人重组阿片受体样受体在CHO细胞稳定表达系统的建立

目的：在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞上稳定转染人重组阿片受体样受体（hORL1）,为体外高通量筛选hORL1受体作用药物及相关药物分子机制研究奠定基础。方法：用脂质体介导法将pcDNA3.1（＋）-hORL1重组质粒稳定转染到缺乏hORL1的CHO细胞中,然后用含G418的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆;用放射性配体-受体结合实验进一步筛选阳性克隆,对阳性克隆受体亲和力和表达量进行分析,用[35S]GTPγS结合实验分析表达受体的功能。结果与结论：在稳定转染hORL1的克隆细胞中,[3H]伤害感受肽的Kd和Bmax值分别为（0.44±0.21）nmol/L和（0.35±0.06）pmol/mg蛋白。伤害感受肽刺激受体结合[35S]GTPγS的EC50值为3.45nmol/L。以上结果与文献报道的天然hORL1受体的特性相似,说明该细胞株表达的hORL1受体与天然的hORL1受体具有基本一致的生物学特性,证实成功建立了稳定表达人阿片受体样受体的细胞模型。