血清对神经干细胞分化的影响北大核心CSCD

目的探讨血清对神经干细胞分化过程的影响。方法取孕14 d SD大鼠胚胎脑组织,分离培养神经干细胞并传代。取第3代细胞倒置相差显微镜下观察细胞形态,并行巢蛋白(Nestin)免疫细胞化学染色鉴定。将鉴定后的细胞分为A、B、C 3组,各组细胞培养基除FBS浓度不同(分别为5%、1%、0)外,其余成分均一致。培养第8天,行活/死细胞染色观察细胞生长情况;培养第4、8天,行免疫细胞化学染色以及实时荧光定量PCR检测,观察胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、Ⅲ型β神经元微管蛋白(β-Ⅲ Tubulin)表达。结果经细胞形态及免疫细胞化学染色鉴定培养细胞为神经干细胞。培养第8天,活/死细胞染色示A、B、C组细胞均无死亡现象。免疫细胞化学染色示,培养第4、8天,A、B、C组GFAP蛋白表达随FBS浓度降低而逐渐减弱,但β-Ⅲ Tubulin表达逐渐增强;各组第8天时染色均较第4天时增强。实时荧光定量PCR检测示,培养第4天和第8天3组间GFAP mRNA及β-ⅢTubulin mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清能促进神经干细胞向胶质细胞分化,并减缓其向神经元分化速度,且血清浓度越低,该影响越小。     

西药中药化研究进展

西药中药化是以中医药理论为指导,以中药的特性和功效为指标,来研究指导西药的临床应用。西药中药化研究既能够丰富和深化中医药学内容,也将进一步推动中医药学现代化的研究进程。本文对西药中药化的研究情况及进展进行了归纳整理。     

血清对神经干细胞分化的影响

目的探讨血清对神经干细胞分化过程的影响。方法取孕14 d SD大鼠胚胎脑组织,分离培养神经干细胞并传代。取第3代细胞倒置相差显微镜下观察细胞形态,并行巢蛋白(Nestin)免疫细胞化学染色鉴定。将鉴定后的细胞分为A、B、C 3组,各组细胞培养基除FBS浓度不同(分别为5%、1%、0)外,其余成分均一致。培养第8天,行活/死细胞染色观察细胞生长情况;培养第4、8天,行免疫细胞化学染色以及实时荧光定量PCR检测,观察胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、Ⅲ型β神经元微管蛋白(β-Ⅲ Tubulin)表达。结果经细胞形态及免疫细胞化学染色鉴定培养细胞为神经干细胞。培养第8天,活/死细胞染色示A、B、C组细胞均无死亡现象。免疫细胞化学染色示,培养第4、8天,A、B、C组GFAP蛋白表达随FBS浓度降低而逐渐减弱,但β-Ⅲ Tubulin表达逐渐增强;各组第8天时染色均较第4天时增强。实时荧光定量PCR检测示,培养第4天和第8天3组间GFAP mRNA及β-ⅢTubulin mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论血清能促进神经干细胞向胶质细胞分化,并减缓其向神经元分化速度,且血清浓度越低,该影响越小。     

乳糖诱导瑞替普酶在大肠杆菌中的可溶性表达

目的构建瑞替普酶(rPA)大肠杆菌基因工程菌,优化乳糖诱导表达条件,并获得活性重组蛋白。方法通过PCR扩增得到rPA编码基因,将该基因片段克隆到载体pET40b中,转化E.coli BL21。优化确定乳糖诱导浓度、时间、温度等参数,将诱导表达后获得的菌体细胞通过超声破碎裂解后利用镍柱亲和色谱进行分离纯化,重组目的蛋白经Xa因子切割去除DsbC融合标签后释放获得rPA产物,最后利用纤维蛋白平板法对其溶栓活性进行检测。结果 rPA重组质粒构建成功,利用终浓度30 mmol/L的乳糖于30℃诱导5 h可以获得很好的表达效果,重组蛋白的表达量、可溶性及酶活与IPTG诱导产物基本接近;经纯化后的rPA目的蛋白可表现出明显的溶栓活性。结论本研究为进一步利用大肠杆菌系统表达生产高活性重组rPA提供了一定的参考依据。