组、Aβ+Scu （高、中、低）处理组及Aβ+IP₃R拮抗剂组,用CCK-8法筛选药物浓度并检测各组细胞生存率;用酶联免疫吸附法检测各组细胞中1,4,5-三磷酸肌醇（IP₃）的含量;用蛋白印迹和实时荧光定量聚合酶链反应方法检测各组细胞IP₃R和凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白及mRNA的表达水平;用激光共聚焦显微镜观察各组细胞内Ca²⁺浓度的变化;用AnnexinV/PI双染法测定各组细胞的凋亡率。结果：与对照组和Scu处理组相比,Aβ处理组细胞存活率下降,IP₃含量升高,IP₃R、Bax和Caspase-3的蛋白及mRNA表达上调,Bcl-2蛋白及mRNA的表达下调,细胞胞浆内Ca²⁺浓度及细胞凋亡率升高;Aβ+Scu处理组细胞中各检测指标的变化与Aβ处理组的结果正好相反,IP₃R通道下游指标的变化与Aβ+IP₃R拮抗剂组基本一致。结论：Scu能够下调通路蛋白IP₃、IP₃R的表达,抑制Aβ介导的Ca²⁺内流所致的细胞凋亡,可能通过对IP₃R-Ca²⁺途径的调控来影响AD病程。     

β-细辛醚对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑组织中差异蛋白表达的影响

目的 观察β-细辛醚对APPswe/ PS1dE9双转基因小鼠脑组织中差异蛋白表达的调节作用,探讨其对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的治疗作用机制.方法 实验动物分为正常对照组(C57BL/6J小鼠)、模型组(APPswe/ PS1dE9小鼠)和β-细辛醚治疗组(APPswe/PS1dE9小鼠),每组10只.β-细辛醚治疗组用灌胃方法给药,正常对照组和模型组给予等量生理盐水,历时90 d.用Morris水迷宫行为学方法测试小鼠学习记忆能力,用免疫组织化学方法检测小鼠脑组织中β-淀粉样前体蛋白(APP)的表达.用同J位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术对小鼠脑组织进行蛋白质组学分析,用蛋白质印迹法鉴定差异蛋白H2A、H2B的表达.结果 与模型组小鼠比较,经β-细辛醚治疗后,小鼠的逃避潜伏期和第1次穿越平台时间缩短(P＜0.05),平台穿越次数增多(P＜0.05),APP的表达减少(P＜0.05),差异蛋白组蛋白H2A 1-H、H2B 2-E和H2B 1-F/J/L的表达水平下降(P＜0.05).结论 β-细辛醚能够介入到组蛋白的修饰过程而起到治疗作用,这可能是其改善β-淀粉样肽毒性所致学习记忆能力下降的机制之一.     

灯盏乙素对β-淀粉样蛋白诱导的SH-SY5Y细胞中组蛋白H2A、H2B、H3表达的影响

目的:观察灯盏乙素对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞中组蛋白H2A、H2B、H3表达的影响,探讨其针对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)发挥表观遗传方面治疗作用的可能性。方法:将SH-SY5Y细胞分为对照组、灯盏乙素处理组、Aβ处理组和Aβ+灯盏乙素不同剂量处理组,用CCK-8法检测细胞存活率;用流式细胞术测定各组细胞凋亡率;用蛋白质印迹法和实时定量聚合酶链法检测各组细胞H2A、H2B、H3蛋白和mRNA的表达。结果:与对照组比较,Aβ处理组细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,H2A、H2B、H3蛋白和mRNA表达显著升高,灯盏乙素干预可显著提高Aβ作用下细胞的存活率,显著降低H2A、H2B、H3 mRNA及蛋白表达。结论:灯盏乙素能调节Aβ毒性所致神经元中组蛋白H2A、H2B、H3的表达,可能通过改变AD表观遗传的信息异常来发挥预防和治疗作用。     

灯盏乙素对神经母细胞瘤细胞中β-淀粉样蛋白生成的影响

目的观察灯盏乙素(Scutellarin,Scu)对神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞中β淀粉样蛋白(β-Amyloid peptide,Aβ)生成的影响,探讨其针对阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)发挥的防治作用。方法将SH-SY5Y细胞分为对照组、Aβ处理组和Aβ+Scu处理组,用CCK-8试剂盒测定细胞存活率;分别用免疫组织化学法、蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞Aβ_(1-42)、β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)、APP切割酶1(β-Site APP-leavingnzymes1,BACE1)、APP切割酶2(β-Site APP-leavingnzymes2,BACE2)的表达。结果与对照组相比,Aβ处理组的细胞存活率下降,Aβ_(1-42)、APP、BACE1蛋白和m RNA的表达水平增高,BACE2蛋白和m RNA的表达水平下降,Scu干预后,各检测指标的变化与Aβ处理组的结果正好相反。结论 Scu能够影响Aβ生成相关因子的表达,可能通过减少Aβ的沉积在AD防治中发挥积极作用。