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【目的】 应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,有效沉默鼻咽癌细胞CNE-2的CR-1基因表达,研究CR-1对鼻咽癌细胞生物学行为的影响&;#65377; 【方法】 构建针对CR-1的siRNA慢病毒表达载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]&;#65377;利用包装细胞293FT生产慢病毒,感染鼻咽癌细胞CNE-2, 流式筛选GFP阳性细胞&;#65377;应用荧光定量PCR&;#65380;Western blot检测病毒感染后CNE-2细胞中CR-1基因的mRNA和蛋白表达,获得干扰CR-1基因的细胞群&;#65377;并用MTT法&;#65380;平板克隆形成实验及Boyden侵袭小室观察CR-1干扰后对CNE-2细胞生物学行为的影响&;#65377; 【结果】 PCR 和测序证实,成功构建了CR-1 shRNA的慢病毒载体pLVTHM-shCR-1&;#65377;荧光定量PCR 和Western blot结果表明,所获得的细胞中CR-1 mRNA及蛋白表达水平较阴性对照组&;#65380;空白对照组均显著降低(P < 0.05)&;#65377;CR-1干扰后的细胞生长明显减慢,克隆形成能力减弱,侵袭运动能力下降&;#65377; 【结论】 通过RNAi技术阻断CR-1的表达,可抑制CNE-2细胞的生长&;#65380;增殖&;#65380;迁徙,提示CR-1在鼻咽癌的发生&;#65380;发展过程中起重要作用&;#65377; 相似文献
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目的研究当归中阿魏酸的微波提取工艺;方法用正交设计法,以70%甲醇为溶剂,考察了微波功率、微波辐射时间及料液比三个因素,每个因素3个水平,选择L9(34)正交设计表,用HPLC法测定阿魏酸,并以其含量作为评价指标。结果优选的工艺为微波功率480 w,微波辐射时间为5 min,料液比为1:40。结论工艺简便可行,阿魏酸的提取率最高。 相似文献
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目的:建立半边莲配方颗粒的薄层鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对半边莲配方颗粒进行定性鉴别。结果:薄层色谱法可以鉴别半边莲配方颗粒中的特征性斑点。结论:方法可行,重复性好,能有效地控制半边莲配方颗粒的质量。 相似文献
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目的研究益寿丸对D-半乳糖(D-gal)所致衰老小鼠自由基及免疫器官的影响,初步探讨其抗衰老的作用机制。方法采用D-半乳糖复制亚急性衰老小鼠模型。测定衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)的活性,丙二醛(MDA)的含量,以及胸腺、脾脏指数,并观察益寿丸对上述指标的影响。结果益寿丸能明显提高D-半乳糖衰老小鼠血清中SOD、GSH-PX、CAT活性,降低MDA含量,并提高胸腺、脾脏指数。结论益寿丸抗衰老作用可能与其能提高机体抗氧化酶活性,提高机体免疫功能有关。 相似文献
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目的研究黄芪山药药对对Ⅱ型糖尿病大鼠的降糖作用及抗氧化能力和NO/NOS水平的影响。方法采用高糖高脂饲料结合链脲佐菌素小剂量注射,建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型。观察高中低剂量黄芪山药药对对Ⅱ型糖尿病大鼠的降糖作用,并检测各组动物血清中SOD、CAT、GSH-PX的活性及MDA含量,以及NO/NOS水平。结果黄芪山药药对高中低剂量均能降低Ⅱ型糖尿病大鼠的血糖水平,抑制糖尿病大鼠NO/NOS水平,降低血清MDA含量,提高SOD、CAT和GSH-PX的活性,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论黄芪山药药对能够降低Ⅱ型糖尿病大鼠血糖,增强糖尿病大鼠的抗氧化作用并抑制糖尿病大鼠血清NO/NOS水平。 相似文献
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[目的]建立鉴定广佛手黄龙病病原的有效方法,为无毒苗木的选育及病害防治提供早期诊断依据.[方法]在广佛手主要种植区进行调查,了解黄龙病的发病状况;根据柑桔黄龙病病原的DNA序列设计特异性的引物,对样品的DNA进行聚合酶链式反应(PCR)扩增.[结果]广东肇庆地区的广佛手出现类似柑桔黄龙病的症状,PCR检测结果表明,在表现发病症状的广佛手样品中有400bp的特异性DNA片段出现,而健康的样品中则没有扩增出特征带,表明广佛手的感病症状是由黄龙病病原引起的.[结论]PCR技术是广佛手黄龙病病原鉴定的有效方法之一. 相似文献
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目的 分析高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的2型糖尿病肾病(type 2 diabetic nephropathy,T2DN)大鼠模型在不同时期尿液代谢组学的差异,寻找T2DN早期代谢标志物并分析T2DN发病机制.方法 18只SD大鼠随机分为T2DN组(n=12)和正常组(n=6),T2DN组采用高脂喂养4周后空腹注射STZ(40 mg/kg)建立T2DN模型;正常组正常饲料喂养并注射等剂量的柠檬酸缓冲液作为对照.分别于第8、12、16周代谢笼收集尿液,通过1 H NMR技术检测其尿液代谢组学特征,采用模式识别方法分析疾病进展过程中的代谢差异.结果 模型组中9只大鼠发展为T2DN模型,成模率为75%.模式识别方法分析显示正常组、T2DN组第8周、T2DN组第12周和T2DN组第16周大鼠的尿液有明显的代谢差异,这些差异代谢涉及能量代谢、三羧酸循环、脂代谢、氨基酸代谢及肠道菌群.结论 随着T2DN大鼠病程的进展,其尿液中的代谢谱发生显著的变化,这些具有显著性变化的代谢物可以为T2DN的早期诊断和探索T2DN的发病机制提供帮助. 相似文献