载肝癌细胞GPC3抗体的纳米级脂质超声微泡制备及体外寻靶研究

目的：探索制备载肝癌细胞磷酯酰肌醇蛋白多糖-3（glypican-3,GPC3）抗体的新型纳米级脂质超声微泡造影剂的方法,并评价其体外对肝癌细胞的靶向结合效果。方法：以机械振荡法制备纳米级脂质微泡,并通过光学显微镜及电子显微镜检测纳米微泡大小形态、粒径分布;生物素-亲和素桥接肝癌细胞GPC3抗体与纳米级脂质超声微泡,流式细胞仪检测微泡与抗体结合效率;免疫组化检测常见3种肝癌细胞的GPC3阳性表达;微泡体外与肝癌细胞靶向结合,激光共聚焦显微镜检测寻靶效果。结果：纳米脂质微泡呈圆形,分布均匀,无明显聚集,粒径范围约350~450 nm。微泡与抗体结合效率达85.05%,人SMMC-7721、HepG2及Huh7肝癌细胞GPC3表达阳性,激光共聚焦显微镜显示载GPC3抗体纳米级脂质微泡可与肝癌细胞特异性结合。结论：本研究成功制备了具备靶向性的新型纳米级脂质超声微泡,生物素-亲和素桥接GPC3抗体可特异性结合肝癌细胞,达到靶向性识别效果,为微泡的靶向诊断及治疗研究奠定了基础。     

重症肝病患者医院感染病原菌分布与耐药性分析

目的调查重症肝病患者医院感染病原菌分布特点及其耐药性,为合理使用抗菌药物提供指导依据。方法回顾性收集2011年3月-2013年10月重症肝病监护病房收治的429例重症肝病患者的临床资料,主要包括抗菌药物的使用、基础疾病、病原菌培养基耐药性、治疗及转归进行记录,采用全自动细菌鉴定仪对送检的标本进行病原学检测及耐药性分析,采用SPSS19.0进行统计分析。结果送检标本共检出病原菌株266株,其中革兰阴性菌183株占68.8%,革兰阳性菌62株占27.43%,真菌21株占7.89%;革兰阳性菌中未发现对万古霉素耐药菌,肠球菌属对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶敏感;未发现耐亚胺培南大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。结论重症肝病患者感染的病原菌多为多药耐药菌,掌握病原菌的分布和耐药性,有利于合理开展临床用药工作。     

IL-12、IL-16和IL-17在食管癌患者血清中表达水平及意义

目的 通过检测食管癌患者和正常健康体检者血清中白细胞介素12(Interleukin-12,IL-12)、IL-16和IL-17表达水平,探讨3种细胞因子在食管癌中的作用和临床意义。 方法 随机选取2013年6月-2014年6月在南充市中心医院就诊的食管癌患者51例作为试验组、40例正常健康体检者作为对照组,收集受试者外周静脉血血清,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测受试者IL-12、IL-16和IL-17血清表达水平,利用统计学软件SPSS 16.0,采用独立样本t检验、单向方差分析(One-way ANOVA)和偏相关分析(Partial)对数据进行详细分析。 结果 IL-12、IL-16和IL-17在食管癌患者血清中表达水平均高于正常健康体检者(P<0.01),食管癌患者血清IL-12表达水平明显高于IL-16和IL-17(P<0.01),健康体检者血清IL-12和IL-16表达水平明显高于IL-17(P<0.01);在去除IL-16影响的条件下,食管癌患者血清中IL-12和与IL-17表达水平呈显著正相关(P<0.01);在去除IL-12影响的条件下,食管癌患者血清中IL-16和IL-17表达水平呈显著正相关(P<0.01)。 结论 与正常健康对照组比较,IL-12、IL-16和IL-17在食管癌患者血清中均呈高表达水平,3种细胞因子在食管癌的发生发展过程中具有重要作用,推测在食管癌发生发展过程中存在这3种细胞因子免疫调控失衡,3种细胞因子间的相互影响可能存在复杂的信号传导通路。      

结构特异性核酸酶FEN1对HBV复制的影响

目的探索宿主因子FEN1对HBV复制过程的影响。方法构建FEN1过表达慢病毒质粒,酶切鉴定并测序,转染293FT细胞,Western blot检测FEN1蛋白表达。将该质粒转染HBV复制稳定细胞系,设立慢病毒包装改造质粒pLenti6/V5-D-TOPO和不转染质粒的细胞作为对照。ELISA检测细胞上清,Southern blot及Real-time PCR检测HBV DNA。结果初筛阳性克隆提取质粒酶切鉴定,于FEN1及线性载体质粒大小处出现明亮单一条带,测序结果表明序列插入正确,Western blot检测FEN1蛋白表达量为对照的2～3倍。FEN1过表达质粒转染HBV复制稳定细胞株,细胞上清ELISA检测HBsAg抗原呈阳性,D(450)值为(1.982±0.032);细胞内提取病毒DNA行Real-time PCR,绝对定量拷贝数为1.18×109,Southern blot检测亦表明HBV复制水平明显上调。结论结构特异性核酸酶FEN1能够明显促进HBV DNA复制,是体内一种重要的病毒复制调控因子。     

医学本科免疫学教学方法及技巧

《医学免疫学》具有抽象、复杂、逻辑性与整体性强的学科特点,学习难度大。在课程教学中,注重教学方法及技巧的研究是攻克这一难题的根本。通过教学实践证明:系统化教学内容、运用认知规律,以形象代抽象,由现象入本质,以感官刺激为主的教学模式,辅以教师"专业化"教学的感召力及问题为主的教学手段,能够使学生重振学习兴趣、勤于思考,进而培养出创新型医学高级专门人才。     

医学免疫学教学中“学生过度依赖教材”的调查与分析

医学免疫学教学过程中,“学生过度依赖教材”现象普遍存在,影响了学生创造性思维的开发和培养.研究中,通过随机选取医学本科不同专业学生进行问卷调查,深入分析其形成原因,并提出相应的解决对策,树立正确的教材观,使学生学会学习,并克服“过度依赖教材”的现状.     

A型肉毒毒素对神经病理性疼痛模型大鼠P物质含量的影响

目的:研究A型肉毒毒素(botulinum toxin type A,BTX-A)对神经病理性疼痛模型大鼠P物质(substance P,SP)含量的影响。方法:5%福尔马林50μL皮下注射于大鼠额区及颞区,建立疼痛模型。BTX-A组局部皮下注射10 U/kg BTXA,同时设立生理盐水组及空白对照组,放射免疫法测定SP含量。结果:生理盐水组SP含量高于空白对照组(P<0.05),BTX-A组低于生理盐水组(P<0.05)。结论:BTX-A可能通过抑制感觉通路神经肽-SP的释放减轻神经病理性疼痛症状。     

猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建的调节效应★

目的：人脐血造血干细胞得以移植于小鼠体内，其理论基础是放射线照射使小鼠骨髓枯竭，龛位腾出，为移植的脐血造血干细胞提供空间，而猪苓多糖是从中药猪苓中提取的多糖成分，具有免疫调节抗肿瘤作用，也是一种非T细胞促有丝分裂素，对放射线照射有一定的防护作用。观察猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建效应。 方法： 实验于2004-06/2006-05在兰州大学基础医学院免疫研究所完成。①实验材料：清洁级BALB/c小鼠由兰州生物制品研究所提供，8周龄，体质量约20 g，雌雄各半，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。脐血样本由兰泰医院妇产科提供，产妇及家属对实验知情同意，并经医院伦理委员会批准。猪苓多糖由兰州大学第一医院提供。②实验方法：应用20，17.5，12.5，7.5 mg/L猪苓多糖体外扩增培养脐血造血干细胞，并测定细胞增殖率及CD34+细胞数。将BALB/c小鼠分为正常对照组：尾静脉、腹腔注射等量生理盐水；照射空白组：3.5Gy经60Coγ放射线照射联合尾静脉、腹腔注射等量生理盐水；照射药物组：3.5Gy经60Coγ放射线照射联合尾静脉注射等量生理盐水、腹腔注射猪苓多糖；照射移植组（n =15）：3.5Gy经60Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射等量生理盐水；照射移植药物组：3.5Gy经60Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射猪苓多糖。③实验评估：观察小鼠生存状况及血常规变化，流式细胞仪测定CD3、CD4、CD8、CD19水平。 结果：57只小鼠均进入结果分析。①12.5 mg/L猪苓多糖增殖效率最为显著（P < 0.01），流式细胞仪测定显示CD34+细胞数扩增了6.33倍。移植药物组小鼠死亡率最低，死亡高峰集中在照射移植后7~14 d左右。②移植药物组小鼠血象恢复正常，并且时间明显短于其他实验组（P < 0.05）。③细胞及体液免疫恢复情况，移植药物组小鼠各项指标水平与正常小鼠无差别（P > 0.05），与其他各组小鼠比较，除CD4、CD19水平与照射移植小鼠无差别外均有差别（P < 0.05）。 结论：猪苓多糖对脐血造血干细胞有明显扩增作用，并能促进脐血造血干细胞移植小鼠免疫造血重建。     

猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建的调节效应

目的:人脐血造血干细胞得以移植于小鼠体内,其理论基础是放射线照射使小鼠骨髓枯竭,龛位腾出,为移植的脐血造血干细胞提供空间,而猪苓多糖是从中药猪苓中提取的多糖成分,具有免疫调节抗肿瘤作用,也是一种非T细胞促有丝分裂素,对放射线照射有一定的防护作用.观察猪苓多糖埘脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建效应.方法: 实验于2004-06/2006-05在兰州大学基础医学院免疫研究所完成.①实验材料:清洁级BALB/c小鼠由兰州生物制品研究所提供,8周龄,体质耸约20g,雌雄各半,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.脐血样本由兰泰医院妇产科提供,产妇及家属对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准.猪苓多糖由兰州大学第-医院提供.②实验方法:应用20,17.5,12.5,7.5 mg/L猪苓多糖体外扩增培养脐血造血干细胞,并测定细胞增殖率及CD34 细胞数.将BALB/c小鼠分为正常对照组:尾静脉、腹腔注射等量生理盐水:照射空白组:3.5C,y经60Coγ放射线照射联合尾静脉、腹腔注射等量生理盐水;照射药物组:3.5Gy经60Coγ放射线照射联合尾静脉注射等量生理盐水、腹腔庄射猪苓多糖;照射移植组(n=15):3.5Gy经60Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射等量生理盐水;照射移植药物组:35Gy经60Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射猪苓多糖.③实验评估:观察小鼠生存状况及血常规变化,流式细胞仪测定CD3、CD4、CD8、CD19水平.结果:57只小鼠均进入结果分析.①12.5 mg/L猪苓多糖增殖效率最为显著(P＜0.01),流式细胞仪测定显示CD34 细胞数扩增了6.33倍.移植药物组小鼠死亡率最低,死亡高峰集中在照射移植后7～14d左右.②移植药物组小鼠血象恢复正常,并且时间明显短于其他实验组(P＜0.05).③细胞及体液免疫恢复情况,移植药物组小鼠各项指标水平与正常小鼠无差别(P＞0.05),与其他各组小鼠比较,除CD4、CD19水平与照射移植小鼠无差别外均有差别(P＜0.05).结论:猪苓多糖对脐血造血干细胞有明显扩增作用,并能促进脐血造血干细胞移植小鼠免疫造血重建.