一种KRAS基因突变检测方法的建立及初步应用

目的建立一种KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并初步探讨其临床应用价值。方法以KRAS基因热点突变区域12、13密码子为研究位点设计特异性扩增、测序引物,利用已知野生型、突变型样品以TA克隆技术构建相应质粒作为标准品,建立KRAS基因实时荧光定量PCR—Sanger测序突变检测方法,并进行方法学和应用评估。结果成功构建了KRAS基因12、13密码子野生型、突变型质粒。建立了KRAS基因实时荧光定量PCR—Sanger测序突变检测方法,该方法灵敏度高（9．39×10^1copies／uL）,重复性好（实时荧光定量PCR部分批内、批间变异系数分别为1．60％、2．54％）。该法与传统Sanger测序法同时检测40例临床样品,结果符合率为100％。结论本研究成功建立了可用于临床样品检测的KRAS基因实时荧光定量PCR—Sanger测序突变检测方法。     

热化疗对肺癌术后患者淋巴细胞绝对数值的影响

目的分析热化疗对肺癌术后的近期疗效及其对患者外周血淋巴细胞绝对数值的影响。方法采用流式细胞术检测36例肺癌术后患者热化疗前后外周血淋巴细胞绝对数值，并与正常对照作比较。结果患者热化疗前后淋巴细胞绝对数值均低于正常对照值（P〈0.05）。热化疗有效者总T细胞（CD3^＋）、辅助T淋巴细胞（CD3^＋,CD4^＋）、NK细胞（CD16^＋CD56^＋）均显著升高（P〈0．05），抑制T淋巴细胞（CD3^＋,CD8^＋）降低但差异无统计学意义（P〉0．05），B细胞（CD19^＋）变化不显著（P〉0.05）。热化疗无效者CD3^＋、CD3^＋,CD4^＋、CD16^＋,CD56^＋显著降低（P〈0．05），而CD3^＋,CD8^＋、CD19^＋变化不明显（P〉0．05）。结论肺癌患者免疫功能低下，有效热化疗能提高患者的淋巴细胞免疫功能。临床上对患者外周血淋巴细胞绝对数值的观察，有助于对患者的治疗进行监测。     

CEA-rV治疗CEA阳性肿瘤的实验和应用研究

目的：探讨CEA重组基因痘苗病毒（CEA-rV）对实验动物CEA阳性肿瘤的预防和治疗作用。方法：1）预防组：将实验鼠分为4组．先皮下接种痘苗病毒（1、2组野生型W-VV，3、4组CEA-rV）3次，再分别皮下注射同源鼠肝癌细胞（1、3组Hepa-CEA^-，2、4组Hepa-CEA^＋）。2）治疗组：同样4组，先皮下注射肝癌细胞（1、3组Hepa-CEA^-，2、4组Hepa-CEA^＋），7d后再分别皮下接种痘苗病毒（1、2组W-VV，3、4组CEA-rV）。以后每周测量一次肿瘤大小，并观察动物反应。结果：1）预防组：接种CEA-rV／Hepa-CEA^＋组各鼠在观察期限内无肿瘤形成，而3个对照组各鼠皮下均有肿瘤形成，并且以相近速度快速增长（肿瘤体积平均3．5cm^3）。2）治疗组，接种Hepa-CEA^＋／CEA-rV组小鼠皮下肿瘤生长缓慢，瘤块较小（平均1cm^3），而3个对照组肿瘤生长迅速，瘤块较大（平均5cm^3）。无论预防组和对照组小鼠在整个实验过程中均未表现有毒副反应。结论：CEA-rV对实验性阳性肿瘤具有良好的预防和治疗作用，而且预防作用更佳。     

脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的观察与护理

目的研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标及临床应用中的护理规范.方法分离脐血单个核细胞,用IL-2+CD3Ab诱导CD3AK细胞;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血单核细胞(PBMC)的自然杀伤(NK)活性,静脉滴注过程中严密观察患者体温和脉搏等反应.结果肿瘤患者输注CD3AK细胞一个疗程后,其PBMC的NK杀伤活性由63%升高到81%,平均升高28%,发热反应不到3%,大多在38 ℃以下,未经处理自行消退.结论 (1)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性;(2)CD3AK细胞输注安全有效,无明显副作用;(3)肿瘤患者PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗近期疗效的一个参数.     

CIK细胞治疗恶性肿瘤的临床观察和护理

目的研究用脐血单个核细胞制备CIK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标及临床应用中的护理规范。方法分离脐血单个核细胞,用IL-2,CD3Ab和IFN-У等细胞因子诱导CIK细胞;测定肿瘤患者用CIK细胞治疗前后外周血单核细胞（PBMC）的NK杀伤活性．静脉滴注过程中严密观察患者的体温和脉博等反应。结果肿瘤患者输注CIK细胞一疗程后,其PBMC的NK杀伤活性由62％升高到83％。平均升高29％．发热反应不到3％,大多在38℃以下,未经处理自行清退。结论（1）CIK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性。（2）CiK细胞输注临床应用安全有效,无明显副作用。（3）肿瘤病人PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数。     

一种KRAS基因突变检测方法的建立及初步应用

目的建立一种KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并初步探讨其临床应用价值。方法以KRAS基因热点突变区域12、13密码子为研究位点设计特异性扩增、测序引物,利用已知野生型、突变型样品以TA克隆技术构建相应质粒作为标准品,建立KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并进行方法学和应用评估。结果成功构建了KRAS基因12、13密码子野生型、突变型质粒。建立了KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,该方法灵敏度高(9.39×101copies/uL),重复性好(实时荧光定量PCR部分批内、批间变异系数分别为1.60%、2.54%)。该法与传统Sanger测序法同时检测40例临床样品,结果符合率为100%。结论本研究成功建立了可用于临床样品检测的KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法。     

流式细胞术分析六类肿瘤患者外周血淋巴细胞绝对数值的变化

目的了解六类肿瘤患者的免疫状态,探讨T细胞亚群、NK细胞、B细胞绝对数值与肿瘤的相关性.方法采用流式细胞术检测204例肿瘤患者外周血淋巴细胞(T、Th、Ts、NK、B细胞)绝对数值,其中肺癌71例,肝癌39例,鼻咽癌28例,结肠癌29例,乳癌22例,食道癌15例,并与38例正常对照比较.结果与正常对照组比较,肿瘤患者外周血T细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞绝对数值均降低(P＜0.05),B细胞绝对数值无显著差异(P＞0.05);各数值在不同肿瘤之间无显著差异(P＞0.05).结论肿瘤患者细胞免疫功能普遍低下,T细胞亚群、NK细胞、B细胞绝对数值可作为肿瘤患者免疫功能的监测指标.     

去甲斑蝥素诱导人肾癌786-0细胞凋亡的体外研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）诱导人肾癌细胞株786—0凋亡的机制。方法实验分NCTD组和对照组．分别应用MTT法、流式细胞术和实时定量PCR检测NCTD对体外培养786—0细胞的生长抑制率、细胞周期和凋亡率以及肿瘤凋亡控制因子Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果NCTD能抑制786—0细胞生长,随着NCTD浓度升高、处理时间延长作用增强,有明显的时间-剂量依赖性。流式分析显示,786—0细胞的S期细胞减少,G2/M期细胞增多,凋亡率上升。实时定量PCR结果表明,在80μmol／L NCTD处理24h后,Bcl-2 mRNA表达量明显减少、Bax mRNA表达水平则升高,Bcl-2／Bax比值明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NCTD可明显抑制786—0细胞的增殖和生长,诱导其凋亡,其机制可能与干扰786—0细胞生长周期、抑制DNA合成代谢以及影响凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达有关。     

血清HSP27在原发性肝细胞癌早期诊断中的应用

目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)在原发性肝细胞癌(HCC)早期诊断中的应用.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测正常人、乙肝病毒携带者和HCC患者血清中HSP27的含量,并结合化学发光免疫分析法进行血清甲胎蛋白(AFP)的平行检测.结果 HCC患者平均HSP27水平明显高于正常对照组和HBV携带者.其...     

HSPA5基因3'UTR 区多态性与肝细胞癌的相关性

目的 调查70kDa热休克蛋白5(HSPA5)基因3'非翻译区(UTR)的多态性与HCC发病风险之间的关系.方法 从576例肝细胞癌患者和539例在性别和年龄上匹配的健康对照者外周血中提取DNA,采用TaqMan检测HSPA5基因3'UTR区的rsl6927997、rsll40763和rsl2009.结果 连锁不平衡的分析确定了3种单倍型和6种双倍型.等位基因、基因型、单体型和双体型在肝癌患者和正常对照组之间的分布没有显著差异.结论 本研究表明,HSPA5基因3'UTR的多态性不是有效预测肝细胞癌风险的诊断标志物.