亳菊花中β-葡萄糖苷酶的提取和酶学性质研究

目的 测定亳菊花中β-葡萄糖苷酶的活性,研究亳菊花中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质。方法 采用对硝基苯酚-β-D葡萄糖苷（4-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,pNPG）法考察亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件及其酶学性质。结果 当0.2 mL酶液、20 mmol/L pNPG 0.2 mL、0.6 mL pH值为4.0的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液在温度为50 ℃的水浴中反应45 min时,酶活性最高。在此条件下对亳菊花的粗酶液中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质进行初步研究,结果表明该酶在30～50 ℃时,随着温度升高,酶活力有上升趋势,其热稳定性较好;pH值在3.2～5.4之间时,相对酶活性均在80%以上;酶在4 ℃下的保存稳定性较好。结论 本研究所测定的亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件及酶学性质可为亳菊花炮制原理研究奠定基础。     

不同加工方法对亳菊中2种苯丙素类和6种黄酮类成分的影响

目的：研究阴干、烘干、微波干燥、蒸制后烘干等加工方法对亳菊中2种苯丙素类和6种黄酮类成分的影响,为亳菊加工方式的优选以及产地加工机制研究提供研究基础。方法：采用HPLC,Agilent HC-C₁₈（2）柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相,梯度洗脱,流量为1.0 mL·min^-1 ,柱温为30℃,检测波长为330 nm。结果：不同加工方法得到的亳菊样品中2种苯丙素类和6种黄酮类成分有显著性差异,采用主成分分析及偏小二乘聚类判别模式分析显示11个批次的样品可以归为3类：高温杀青烘干组（样1,2,3）,阴干组（样4,5）和烘干组（样6,7,8,9,10,11）。结论：高温杀青烘干组和阴干组加工品的质量优于烘干组。     

基于COⅠ基因对东北林蛙、中国林蛙等蛙属24种的鉴定

目的 利用DNA条形码线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因（COⅠ）技术对东北林蛙等24种进行鉴别,构建邻接（NJ）系统发育树,对24种进行系统聚类分析,为东北林蛙等蛙类的鉴别,分类及新种的发现提供一定的依据。方法 收集东北林蛙、中国林蛙、黑龙江林蛙、徂崃林蛙、桓仁林蛙各10只,提取其DNA并进行聚合酶链式反应（PCR）扩增,将扩增成功的序列测序,共测得50条COⅠ基因序列;从GenBank数据库中获得蛙科蛙属24种163条COⅠ基因序列及蛙科侧褶蛙属,臭蛙属,琴蛙属,水蛙属,湍蛙属各一条COⅠ基因序列;利用MEGA X进行序列比对,分析各物种COⅠ基因序列简约性信息位点,计算种内,种间遗传距离,构建NJ树进行系统聚类分析。结果 东北林蛙等24种COⅠ基因序列长度为554 bp,共有210个简约性信息位点,各物种种内遗传距离均<2%;除桑植蛙与明全蛙种间遗传距离为0.004外,其余各物种种间遗传距离范围为0.024~0.228;桑植蛙与明全蛙聚为一支,部分东北林蛙与Rana uenoi聚为一支,中国林蛙有2个独立的分支,其余各物种均独立聚为一支。结论 DNA条形码COⅠ技术能够对东北林蛙等21种进行鉴定及鉴别,支持桑植蛙与明全蛙,韩国林蛙与昆嵛林蛙为同物异名,其中一支中国林蛙可能是蛙科蛙属未下载的4个种之一或新种。这表明DNA条形码COⅠ技术不仅可以鉴定及鉴别东北林蛙等24种蛙类,也可以为蛙科蛙属的分类,新种或亚种的发现提供一定的科学依据。     

丹参品种、产地及栽培历史本草考证

丹参为我国常用大宗中药材,历代本草均有记载,药用历史悠久,功效显著,具有活血止痛、宁心安神的作用,为常用活血化瘀药,临床医疗价值较高,在治疗心肌缺血、改善肝功能、保护肾脏、对抗肿瘤等方面具有较好的效果。查阅文献发现,近年来对丹参的研究大多集中在药理成分、临床等方面,鲜有从古籍文献出发对丹参品种、产地及栽培历史进行研究。通过系统查阅丹参古今文献发现,丹参近缘品种较多,在民间应用和地方入药中同属多种植物的根均作丹参用;在清代以前为野生丹参,清代以后才出现人工栽培丹参,以山东、四川丹参质量最好;各地虽有栽培,但是栽培品种混杂,品质退化严重,质量参差不齐,为此,有必要对丹参的品种、产地及栽培历史进行考证,为丹参正本清源及资源的进一步开发利用提供理论基础和现实依据。     

基于高通量测序技术对人参花及其易混淆品鉴定研究

目的 利用高通量测序技术对人参花及其易混淆品进行鉴定，并利用ITS2测序技术验证高通量测序技术对物种鉴定的准确性。方法 对人参花掺伪样品扩增产物进行高通量测序，使用cutadapt、PEAR、PRINSEQ、Usearch、RDP classifier、SINTAX软件获得分类单元(operational taxonomic unit，OTU)序列，舍弃菌类、unclassified等非绿色植物序列；为避免假阳性情况发生，删除序列数<100条或碱基数<200 bp的OTU序列。对人参花、西洋参花、三七花的ITS2扩增产物进行测序，利用MEGA 11.0对人参花、西洋参花、三七花的ITS2、OTU、GenBank上下载的碱基序列构建邻接法系统聚类树、遗传距离、种间信息位点及对ITS2、OTU碱基序列分别进行Blast分析来验证高通量测序技术对物种鉴定的准确性。通过构建ITS2及OTU碱基序列二级结构对人参花、西洋参花、三七花进行比对分析，根据物种间二级结构的不同对物种进行鉴定。结果 高通量测序共得到54 653条有效序列，人参花、三七花、西洋参花的序列号分别为OTU1、OTU2、OTU3及对应的有效序列分别为31 325，857，442条。通过对各物种的ITS2及OTU碱基序列进行Blast检索，均支持各个物种。人参花与西洋参花、三七花种间遗传距离分别为0.010，0.033，人参花与西洋参花、三七花分别有2，7个信息位点；邻接法系统聚类树显示各个物种均独立聚为一支，其中人参花与西洋参花聚为一大支与三七花并列。人参花与西洋参花二级结构一致，但与三七花在臂Ⅳ及臂Ⅳ与臂Ⅰ之间有A、B、C 3处不同。结论 基于高通量测序技术能够准确鉴定人参花、西洋参花、三七花，对掺伪样品亦具有较强的鉴别能力，为市售人参花样品鉴定提供一定思路。