以HBc颗粒为呈现载体的猪囊虫疫苗的构建及其免疫学研究

目的构建以HBc为载体的带有三个猪囊虫抗原表位(n1,n2,n3)的重组融合表达质粒pET-Δc-3n,表达出融合蛋白并纯化,通过免疫小鼠研究其体液免疫效果。方法用PCR法将三个猪囊虫表位分别插入HBc序列的第78-79位之间以及149位之后,再将该序列克隆入pET28a载体中,构建重组表达质粒,用大肠杆菌BL21作宿主菌表达出融合蛋白,并命名为PCCE,纯化后免疫小鼠,检测小鼠的体液免疫应答。用绦虫卵攻击免疫小鼠,并观察疫苗的保护作用。结果测序结果表明重组质粒构建成功,SDSPAGE显示融合蛋白表达正确,并有多聚体形成现象,ELISA检测到高滴度抗体。小鼠体内绦虫卵攻击试验表明疫苗PCCE的相对保护率为89%。结论以HBc为呈现载体的猪囊虫疫苗被成功表达和纯化,该疫苗能诱导较强的体液免疫反应,免疫小鼠对绦虫卵攻击具有较好的免疫保护作用。提示该疫苗PCCE可能具有预防囊虫病的潜在价值。     

信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导免疫应答的初步研究

目的：研究信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导的免疫应答。方法：在猪绦虫融合抗原pCC27(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的三个保护性抗原经拼接所得)基因片段5′末端引入人IL-2信号肽、一个通用型辅助性T淋巴细胞表位，谷胱甘肽还原酶的T和B淋巴细胞表位(TGG)，经pGEX4T-2表达鉴定，序列分析后构建成DNA疫苗，通过肌肉注射途径将这种DNA疫苗免疫小鼠。结果：这种含辅助表位的DNA疫苗诱导的免疫应答效果明显超过对照组，对绦虫卵攻击的保护率为90％。结论：构建了含绦虫融合抗原pCC27及TGG的核酸疫苗，动物试验结果表明．TGG表位既可提高IgG、IgG1、IgG2a的水平，又进一步增强Th1和Th2细胞间的平衡关系。免疫小鼠对绦虫卵的攻击具有很好的保护作用。     

囊虫病循环抗原检测结果用于疗效考核的研究

目的 查明囊虫死亡后患病机体内循环抗原(CA)的变化规律,以此为依据判定CA检测作为疗效考核标准的可行性。方法 用囊虫循环抗原检测试剂盒,对15头囊虫病猪和15例囊虫病患者治疗前后血清CA的变化情况作了观察。结果 用吡喹酮治疗囊虫病猪15头,经剖检证实治愈者13头。其中10头在治疗后15天血清中CA的衰减幅度大于2,治疗30天后13头猪的血清CA衰减幅度大于2,其中3头猪的CA已转阴;治疗后60天CA转阴的猪达10头。未治愈的两头病猪的CA一直变化不大。对囊虫病患者15例,用丙硫咪唑治疗,其中9例经1疗程治愈,治疗后30天的CA衰减幅度大于2,治疗60天后CA全部转阴;3例经2疗程治愈,60天后CA的衰减幅度大于2,1例转阴;2例经3疗程治愈,治疗后90天的CA衰减幅度大于2;另1例严重感染患者经6疗程治疗未治愈,其血清CA的衰减幅度小于2。结论 血清的CA吸光度(absorbance)A值变化能准确反应囊虫在患者体内的生存状态,以治疗前后的CA衰减幅度大于2或消失可作为囊虫病治愈的考核依据。     

猪囊虫DNA疫苗在猪体内的组织分布及其安全性探讨

研究猪囊虫DNA疫苗pVAX-S-△c-3n在仔猪体内的组织分布情况，并对其安全性进行分析。将猪囊虫DNA疫苗以肌注方式免疫仔猪，分别于接种后1d，7d，4w，8w，12w分离各组织，提取组织总DNA，用PCR法扩增质粒上抗原基因的部分序列，分析质粒DNA在不同组织内的分布及随时间变化的情况。结果表明接种后第一天，除了脑，其余组织都能检测到质粒，但随时间延长，仅注射部位能检测到质粒，且数量不断下降。肌注质粒在猪体内注射部位以外的组织中较短时间就被清除，因此质粒与染色体发生整合的可能性不大。     

高血脂对囊虫病循环抗原检测结果的影响

囊虫病是一种危害严重的人兽共患病,在我国部分地区呈地方性流行,全国各地都有散发性囊虫病患者。寄生在人体内的囊虫会产生分泌物或代谢物进入血中,通称循环抗原（CA）,虫体死亡后CA会逐渐消失,其半衰期比抗体短。因此,CA的检测不仅可用于早期诊断,而且还可用于考核疗效。我们用抗囊虫CA单克隆抗体研制成功的双抗体夹心ELISA法检测囊虫病血清及脑脊液中CA的试剂盒,已被许多医院采用,列为临床检验项目。经过多年应用,发现血清中血脂过高（三酰甘油〉5mmol／L）会影响CA的检测结果,出现假阳性。用氯仿预先处理高血脂血清样本,再进行检测,即可消除这种干扰。现报告如下。