重组人canstatin的克隆、表达及其活性鉴定

目的: 克隆并表达canstatin基因，初步检测其抑制血管生成的活性。方法: 采用RTPCR方法从人胚肝组织中钓取canstatin cDNA，克隆入pMD18T载体中，并测序鉴定。在QIA表达系统中表达，Ni柱亲和层析纯化。进行生物学活性鉴定。结果: 经序列分析所获684 bp人canstatin基因与报道一致，重组进pQE30表达载体，IPTG诱导表达并纯化成功，表达产物能明显抑制血管生成。结论: 成功构建人canstatin cDNA克隆和表达载体并在大肠杆菌M15中高效表达。纯化回收产物在鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）实验中具有明显抑制血管生成活性     

服务质量差距模型在手术室护理管理中的应用价值

目的探讨服务质量差距模型在手术室护理管理中的应用效果。方法选择在重庆市万盛经开区中医院住院治疗的择期手术患者为研究对象,分为A组和B组,A组87例患者仅进行手术室常规护理,而B组98例患者则在服务质量差距模型指导下采取针对性的护理措施,比较A组和B组患者焦虑、抑郁情绪和对护理服务满意度。结果入组时,两组患者焦虑、抑郁情绪标准分差异无统计学意义（P〉0.05）,术后2 d,B组患者焦虑抑郁情绪标准分明显高于A组,差异有统计学意义（P〈0.05）,出院时,B组患者对手术室护理人员护理服务的满意度均明显高于A组患者,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论服务质量差距模型应用效果较好,值得进一步推广。     

血管基膜衍生多功能肽基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定

目的:利用PCR技术从含有目的基因的质粒pGEX- 4T- 1 -VBMDMP获得带有SnabI和NotI酶切位点并融合有GST的目的基因片段并测序鉴定,将PCR产物纯化、酶切、回收,克隆到pPIC9K载体,转化入大肠杆菌DH5a扩增,用琼脂糖凝胶电泳,限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定。方法:BglⅡ线性新构建的表达载体pPIC9K- GST- VBMDMP ,然后用原生质体转化法转化毕赤酵母细胞,并用pPIC9K空质粒也转入酵母细胞进行对照。用煮 冻 煮法裂解已转化有目的基因的毕赤酵母细胞提取DNA并行PCR鉴定,获得阳性重组子,行多克隆筛选和表型鉴定。筛选His+ Muts 表型的转化子,在MGY液体培养基中30℃摇床培养,每2 4h从培养基中转移1ml培养基上清于- 70℃保存,并保持培养瓶中培养基的量和培养基中甲醇0 .5 %的浓度不变,8d后行SDS -PAGE检测表达的蛋白,用GlutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化获得GST- VBMDMP融合蛋白;用凝血酶切割GST- VBMDMP并分离获得VB MDMP。结果:发现VBMDMP能够抑制鼠主动脉内皮细胞管状结构的形成;同时(VBMDMP 10mg/kg ,6mg/kg ,2mg/kg)对小鼠Lewis肺癌原发瘤具有显著抑制作用(瘤重抑制率分别为96 .6 % ,82 .1% ,6 1.2 % )。VBMDMP(GST -VB- MDMP 10mg/kg ,6mg/kg ,2mg/kg)对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移具有显著抑制作用(自发?     

多学科合作快速康复外科理念在腹腔镜腹股沟疝修补术围手术期的应用

目的:探讨以多学科团队(MDT)合作为基础的快速康复外科(ERAS)在腹腔镜腹股沟疝修补术围手术期应用的可行性及有效性。方法:将782例行择期腹腔镜腹股沟疝修补术的患者按入院顺序随机分为ERAS组(392例)和对照组(390例)。对照组接受常规治疗护理;ERAS组接受MDT合作ERAS理念的治疗护理,主要干预措施包括住院模式选择,医护一体化健康教育,饮食要求,胃肠道准备,尿潴留预防,术后早期活动,伤口疼痛预防,麻醉前给药,防止术中低温,围手术期补液管理,术后恶心、呕吐预防及1个月患者舒适度评价等。比较两组患者术后疼痛、恢复情况、并发症与应激反应发生率、术后舒适度等。结果:与对照组比较,ERAS组术后次日清晨NRS疼痛评分降低,恢复正常饮食时间、下床活动时间、住院时间均减少,术后满意率增加,血清肿、尿潴留、伤口感染等并发症与不适感、恶心反应的发生率降低,术后1个月中位腹股沟疼痛调查表评分降低(均P0.05)。结论:在腹腔镜腹股沟疝修补术患者围手术期中采用MDT合作ERAS理念可以减轻患者不适,加速康复,缩短住院时间,提高患者满意度及舒适度。     

血管基膜衍生多功能肽在大肠杆菌中的表达及抗肿瘤活性的测定

目的 构建血管基膜衍生多功能肽(VBMDMP)原核表达载体、诱导表达GST-VBMDMP融合蛋白,观察其对Lewis肺癌自发转移瘤模型的影响。方法 人工合成VB-MDMP DNA序列(人源性IgG3上游铰链区连接肽连接的Tumstatin的两个功能区获得性肽基因序列),构建克隆载体PUC19-VBMDMP,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体上,经测序和酶切分析鉴定获得了未发生移码突变的PGEX-4T-1-VBMDMP融合载体质粒。转化入大肠杆菌后,用 IPTG诱导表达融合蛋白。Glutathione sepharose 4B层析柱纯化蛋白表达产物。采用Lewis肺癌自发转移瘤模型,检测VBMDMP的抗肿瘤作用。结果 成功的构建pUC19-VB-MDMP克隆和pGEX-4T-1-VBMDMP表达载体,在大肠杆菌获得稳定表达,用Glutathione sepharose 4B层析柱获得纯化的GST-VBMDMP融合蛋白。VBMDMP(GST-VBM-DMP 10、6、2 mg·kg~(-1))对小鼠Lewis肺癌原发瘤具有抑制作用(瘤重抑制率分别为95.5％,80.4％,60.05％)。VBMDMP(GST-VBMDMP 10,6,2 mg·kg~(-1))对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移具有抑制作用(自发性肺转移瘤结节抑制率分别为94.8％,86.4％,73.9％)。结论 VBM-DMP对小鼠Lewis肺癌原发瘤和肺转移具有抑制作用。     

MicroRNA-34用于肿瘤治疗的基础研究简

MicroRNA-34（miR-34）调节多条信号通路上的靶基因发挥阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,抑制肿瘤干细胞、抑制转移以及化疗增敏的作用,从而抑制肿瘤的生长与转移。越来越多的证据表明,miR-34有可能成为肿瘤治疗的新靶点。本文综述了miR-34家族的生物学功能及其分子机制,以及在动物肿瘤模型中开展miR-34相关基因治疗的前期研究,揭示了miR34用于肿瘤临床治疗的可能性。     

膜-细胞骨架连接分子Ezrin与肿瘤转移

Ezrin是ERM(Ezrin/Rad ixin/Moesin)家族的重要成员,是真核细胞膜蛋白-细胞骨架的桥梁分子。参与细胞形态学,细胞黏附、运动、细胞骨架的重塑及信号转导过程。Ezrin在不同肿瘤组织中的表达异常,推测它可能参与肿瘤细胞的侵袭转移,但表达的不一致提示Ezrin在不同肿瘤的进展和转移中发挥着不同的作用。     

护士长在医院护理管理中的作用

护理管理是管理科学在护理管理工作中的具体应用,是医院管理的重要组成部分,护士长是临床护理最基层、最直接的管理者,其管理水平的高低,直接影响着临床护理质量。充分发挥科室成员的主观能动性;以人为本,发挥每一位护士的特点和潜能;全面提高护士长自身素质;激励考核,奖惩结合等方面就如何提高护士长管理艺术提出了自己的建议和看法。     

血管基膜衍生多功能肽基因克隆、表达及空间构象分析

目的：构建血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体，并对血管基膜衍生多功能肽氨基酸序列进行空间结构分析预测。方法：用人源性IgG3上游铰链区连接肽连接的Tumstatin的2个功能区片段，即血管基膜衍生多功能肽(VBMDMP)，利用合成的3条长引物片段，进行PCR扩增。克隆到pUC19载体，酶切和测序鉴定。亚克隆构建原核表达载体pGEX4T1VBMDMP,IPTG诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达产物。用Glutathione Sepharose 4B层析柱进行了亲和层析鉴定。将VBMDMP序列输入计算机，利用Antheprot软件分析。结果：血管基膜衍生多功能肽（VBMDMP）基因经限制性内切酶酶切和测序鉴定，其大小和核苷酸序列正确，与设计完全一致。获得了原核表达融合蛋白GSTVBMDMP。Antheprot分析显示，人IgG3上游铰链区连接后的Tumstatin的2个功能区域能自由伸展。结论:成功构建了血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体，并对其进行了空间结构分析     

血管基膜衍生多功能肽基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定

目的利用PCR技术从含有目的基因的质粒pGEX-4T-1-VBMDMP获得带有snabⅠ和NotⅠ酶切位点并融合有GST的目的基因片段并测序鉴定。方法将PCR产物纯化、酶切、回收，克隆到pPIC9K栽体，转化入大肠杆菌DH5a扩增，用琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定。BglⅡ线性新构建的表达载体pPIC9K-CST-VBMDMP，然后用原生质体转化法转化毕赤酵母细胞，并用pPIC9K空质粒也转入酵母细胞进行对照。用煮-冻-煮法裂解已转化有目的基因的毕赤酵母细胞，提取DNA并行PCR鉴定，获得阳性重组子，行多克隆筛选和表型鉴定。筛选His’Mut^8表型的转化子，在MGY液体培养基中30℃摇床培养，每24h从培养基中转移1mL培养基上清于-70℃保存，并保持培养瓶中培养基的量和培养基中甲醇0．5％的浓度不变。8d后行SDS—PACE检测表达的蛋白，用Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化获得GST-VBMDMP融合蛋白；用凝血酶切割GDT—VBMDMP并分离获得VBMDMP。结果VBMDMP能够抑制鼠主动脉内皮细胞管状结构的形成；同时VBMDMP(10、6、2mg/kg)对小鼠Lewis肺癌原发瘤具有显著抑制作用(瘤重抑制率分别为96．6％、82．1％、61．2％)。VBMDMP(GST—VBMDMP 10、6、2mg／kg)对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移具有显著抑制作用(自发性肺转移瘤结节抑制率分别为96．8％、87．9％、75．3％)。结论、VBMDMP能够抑制鼠主动脉内皮细胞管状结构的形成，并对小鼠Lewis肺癌原发瘤和肺转移具有明显的抑制作用。