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1.
目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhlL-2的生产及临床应用奠定基础。方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(c125)的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2,温度诱导表达.表达产物行SDS一聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及WesternBlot鉴定。结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16.5ku的外源蛋白产生。经Western印迹(WesternBlot)证明为rhlL-2。结论:成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统。表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。 相似文献
2.
目的:探讨血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及TNF-α基因多态性与2型糖尿病胰岛素抵抗的关系。方法:选取2型糖尿病肥胖患者50例,非肥胖患者50例,健康对照50例,应用酶联免疫法检测血清中TNF-α水平,并应用PCR-RFLP方法检测TNF-α-308启动子区基因多态性,所有数据以SPSS 10.0软件进行分析。结果:糖尿病肥胖组血清TNF-α水平较非肥胖组及对照组明显增高,在糖尿病组中TNF-α-308A等位基因携带者体质指数(BMI)及胰岛素抵抗均高于TNF-α-308G等位基因携带者。结论:TNF-α与BMI和胰岛素抵抗明显相关。携带TNF-α-308A等位基因者更易于发生胰岛素抵抗。 相似文献
3.
目的:探讨 rhPTH1~84、rhPTH37~84及 hPTH1~34对大鼠成骨细胞增殖的影响。方法分子生物学方法克隆表达 hPTH1~84、hPTH37~84重组蛋白。体外培养的大鼠成骨细胞给予不同浓度的 PTH 作用后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖。结果获得了浓度约为261.82 mg/L 的 rhPTH1~84和浓度为165.45 mg/L 的rhPTH37~84。10-10~10-7 mol/L 范围的 rhPTH1~84和 hPTH1~34促进大鼠成骨细胞的增殖;rhPTH37~84则抑制大鼠成骨细胞增殖。结论成功获得了高浓度高纯度的 rhPTH1~84及 rhPTH37~84。rhPTH37~84抑制细胞增殖,为进一步研究甲状旁腺激素及其羧基端肽段的功能奠定了基础。 相似文献
4.
目的研究不同碘营养状态对大鼠肝组织甲腺氨酸Ⅰ型5′脱碘酶(DI)表达水平及活性的影响。方法正常1月龄Wistar大鼠根据碘摄入量不同分为6组,饲养3个月后处死。放免法测定血清甲状腺激素水平。提取肝组织总RNA,以β—actin为内对照,半定量RT-PCR分析DI基因的表达水平。Chopra氏方法测定肝组织匀浆液中DI的脱碘活性。结果LI组TT4和FT4显著低于其他5组(P〈0.05),100HI组TT3和FT3显著低于其他5组(P〈0.05),100HI组TT4和FT4显著低于NI、5HI、10HI和50HI组(P〈0.05)。大鼠肝组织DI基因mRNA表达量6组间差异有统计学意义(P〈0.01),LI组显著高于其他5组(P〈0.05),不同剂量HI组和NI组相比差异均无统计学意义(P〉0.05)。大鼠肝组织DI活性6组间差异有统计学意义(P〈0.01),LI组显著高于其他5组(P〈0.05),50HI组和100HI组显著低于其他4个组(P〈0.05)。结论在碘缺乏状态下。大鼠出现以低T4为主要表现的甲状腺功能减退(甲减),DI活性和DI基因表达水平代偿性上调,使机体维持足够的T3水平,以避免周围组织出现器官性甲减。高碘仅在转录后水平影响DI,表现为直接抑制DI的活性。使血清TT3和FT3下降,机体出现失代偿性周围组织器官性甲减。DI对碘过量有一定的耐受能力,这种耐受性有一定的阈值。 相似文献
5.
目的测定人脐静脉内皮细胞可传代细胞株ECV304在不同间歇缺氧(IH)程度、频率、时段和恢复时段下核因子κB(NF-κB)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的变化。方法在自制细胞培养舱中程控产生预置的IH/ROX(再氧合)暴露环境,将ECV304细胞暴露于该环境共60次循环。暴露时按IH/ROX时段将细胞分为11组,每组样本数为12。A组:采用21%O215s/21%O2 3分钟45秒(即间歇正常氧)方案;B组:置于标准孵箱中不加暴露(标准孵育);C组:采用1.5%O2 15s/21%O2 3分钟45秒方案;D组:采用10%O2 15s/21%O2 3分钟45秒方案;以下固定IH方案为1.5%O2 15s和ROX程度21%O2不变,IH/ROX循环频率分别为12S/h(C组)、9S/h(E组)、6S/h(F组)、20S/h(G组)和40S/h(H组);I组:采用1.5%O2 30s/21%O23分钟45秒方案;C组完成暴露后放回标准孵箱中60min为J组,120min为K组。分别采用酶联免疫吸附(ELISA)法和细胞表面ELISA法测定细胞裂解液中总NF-κB水平和细胞表面ICAM-1浓度,并测定总蛋白含量。结果C组NF-κB和ICAM-1水平分别为(0.82±0.28)、(1562±56)pg/ml,A组分别为(0.37±0.07)、(768±80)pg/ml,两组比较差异有统计学意义(D值分别为225.00、176.04,P分别〈0.01、〈0.05);D组分别为(0.66±0.22)、(1113±76)pg/ml,与C组比较差异有统计学意义(U值分别为25.00、0.00,P均〈0.01);I组分别为(0.45±0.16)、(1155±19)pg/ml,与C组比较差异有统计学意义(U值分别为27.00、0.00,P均〈0.01);同时C组的NF-κB和ICAM-1水平在C、E、F、G和H这5个不同IH频率组的比较亦是相对最高的(X^2分别为35.63、56.89,P均〈0.01);J组NF-κB水平[(0.6233±0.0534)]与C组比较差异无统计学意义(D=36.00,P〉0.05),而K组NF-κB水平[(0.3050±0.0013)]与C组比较差异有统计学意义(D=234.00,P〈0.01)。结论IH/ROX可对内皮细胞造成程度依赖的炎性损伤且不易恢复,中度频率的IH/ROX将选择性激活细胞炎性通道。而过高频率和过长时段的IH反而激活细胞适应性通道。 相似文献
6.
目的:探讨血清IL-6水平以及IL-6基因多态性与肥胖和胰岛素抵抗(IR)的关系。方法:选取肥胖2型糖尿病患者55例(肥胖组),非肥胖2型糖尿病患者49例(非肥胖组),健康对照50例(对照组),应用酶联免疫法检测血清中IL-6水平,并应用PCR-RFLP方法检测IL-6-174启动子区基因多态性。结果:肥胖组血清IL-6水平较非肥胖组及对照组明显增高.在糖尿病组中IL-6-174G等位基因携带者体质量指数(BMI)及IR均高于IL-6-174C等位基因携带者。结论:IL-6与BMI和IR有关,携带IL-6-174G等位基因者更易于发生IR。 相似文献
8.
发育期缺碘大鼠骨发育障碍的病理学观察 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察缺碘对大鼠甲状腺功能及骨发育的影响。方法复制两代碘缺乏大鼠动物模型.测定血清中TT3、TT4水平,拍摄X线片,并作股骨远端骨切片观察骨发育情况。结果20日龄缺碘大鼠的体质量明显低于对照组,甲状腺相对质量明显高于对照组;补碘组与正常组无明显差别、碘缺乏大鼠血清TT3水平与对照组相比无明显变化.但TT4。水平显著降低。X线片中可见.碘缺乏大鼠的长骨较同日龄正常大鼠短且细.骨间隙增大,钙化不良。股骨远端骨骺病理切片显示,缺碘大鼠次级骨化中心形成迟缓且小,骨骺生长板中几个软骨细胞区域层次混乱,储备细胞数目减少,增殖区宽度较正常大鼠减少,生后补碘可以部分纠正上述改变。结论发育期碘缺乏会导致大鼠发育迟缓,骨骺软骨发育不良.钙化障碍。生后给碘缺乏大鼠补碘可以改善骨骼发育。 相似文献
9.
目的研究不同碘营养状态下大鼠血清中胰岛素样生长因子I(IGFl)的浓度及其与甲状腺素水平的相关性。方法复制碘缺乏大鼠动物模型.给予不同的碘营养。分离大鼠血清,以自行建立的双位点夹心ELISA检测IGFl浓度,并同时测定血清甲状腺素的水平。结果与正常大鼠相比较.碘缺乏大鼠血清IGFl浓度明显降低,给予适量的碘补充后可使其恢复至正常水平。并且血清中IGFl浓度与T1的水平密切相关。结论碘缺乏导致骨、脑发育障碍的部分原因可能是因为降低了血清中甲状腺素的水平.因此导致IGFl这一重要发育调节因子的浓度下降所造成的。 相似文献
10.
目的验证碘缺乏病(IDD)是一种涉及多种微量元素的疾病,探讨缺碘大鼠脑中微量元素的变化.方法复制缺碘致甲状腺功能低下(甲低)大鼠模型,同龄正常大鼠为对照,取不同脑区行冰冻切片,置聚碳酸酯膜上干燥后,用同步辐射X射线荧光分析法,测定各脑区的微量元素.用SPSS软件包数据处理.结果①大鼠模型血中T4和FT4分别为(3.50±0.66)nmol/L和(0.59±0.12)pmol/L,明显低于正常组的相应值(104.68±20.10)nmol/L和(16.86±2.70)pmol/L;②碘的同族元素氯溴在低碘组含量以(counts,c)计与正常者相比在海马分别是78c46c和20c15c;在皮质中含量分别为50c35c和9c7c,均显著升高;上丘脑中则降低.其它元素P、S、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn、Br和Rb在低碘组海马和皮质中普遍升高,而上丘脑中降低.特别是Zn,低碘鼠中比正常鼠升高1倍或近1倍(海马中为110c56c;皮质中为105c54c),而在上丘脑中则相差不大.这与甲状腺激素受体数目的分布和变化相符,因为低碘鼠海马和皮质中T3受体含量显著升高(见另文).而T3受体恰是细胞核内的含Zn蛋白,故Zn含量受碘营养状况的影响最敏感.但无核红细胞在甲低时其Zn含量也升高,是值得进一步研究的有趣现象.结论缺碘组海马与皮质中所测P、S、Cl、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn、Br和Rb等元素均有升高,而且上丘脑大部分元素降低.结果表明IDD致甲低会对其它微量元素的代谢产生深刻影响. 相似文献