尘螨变应原Der f 2基因克隆及序列分析

目的:获得尘螨变应原Der f 2基因及其生物信息学资料.方法:提取粉尘螨总RNA,RT-PCR合成Der f 2的cDNA片段,回收PCR产物并连接至pMD19-T simple,经测序验证后亚克隆入表达载体pET-28a( ),转化大肠杆菌感受态细胞后提取质粒,双酶切鉴定.用ExPaSy,EBI,NCBI网站的在线软件对测序结果进行分析.结果:RT-PCR扩增获得了Der f 2 cDNA片段,酶切、电泳结果表明克隆和亚克隆获得成功.与参考序列相比,测序结果多了87 bp(77～163),但Blastn发现中国广州和德国Reinbek报道的序列中也含此87bp.同源性、相似性、序列比对及分子进化分析提示,该序列与中国广州和德国Reinbek报道的序列亲缘关系较近.推测该变应原由176个氨基酸组成,与附睾分泌蛋白E1具有同源性,信号肽位于1～17aa处,在6～24aa处有一跨膜螺旋.二级结构由a-螺旋(16.57%),延伸链(32.57%)和随机卷曲(50.86%)组成.结论:获得了粉尘螨变应原Der f 2编码基因及其分子特征,为进一步生产基因工程变应原用于临床诊治变态反应性疾病奠定了基础.     

尿螨病的实验室诊断

目的 探讨尿螨病的实验诊断方法.方法 对69例尿螨病患者进行尿螨分离、血常规检查、皮肤挑刺试验、血清总IgE、螨特异性IgE的检测.结果 69例尿螨病患者的尿液中共分离出17种病原螨,其中粉螨14种.白细胞计数在(5.3～11.4)×109/L之间,白细胞分类一般为0.05～0.09之间,最高达0.48;嗜酸性粒细胞计数多在(0.5～0.14)×109/L之间.皮肤挑刺试验均呈阳性," "、" "和" "者分别占52.17%(36/69)、39.13%(27/69)和8.70%(6/69).尿螨阳性者和阴性者血清总IgE、螨特异性IgE分别为(89±22)IU/ml、(71±22)IU/ml和(35±27)IU/ml、(29±18)IU/ml,差异具显著性(P＜0.01-P＜0.05).结论 实验室诊断尿螨病以尿螨分离为金标准,皮肤挑刺试验、血清总IgE和粉螨特异性IgE的检测可作为辅助诊断指标.     

尿螨病的实验室诊断

目的 探讨尿螨病的实验诊断方法.方法 对69例尿螨病患者进行尿螨分离、血常规检查、皮肤挑刺试验、血清总IgE、螨特异性IgE的检测.结果 69例尿螨病患者的尿液中共分离出17种病原螨,其中粉螨14种.白细胞计数在(5.3～11.4)×109/L之间,白细胞分类一般为0.05～0.09之间,最高达0.48;嗜酸性粒细胞计数多在(0.5～0.14)×109/L之间.皮肤挑刺试验均呈阳性,"+++"、"++"和"+"者分别占52.17%(36/69)、39.13%(27/69)和8.70%(6/69).尿螨阳性者和阴性者血清总IgE、螨特异性IgE分别为(89±22)IU/ml、(71±22)IU/ml和(35±27)IU/ml、(29±18)IU/ml,差异具显著性(P＜0.01-P＜0.05).结论 实验室诊断尿螨病以尿螨分离为金标准,皮肤挑刺试验、血清总IgE和粉螨特异性IgE的检测可作为辅助诊断指标.     

屋尘螨变应原Der p 1基因的克隆和原核表达

目的克隆和分析屋尘螨主要变应原Der p 1,并实现原核表达。方法分离屋尘螨总RNA,根据Gen Bank已公布的Der p 1核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增Der p 1编码基因,克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET-28a( ),将表达质粒转化至E.coliBL21(DE3)并用IPTG诱导表达,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果成功构建了表达质粒pET-28a( )-Der f 1,Western blotting显示原核表达获得成功。序列分析表明所获得的Der p 1编码基因与参考序列同源性达99.9%,推测其编码氨基酸222个。屋尘螨和粉尘螨1类变应原氨基酸序列相似率为60%,而粉尘螨与梅氏嗜霉螨1类变应原相似率为85%,分子进化分析亦提示粉尘螨和梅氏嗜霉螨亲缘关系较近。推测所获rDer p 1二级结构中,α螺旋占33.78%,延伸链占21.62%,随机线圈占44.59%。结论尘螨变应原Der p 1原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础。序列分析表明粉尘螨和梅氏嗜霉螨的亲缘关系可能更近,而与屋尘螨关系稍远,此与现行的形态学分类系统并不符合。     

乙肝病人T细胞亚群、mIL-2R的变化及意义

目的检测乙型病毒性肝炎病人外周血T细胞亚群和膜白介素-2受体(mIL—2R)表达水平并探讨其在乙肝发病机制中的作用。方法采用生物素-链霉亲和素法对188例乙肝病人外周血单个核细胞(PBMC)进行T细胞亚群及植物血凝素(PHA)诱导前后mIL—2R水平测定。结果乙肝病人T淋巴细胞亚群中CD3~+、CD4~+降低,CD8~+升高,CD4~+/CD8~+比值降低,外周血单个核细胞mIL—2R表达水平在PHA诱导前后均降低,与正常对照相比,差异有显著意义(P<0.01);另外,乙肝病人PBMC中HBV—DNA(+)病人与PBMC内HBV—DNA(-)病人相比,mIL—2R表达水平亦存在较大差异(P<0.01)。结论乙肝病人体内存在明显的细胞免疫功能紊乱,T细胞活化障碍,并与肝病的慢性化相关。     

尘螨主要变应原Der f1融合基因真核表达载体的构建

目的:构建尘螨主要变应原Der f1融合基因真核表达载体,为进一步转染真核细胞表达融合蛋白奠定基础.方法:根据Genebank中Der f1基因的核酸序列(AB034946),设计引物,采用PCR法,从保存的JM109工程菌中扩增Der f1编码基因,将其连接到小鼠IL-12(mIL-12)基因3′端,组成融合基因mI...     

乙型病毒性肝炎动物模型／细胞模型研究进展

乙型病毒性肝炎是一种在世界范围内严重危害人类健康的传染病,其病原体乙型病毒性肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是目前所知的最小的嗜肝病毒,其 DNA 为部分双链环状,约3.2kb。自从乙型肝炎病毒被发现以来,人们对其进行了许多的相关研究,近年来,由于单克隆抗体和分子克隆及基因组研     

胃蝇蛆病一例

患者男 ,4 3岁 ,农民。因酒后呕吐出血红色虫体 1条而就诊。自述 2周来上腹不适、四肢无力、头晕、食欲减退 ,进食时腹胀、嗳气和恶心。呕吐物中有血红色蛆虫 ,呈圆柱状 ,长约 8mm ,口钩发达 ,前端较尖 ,胸腹各节前缘处有大小刺突相间的一圈刺带 ,第 10节背面中央缺 1～ 2个刺 ,第 11节背侧有 2～ 5个刺 ,鉴定为肠胃蝇 (Gastrophilusintestinalis)。口服丙硫咪唑 ,6h后排出蝇蛆 (成熟蝇幼虫 ) 12条 ,4h后又排出 4条。 3d后症状完全消失 ,随访 1个月无异常。讨论　胃肠道蝇蛆病是由于误食了含有蝇卵或蝇幼虫的水或食物 ,幼虫在肠内生长发育…     

乙型肝炎患者辅助性T细胞分泌细胞因子的水平的研究

[目的]研究各型乙型肝炎患者TH1／TH2类细胞分泌细胞因子的水平及细胞免疫应答的模式并探讨其在乙肝发病机制中的作用。[方法]应用植物血凝素(Phytohemagglutinin，PHA)和各型乙肝患者的PBMC在体外共同培养，用ELISA法检测其：PBMC产生TH1类细胞因子(IL-2、IFN-γ)和TH2类细胞因子(IL-4、IL-10)的水平。[结果]和正常对照相比，各型乙肝患者TH1／TH2类细胞因子均发生了不同程度的改变。[结论]各型乙肝患者TH1／TH2类细胞免疫应答的模式发生了明显的改变。     

尘螨变应原Der f1植物表达载体的构建及表达

目的:构建尘螨变应原Der f1植物表达载体并侵染烟草叶片表达。方法:从保存的含pET28a(+)-Der f1的甘油菌株中扩增Der f1基因,并克隆到质粒载体中,提取质粒,进行测序;以ClaⅠ、SalⅠ双酶切,将Der f1基因克隆到马铃薯X病毒(PVX)载体中,构建植物病毒表达载体;将PVX-Der f1转化脓杆菌,挑取Kan、Tet抗性阳性的菌株侵染烟草叶片进行蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定和分析。结果:经SDS-PAGE分析,有4株烟草叶片蛋白提取物在34Mr处有特异性蛋白条带;经Western blot进一步验证其变应原,结果显示,烟草叶片中获得的重组蛋白在34Mr处与阳性血清发生特异性结合,而与阴性血清并不发生结合。结论:成功构建了植物病毒表达载体PVX-Der f1并获得表达,为尘螨变应原Der f1的研究提供新思路。