FHL2在大肠癌组织中的表达及其作用

目的:探讨FHL2基因在大肠癌中的表达及其临床意义.方法:用免疫组织化学方法检测35例大肠癌组织、15例大肠息肉组织和15例正常结肠黏膜组织中FHL2蛋白的表达情况,并分析其与相关临床病理因素的关系.结果:FHL2蛋白表达阳性率在大肠癌组织中显著高于正常大肠黏膜组织和大肠息肉组织.结论:FHL2蛋白在大肠癌组织中高度表达,但表达程度与癌症病理分级无明显相关性.     

聚己内酯的细胞毒性和动物急性毒性实验

目的:研究聚己内酯(PCL)对L 929细胞生长抑制作用的影响及其对小鼠急性毒性的作用.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和吖啶橙荧光染色法研究不同浓度的PCL浸提液对L 929细胞生长抑制的影响;选用清洁级昆明种小鼠进行了动物急性毒性实验研究.结果:不同浓度的PCL浸提液对L 929细胞在2,4,7 d显示毒性级别分别为1级,0级,0级,PCL各处理组细胞与正常对照组细胞的凋亡指数差异无显著性.日给药量20 g·kg-1时,给药组小鼠行为活动正常,与对照组小鼠的体重相比差异无显著性.结论:高分子材料PCL符合生物体应用的基本要求,安全无毒有较佳的生物相容性.25%PCL混悬液小鼠灌胃给药,对小鼠基本无毒.     

p21活化激酶1基因在大肠癌细胞中的表达及意义

目的 探讨p21活化激酶l（PAK1）基因在大肠癌细胞中的表达及意义。方法 运用免疫印迹技术检测PAK1基因在8株不同转移和恶性潜能大肠癌细胞（LoVo、SW480、SW620、SW1116、HT29 HCT116和CO-LO320细胞）中的表达。结果 与HCT116、HT29、SW480、SW1116和LST细胞相比,PAK1在LoVo、COLO320和SW620大肠癌细胞中蛋白表达明显增加,而HT29和SW480细胞中的PAK1蛋白表达亦强于SW1116和LST细胞,但PAK1在SW1116和LST细胞几乎无表达。结论 PAK1蛋白过度表达可促进大肠癌的发生、发展,且可能与大肠癌的恶性生物学表型密切相关。     

大肠癌组织微环境上皮-间质分子和极性分子的研究进展

结肠癌、直肠癌传统上是西方富裕国家最常见的恶性疾病,在过去几十年来,世界格局发生了变化,随着亚洲发展中国家的经济发展,结肠癌、直肠癌发病率急剧上升.到2030 年,全球结肠癌、直肠癌负担预计将增加60 ％,新增病例将超过220 万,死亡病例将超过110万[1].结直肠癌是一种高度侵袭性的癌症,许多病人死于此疾病,该病已成为中国第5 位癌症相关死亡的主要原因[2].结直肠癌的发病机制尚不清楚,但究其病因是多因素、内部和外部因素共同所致.基因多态性与结直肠癌的相关性有助于预测病程并采取预防措施,确定特定药物治疗的潜在目标[3].为提高病人的存活率,新的生物标记物在结肠癌、直肠癌诊断或预后的应用十分重要[4].细胞极性对组织稳态至关重要,细胞的顶端-基底极性破坏,开启和推动癌症多种类型的进展.维持细胞极性的常见分子有 E -cadherin 和Crumbs3等.维持细胞组织结构和生理功能的细胞外基质蛋白有Collagen type I (Col-I)和Hyaluroni-dase-1 (Hyal-1 ).实体瘤与周围微环境协同,促进肿瘤生长和转移.因此,研究肿瘤细胞和其微环境中的组件可以阐明发病机制,提供更多癌症早期诊断和预防的有效方法.     

靶向抑制存活素基因对大肠癌细胞SW80侵袭和转移的实验研究

目的 构建靶向存活素(survivin)基因的短发夹干扰RNA(shRNA)表达载体,导入人大肠癌细胞SW480中,研究靶向抑制survivin基因对SW480细胞侵袭和转移的影响.方法 根据siRNA设计原则,在survivin序列中选取设计含19个核苷酸(19 nt)的靶序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成shRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制survivin基因的sihNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin;采用Lipofectamine 2000TM转染试剂将干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入到大肠癌细胞SW480中;用Western blotting从蛋白水平检测干扰效果;分别采用肿瘤侵袭粘附实验和明胶酶谱分析法检测pRNAT-U6.1/Neo-survivin对SW480细胞的侵袭和转移潜能的影响.结果 Survivin基因的蛋白表达均得到显著抑制;沉默SW480的survivin基因可以显著抑制SW480细胞的侵袭和转移潜能,而且survivin基因表达被抑制后,SW480细胞分泌基质金属蛋白酶明显减少.结论 Survivin基因可能在SW480的侵袭和转移潜能中起重要作用,沉默SW480的survivin基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶分泌,因而survivin影响SW480的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.     

乳链菌表达hGM-CSF基因的拼装及其载体pNCSF构建

目的 体外拼装适合在乳酸链球菌表达的人粒-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte—macrophage colony stimulatingfactor，hGM—CSF），并构建载体pNCSF。方法 根据hGM-CSF的氨基酸序列及乳酸链球菌偏好的密码子，将hGM—CSF基因外显子的全长碱基序列用DNAWORKS程序设计成16条互补的寡核苷酸片段，并且分别在第1条和第16条寡核苷酸片段上分别设计PstⅠ和BamHⅠ酶切位点，将相同终浓度的寡核苷酸混合进行PCR反应，完成hGM-CSF基因拼接，得到目的基因片段，对寡核苷酸片段进行拼装和扩增．产物稀释后进一步纯化扩增，在Tag酶存在的条件下对产物两末端加T，然后TA克隆于pGEM T easy载体中，经酶切鉴定得到阳性克隆并经测序验证。然后亚克隆于含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000载体。结果通过PCR得到420左右目的DNA片段，获得了hGM—CSF和pNCSF阳性克隆。其DNA测序结果与设计序列完全一致。结论 运用基因拼装及克隆技术成功拼装了hGM—CSF基因及构建了载体pNCSF，为乳酸链球菌表达重组hGM—CSF奠定了基础。     

EST治疗胆总管结石术后复发因素分析

目的探讨EST治疗胆总管结石术后结石复发的各种危险因素。方法按逆行胰胆管造影常规操作的方法,行EST切开、取石,对患者进行随访5～8年,对结石复发与相关危险因素进行多因素Logistic回归,共分析病例资料560例。结果胆囊切除术、结石大小、十二指肠憩室、胆管角度与EST取石后结石复发有关。结论了解相关危险因素,从而预测EST后胆总管结石的复发,对于临床减少结石复发率,为患者选择合适的治疗方案、降低结石复发率,减轻患者痛苦都具有重要意义。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体的构建

目的:构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体,为进一步研究人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在乳链菌的表达及其治疗价值奠定基础。方法:实验于2005-04/2006-03在南方医科大学南方医院消化病研究所完成。①载体pNCSF的构建:将质粒集落刺激因子及含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000质粒分别加入BamH Ⅰ和Pst Ⅰ进行双酶切,并用Apa Ⅰ、Sac Ⅰ进行双酶切鉴定,重组质粒命名为pNCSF。②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFGFP的构建:将经过优化适合在乳链菌表达的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因克隆于含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000载体,得到重组质粒pNCSF;同时设计上下游引物经PCR扩增增强荧光表达蛋白(EGFP),TA克隆后经测序验证,再连接于pNCSF获得重组质粒pNCSFGFP。③载体pTRCSF、pTRCSFGFP的建立:将获得的pNCSF和pNCSFGFP进一步克隆于穿梭载体pTR1001c,以获得人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳链菌表达载体pTRCSF及pTRCSFGFP。结果:①载体pNCSF构建结果:酶切鉴定产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后,发现有(含启动子P59、信号肽USP45、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)720bp的目的片段。②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFEGFP的构建结果:SDGFP阳性克隆产物经EcoRⅠ酶切鉴定得到775bp目的片段。pNCSFEGFP酶切鉴定产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后,发现有(含启动子P59、信号肽USP45、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、SDGFP)1495bp的目的片段。③穿梭质粒pTRCSF、pTRCSFGFP酶切鉴定结果:经Xba Ⅰ、Sac Ⅰ进行双酶切鉴定,分别得到约717bp、1492bp大小目的片段。结论:获得了人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳链菌表达载体pTRCSF及pTRCSFGFP,并经酶切鉴定和测序证实。     

前列环素及血栓素与慢性肝病的研究进展

<正>前列环素(Prostacyclin,PGI2)、血栓素(Thromboxance A2,TXA2)作为一对调节血管紧张度及血小板凝聚的因子,经国内外研究证实其与多种慢性肝病的发生发展有密切的关系。现就近几年关于前列环素及血栓素在不同慢性肝病中的变化研究作一综述。一、前列环素及血栓素与肝硬化前列环素及血栓素与肝硬化有密切的关系,肝硬化的多种     

大肠癌中干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因表达及其临床意义

大肠癌（colorectal cancer,CRC）是消化系统常见恶性肿瘤,早期诊断还缺乏简易有效的手段,筛选大肠癌的肿瘤标志物十分必要.我们通过血清学筛选重组cDNA表达文库（SEREX）方法筛选出干扰素诱导的跨膜蛋白-1（interferon-induced transmembrane protein-1,IFITMP-1）基因,进一步研究其在大肠癌中的表达及临床意义.