广西五步蛇毒小肽的分离纯化及抗肿瘤作用

目的：从广西五步蛇毒分离出小分子活性组分，研究其对肿瘤细胞株的抑制作用。方法：经Sephadex G-75凝胶过滤、超滤和DEAE—Sepharose—CL-6B离子交换层析法从广西五步蛇毒中分离纯化获得一种小分子的肽类，采用MTT法检测其对多种体外培养的癌细胞株的生长抑制情况。结果：从广西五步蛇毒中分离纯化得到的单一的小肽，其对卵巢癌细胞株（A2780）、人胃癌细胞（SGC-7901）以及鼠乳腺癌细胞株（782）有抑制作用并呈明显的剂量依赖关系，作用24h的IC50分别为0．264、0．648、0．173μg／mL。结论：应用凝胶过滤和离子交换层析方法可以从广西五步蛇毒中分离出单一组分的小分子肽，其对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用。     

三七花总皂苷清除活性氧自由基及抗脂质过氧化作用研究谢云峰谢集照龙盛京邱莉李映新张莹

目的：探讨三七花总皂苷清除活性氧自由基及对抗脂质过氧化作用的影响。方法从三七花盘中提取三七花总皂苷,D-101大孔吸附树脂分离纯化皂苷;采用分光光度法测定其对羟基自由基、DPPH 自由基的作用。用硫代巴比妥分光光度法观察三七花总皂苷对 Fe2＋半胱氨酸诱发肝脂质过氧化作用的影响。结果三七花总皂苷对羟自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的半数清除率（IC50值）分别为0.035 mg/ml、0.094 mg/ml;对Fe2＋半胱氨酸诱发肝脂质过氧化的最大抑制率为89.31%,具有较强的抑制作用。结论三七花总皂苷具有清除活性氧自由基及抗脂质过氧化作用。     

广西尖吻蝮蛇毒小分子多肽组分对A2780细胞抑制作用的研究

目的探讨广西尖吻蝮蛇毒小分子多肽组分(K组分)对人卵巢癌细胞株A2780的增殖抑制作用以及作用机制。方法采用MTT法检测K组分对癌细胞株的生长抑制情况;黏附实验观察K组分抗细胞黏附作用;采用AO-EB双荧光染色和流式细胞术检测凋亡的发生。结果 K组分对人卵巢癌细胞株A2780的增殖有抑制作用并呈明显的时-效及量-效关系,能够对抗细胞和FN的黏附。AO-EB双荧光染色和流式细胞术都检测到细胞凋亡。结论 K组分对体外培养的人卵巢癌细胞株A2780的增殖有显著的抑制作用,作用机制可能与抗细胞黏附,诱导细胞凋亡有关。     

六月青一种木脂素苷的体外抗氧化活性

目的: 研究六月青一种木脂素苷(6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol的抗氧化活性。 方法: 采用酶标仪微量法和紫外-可见光分光光度法,以维生素C为阳性对照,分别测定(6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol对1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH ·)自由基、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O^-₂·)的清除能力。 结果: (6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol对DPPH·(半数清除率IC₅₀ 8.11 mg·L^-1),·OH(IC₅₀ 21.61 mg·L^-1)和O^-₂·(IC₅₀ 10.30 mg·L^-1)均具有清除作用,且呈明显的量效关系。 结论: (6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol在体外有明显的抗氧化作用。     

玉郎伞提取物对大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨玉郎伞（YLS）提取物对大鼠急性肺损伤（ALI）的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为7组,分别为正常组,模型组,阳性对照组（地塞米松,3 mg·kg^-1）,玉郎伞水提物（TYLS）高、低剂量组（按生药量计60,30 g·kg^-1）,YLS总黄酮（FYLS）高、低剂量组（0.1,0.05 g·kg^-1）,每组动物连续灌胃给药7 d,于末次给药后30 min,采用腹腔注射20%酵母混悬液5 mL·kg^-1 2次诱发大鼠急性肺损伤模型。最后测定肺组织的湿干比重（W/D）和肺组织髓过氧化物酶（MPO）的活性,免疫组化法测定大鼠肺组织中核因子-κB p65（NF-κB p65）的表达、ELISA法测定肺组织白介素-1β（IL-1β）的含量,并HE染色观察肺组织病理形态改变。结果：与正常组比较,模型组肺W/D和MPO活性增大、肺组织IL-1β含量增加、NF-κB p65表达升高（均P<0.01）,肺组织有炎性病理改变。与模型组比较,TYLS高、低剂量组（4.31±0.15）,（4.72±0.35）及FYLS高剂量组（4.74±0.23）肺W/D低于模型组（5.01±0.33）（P<0.05,P<0.01）;TYLS高剂量组及FYLS高剂量组的肺MPO活性为（1.000±0.304）,（0.956±0.139）U·g湿片^-1,肺IL-1β含量为（265.58±47.05）,（222.31±53.99）ng·L^-1,肺组织细胞NF-κB p65阳性率为（51.00±8.62）%,（48.88±11.80）%,均比模型组明显降低（P<0.05,P<0.01）;另外,从组织病理学角度上看,TYLS及FYLS组肺损伤程度也有所减轻,以高剂量组较为明显。结论：预先给予TYLS或FYLS可明显减轻ALI大鼠肺组织炎症反应及肺水肿程度,其机制可能是通过干扰NF-κB途径从而抑制IL-1β生成。     

高效液相色普法测定兔灌胃后血清中百草枯浓度及其变化特征

目的 探索建立高效液相色谱法（HPLC）在测定兔血清中百草枯浓度的可行性,并观察不同剂量 百草枯灌胃后兔血清浓度的经时变化情况。方法 12 只家兔按照随机数字表法分为两组,每组6 只,分别灌胃 给予100 mg/kg（高剂量组）和20 mg/kg（低剂量组）百草枯,于给药后1、2、5、12、24、48 及72 h 采集血 清,血清用乙腈直接沉淀蛋白处理后进行高效液相测定。色谱柱条件：流动相为0.1 mol/L 磷酸缓冲液（含 12.5 mmol/L 庚烷磺酸钠）- 乙腈（90 ︰ 10,TFA 调pH=2.8）,流速为1.0 ml/min,检测波长为258 nm,柱温为 30℃。结果 所建立的方法在0.2 ～ 100.0 mg/L 浓度范围内线性关系良好（r =0.999）。相对回收率在97.82% ～ 101.20% 之间,绝对回收率在84.37% ～ 88.80% 之间,日内和日间精密度（RSD）<5%。百草枯血药浓度时间 曲线为单峰,无论是高剂量组还是低剂量组,给药2 h 后其血清浓度达到峰值,之后逐渐下降,其中,高剂量组于 给药后72 h 后检测不出百草枯,低剂量组于药后24 h 检测不出百草枯。重复测量设计的方差分析结果显示, 不同时间点间、不同剂量组间的百草枯浓度及高、低剂量组随时间变化趋势差异有统计学意义。结论 所建 立的HPLC 方法可用于测定兔血清百草枯浓度,不同剂量百草枯兔灌胃后其血清浓度和蓄积的时间与剂量有 关,给药2 h 后血药浓度达峰值。     

尖吻蝮蛇毒活性肽K组分的研究

目的从尖吻蝮蛇毒中分离纯化一种小分子活性肽K组分,测定其理化性质及生物学活性。方法经Sephadex G-75凝胶过滤,超滤,DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析法分离纯化活性肽K,采用高效液相鉴定纯度,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子量,等电聚焦法测定等电点,用比浊法测定其抗血小板聚集活性,通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测K组分对血管生成的影响。结果从尖吻蝮蛇毒中分离相对分子量约为7 862D,等电点为4.29的组分。该组分能抑制由二磷酸腺苷(ADP)、胶原(collagen)、凝血酶(thrombin)诱导的血小板聚集并成剂量依赖性;具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论从尖吻蝮蛇毒中纯化出活性肽K,该组分有很强的抗血小板聚集和抗血管生成作用。     

17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮对心肌细胞内游离钙浓度及L-型钙电流的影响

目的:研究17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮(YLSC)对H2O2诱导的心肌细胞内钙超载的拮抗作用及对L型钙电流(ICa-L)的影响.方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,实验分为①正常对照组;②H2O2组:上机前加入终浓度为0.3 mmol·L-1的H2O2;③预先给予低、中、高不同终浓度YLSC药物处理组:分别给予100,200,400 μmol·L-1YLSC的无血清培养基,孵育24 h,上机前加入终浓度为0.3 mmol· L-1H202,以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入H202后15 min内检测细胞内[Ca2+]i的变化;分离昆明种小鼠单个心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录YLSC对ICa-L的影响.结果:①与正常对照组比较,H202诱导的模型组细胞内[Ca2+]i增加60.43％±7.75％,而高、中、低YLSC预处理组[Ca2+]i分别增加38.39％±13.87％,14.49％±2.94％,-28.1％ ±1.52％,与模型组比较显著降低(P＜0.01).②YLSC可使心室肌细胞ICa-L的电流-电压(Ⅰ-Ⅴ)关系曲线上移,能改变ICa-L的激活和失活特征,使ICa-L的激活曲线和稳态失活曲线左移.结论:YLSC对心肌细胞钙离子通道有较好的阻断作用,能显著减轻H2O2诱导的心肌细胞内[Ca2+];超载.     

广西尖吻蝮蛇毒K组分抗血管生成活性研究

目的探讨广西尖吻蝮蛇毒小分子多肽组分（K组分）对血管生成的抑制作用。方法采用噻唑蓝法检测K组分对培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304的生长抑制情况,结晶紫法测定K组分对ECV304细胞的黏附抑制作用,鸡胚尿囊实验观察K组分对血管生成的影响。结果K组分对人脐静脉内皮细胞株ECV304的增殖有抑制作用并呈明显的时 效及量 效关系,能够抑制ECV304细胞与纤维连接蛋白的黏附和鸡胚尿囊血管生成。结论广西尖吻蝮蛇毒K组分对血管生成有抑制作用。