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二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立 总被引:1,自引:4,他引:1
目的寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。方法实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNALadder、凋亡相关蛋白的检测。结果3.6mg.L-1DADS作用HL-60细胞1d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2~6d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。DADS作用1、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3~5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P<0.05)。DADS作用2~5d撤药后再培养至d6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P<0.05)。处理2~5d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P<0.05)。处理组中DADS处理4d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2~5d撤药后再培养至d6均出现明显梯状条带。Westernblot结果表明,从作用2d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调。结论3.6mg.L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2d。 相似文献
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Cdc25C cyclin B1在二烯丙基二硫化物诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人胃癌BGC823细胞的增殖及细胞周期的影响以及Cdc25C、cyclin B1的作用。方法:采用MTT法检测BGC823细胞的生长活性;流式细胞术分析DADS对细胞周期分布的影响;Western blot观察DADS对Cdc25C蛋白、cyclin B1蛋白表达的影响。结果:MTT比色实验结果显示,DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用,且呈显著的剂量-效应依赖关系(P〈0.05)。流式细胞分析发现,DADS作用12h时,G2/M期细胞增加到30.1%;24h时增加到58.1%;36h达50.2%(P〈0.05)。Westernblot结果表明,DADS呈时间依赖性抑制人胃癌BGC823细胞周期Cdc25C磷酸酶的表达,cyclin B1表达在DADS处理24h后开始下降(P〈0.05)。结论:DADS可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制Cdc25C、cyclin B1表达使部分BGC823细胞停滞在G2/M期。 相似文献
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本文主要围绕奥林巴斯电子内窥镜,介绍其CLV—U40型冷光源出现气压不足现象时的故障分析及解决办法。 相似文献
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目的 构建维甲酸相关孤核受体α(RORα)基因的真核表达载体,并建立稳定高表达RORα的人胃癌MGC803细胞,为研究RORα的功能奠定基础。方法根据RORα基因的cDNA全序列,设计一对带有限制性酶切位点的引物。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成RORα cDNA第一链,并用上述引物扩增目的基因全序列,然后经双酶切插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),转化大肠杆菌DH5α;用氨苄青霉素筛选pcDNA3.1(+)-RORα的阳性菌株,双酶切和测序进行鉴定。用经鉴定的重组质粒pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞,G418筛选获得RORα/MGC803细胞株;Real-time PCR和Western blot检测该细胞株RORα的表达情况。结果经双酶切鉴定,构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα包含有大约1 640 bp的插入片段,与预期大小一致;表达载体经测序鉴定,其插入片段碱基序列与RORα基因的cDNA序列完全一致。用构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞后,筛选到可稳定传代的RORα/MGC803细胞株。Real-time PCR与Western blot检测显示,RORα/MGC803细胞RORα mRNA和蛋白表达增高。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα和建立高表达RORα基因的RORα/MGC803细胞。 相似文献
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目的 探讨胃癌初诊患者血清miR-20a的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法 采集45例原发胃癌初诊患者血清,应用实时定量PCR(qRT-PCR),加入cel-miR-39作为数据标准化指标,检测血清miR-20a的表达量。结果 胃癌患者血清中miR-20a表达与胃癌分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。低分化组血清miR-20a表达水平明显高于中分化组和高分化组。miR-20a在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清中的表达水平明显高于Ⅰ期,有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组。miR-20a的表达与患者的性别、年龄无明显相关性。结论 胃癌患者血清miR-20a表达与胃癌分化程度、临床分期及淋巴结转移相关,可能用于胃癌早期诊断和病情监测。 相似文献
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