白藜芦醇对视网膜母细胞瘤细胞多药耐药性相关因子表达的影响

目的 观察白藜芦醇对视网膜母细胞瘤(RB)细胞多药耐药性(MDR)因子表达的影响.方法 体外培养RB细胞,取对数生长期细胞进行实验.实验分为实验组及对照组进行.采用浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μmol/L的白藜芦醇处理RB细胞,作用24、48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度组RB细胞的吸光度[A,旧称光密度(OD)]值,以此表示RB细胞活性.采用浓度为50.00 μmol/L的白藜芦醇处理RB细胞48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测MDR-1、环氧化酶(COX)-2、多药耐药相关蛋白(MRP)-1、谷胱苷肽转移酶(GST)-π的m RNA和蛋白表达.3种检测均以加入等体积0.5％二甲基亚砜细胞培养液为对照组.结果 MTT比色法检测结果显示,与对照组比较,6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/L实验组A值呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(F=4.782,P＜0.05).50.00、100.00 μmol/L实验组A值间差异无统计学意义(F=6.351,P＞0.05).RT-PCR检测结果显示,实验组MDR-1、MRP1、COX-2、GST-π mRNA表达较对照组显著降低,差异均有统计学意义(t=9.170、5.758、4.152、4.638,P＜0.05).Western blot检测结果显示,实验组MDR-1、MRP1、COX-2、GST-π蛋白表达较对照组显著降低,差异均有统计学意义(t=3.848、5.955、4.541、3.514,P＜0.05).结论 白藜芦醇可降低RB细胞MDR因子的表达.     

糖尿病患者视神经纤维层病变的研究

目的 分析糖尿病患者在未出现糖尿病视网膜病变前的眼部光学相干断层扫描（OCT）神经纤维层缺损变化.方法 对52例（104眼）未出现糖尿病视网膜病变的糖尿病患者及52例（104眼）正常人眼的OCT临床资料进行对比分析.结果 104眼糖尿病患者中视神经纤维平均厚度（77.62±13.29）μm较正常组（98.38±11.76）μm变薄,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 糖尿病视网膜病变临床前期即出现神经纤维层变薄,OCT检查对糖尿病视神经病变的早期诊断有重要意义.     

白藜芦醇对视网膜母细胞瘤SO-Rb50增殖抑制作用的观察

目的观察白藜芦醇对人视网膜母细胞瘤SO-Rb50细胞增殖的影响,并探讨作用机制。方法体外培养的视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞,分别加入6.25、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇,对照组加入等体积0.5%DMSO,分别孵育24、48 h,MTT方法测定细胞活力,流式细胞术(FCM)测定细胞周期的变化。50μmol/L白藜芦醇孵育48h后,收集细胞,RT-PCR、Western blot分别测定PCNA、Cyclin D、Rb和P16 mRNA和蛋白的表达水平。结果白藜芦醇对视网膜母细胞瘤SO-Rb50增殖具有明显的抑制作用;白藜芦醇处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;50μmol/L白藜芦醇处理48 h显著降低了PCNA和Cyclin D的mRNA和蛋白表达水平,明显提高了Rb和P16mRNA和蛋白表达水平(均P<0.01)。结论白藜芦醇对视网膜母细胞瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能是下调PCNA和Cyclin D表达、上调Rb和P16表达,进而影响其细胞周期进程,发挥其抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的作用。     

白藜芦醇对人视网膜母细胞瘤细胞侵袭能力的影响及机制研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞侵袭能力的影响,探讨Res抑制视网膜母细胞瘤细胞侵袭力的相关机制。方法分别用6.25μmol·L-1、12.50μmol·L-1、25.00μmol·L-1、50.00μmol·L-1、100.00μmol·L-1Res处理视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞,对照组加等量5g·L-1二甲基亚砜,孵育48h后,细胞划痕实验测定细胞迁移抑制率;分别用上述浓度的Res处理视网膜母细胞瘤细胞16h,Transwell小室侵袭实验测定细胞侵袭抑制率;50.00μmol·L-1Res处理细胞48h,采用RT-PCR和Western blotting方法分别测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)mRNA和蛋白表达。结果 6.25μmol·L-1、12.50μmol·L-1、25.00μmol·L-1、50.00μmol·L-1、100.00μmol·L-1Res可明显抑制视网膜母细胞瘤细胞的迁移和侵袭;与对照组比较,50.00μmol·L-1Res处理细胞48h后,Res处理组MMP-2和MMP-9mRNA[对照组和Res处理组分别为(1.16±0.31、0.98±0.26和0.49±0.09、0.59±0.08)]及蛋白[对照组和Res处理组分别为(0.97±0.24、0.78±0.18和0.46±0.07、0.29±0.06)]的表达和活性均显著下降,TIMP-1和TIMP-2mRNA[对照组和Res处理组分别为(0.35±0.06、0.37±0.07和0.79±0.11、0.93±0.25)]及蛋白表达[对照组和Res处理组分别为(0.36±0.07、0.32±0.06和0.89±0.15、0.78±0.13)]均显著上升(均为P<0.05)。结论 Res通过下调MMP-2和MMP-9及上调TIMP-1和TIMP-2的表达来发挥抑制视网膜母细胞瘤细胞侵袭的作用。     

银杏叶提取物对NF-κB活性抑制人视网膜色素上皮细胞炎症反应的影响

目的:观察银杏叶提取物对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19炎症的影响及核转录因子-kappaB(NF-κB)通路的变化,探讨其作用机制。方法:体外培养ARPE-19细胞株,分为正常组(5.5 mmol·L-1葡萄糖),高糖组(30 mmol·L-1葡萄糖),银杏叶提取物不同剂量组组(30 mmol·L-1葡萄糖+12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物)。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;流式细胞术测定细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定炎症因子(NIK/p-NIK,IKKα/p-IKKα,IκB/p-IκB)表达;Western blot检测NF-κB磷酸化及核NF-κB表达。结果:与正常组比较,高糖组吸光度A明显降低(P0.05),细胞TNF-α,IL-1β含量明显升高(P0.05),p-NIK,p-IKKα,p-IκB表达水平明显升高(P0.05),p-NF-κB,核NF-κB表达水平明显升高(P0.05);与高糖组比较,12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物组吸光度A明显升高(P0.05);细胞TNF-α,IL-1β含量明显降低(P0.05),p-NIK,p-IKKα,p-IκB水平明显降低(P0.05),p-NF-κB,核NF-κB表达水平明显降低(P0.05)。结论:银杏叶提取物能通过抑制NF-κB活性抑制炎症反应,保护视网膜色素上皮细胞,用于糖尿病视网膜病变的防治。     

糖尿病视神经病变在糖尿病患者中的发生率

目的：分析糖尿病视神经病变在糖尿病患者中的发生率。方法：回顾64例（128眼）O～Ⅳ期糖尿病视网膜病变患者病史、临床表现、眼部检查、眼底照相、眼部OCT检查,调查糖尿病视神经病变在糖尿病患者中的发生率。结果：64例患者128眼中发生糖尿病视神经病变者共12眼,占9．38％。其临床表现多样,轻者无任何临床症状,重者视力明显下降。眼底检查可见视盘水肿、色淡、充血等多种改变,OCT上可见视神经纤维层厚度增加。结论：糖尿病视神经病变在糖尿病患者中的发生率高,且其危害严重,应当引起临床医生的重视。     

早期干预对预防HIE患儿脑瘫发生的临床分析

目的 观察早期干预对缺氧缺血性脑病患儿的疗效、旨在降低残障率.方法 2005年12月～2010年2月在咸阳市儿童医院新生儿科住院治疗并来儿保康复科做早期干预的缺氧缺血性脑病患儿,排除先天畸形、先天性遗传代谢病,分为干预组39例与对照组28例,干预组从新生儿期即进行早期干预,对照组只进行常规喂养指导,未接受早期干预.两组患儿均在3、6个月进行Gesell发育筛查.结果 在3个月时进行Gesell发育筛查,干预组在应人能、动作能方面优于对照组,差异具有统计学意义(t值分别为1.73和1.80,均P＜0.05),但在应物能和语言能上,两组经比较差异不具有统计学意义.在6个月时干预组在应人、应物语言、动作4个方面与对照组经比较差异均具有统计学意义(t值分别为11.58、5.51、3.95和6.53,均P＜0.05).患儿1岁时,干预组较对照组患儿脑瘫例数明显减少,差异有统计学意义(χ2=4.68,P＜0.05).结论 早期干预可明显改善缺氧缺血性脑病患儿预后,降低残障的发生.     

护理干预在糖尿病患者眼底血管造影中的应用

随着人口老龄化和生活方式的变化,糖尿病成为威胁人类健康的世界性公共卫生问题,估计我国现有糖尿病患者超过4千万,居世界第二位。糖尿病视网膜病变是糖尿病的微血管病变最主要表现,是重要的致盲病之一。而荧光素钠眼底血管造影（fluorescinfundnsanglography,FFA）可动态观察视网膜循环,早期发现新生微血管瘤血管性渗漏,无灌注区和黄斑水肿等,成为糖尿病性视网膜病变的诊断、治疗和预后等方面的重要检查手段。由于大部分糖尿病患者同时伴有不同程度高血压、动脉硬化及心、脑、肾病变等全身疾病,故给造影带来一定的风险。因此,了解糖尿病患者的病情,做好眼底血管造影的护理,对确保患者安全及造影的顺利进行十分重要。我院2009年6月至2012年12月对486例糖尿病患者进行FFA,通过是否全程干预对术后不良反应进行观察,总结如下。     

银杏叶提取物对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的:观察银杏叶提取物对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞凋亡的影响并初步探讨可能机制。方法:体外培养ARPE-19细胞株,分为正常组(5.5 mmol·L-1葡萄糖),高糖组(30 mmol·L-1葡萄糖),银杏叶提取物组(30mmol·L-1葡萄糖+12.5,25,50,100 mg·L~(-1)银杏叶提取物)。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;流式细胞术测定细胞凋亡率;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)测定B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原-2(Bcl-2),白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关因子(Fas),Fas受体(Fas L)mRNA和蛋白的表达。Western blot检测c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化及核JNK表达变化。结果:高糖组吸光度A明显低于正常组(P0.05),12.5,25,50,100 mg·L~(-1)银杏叶提取物组比高糖组A明显升高(P0.05);高糖组细胞凋亡率明显高于正常组,12.5,25,50,100 mg·L~(-1)银杏叶提取物组比高糖组细胞凋亡率明显降低(P0.05);与正常组比较,高糖组Bax和Caspase-3,Fas和Fas L表达升高(P0.05),12.5,25,50,100 mg·L~(-1)银杏叶提取物组能降低Bax和Caspase-3的表达,升高Bcl-2表达水平,降低Fas和Fas L表达(P0.05);与正常组比较,高糖组JNK磷酸化及核JNK蛋白水平升高(P0.05),12.5,25,50,100 mg·L~(-1)银杏叶提取物降低JNK磷酸化及核JNK表达(P0.05)。结论:银杏叶提取物能通过JNK通路,抑制细胞凋亡,改善糖尿病视网膜病变。     

血浆Obestatin和精氨酸加压素水平在终末期肾病血液透析效果和预后中应用

目的：探讨血浆肥胖抑制素(Obestatin)和精氨酸加压素(AVP)水平对评估终末期肾病(ESRD)患者血液透析效果与预后结局的临床价值。方法：选择90例本院行维持性血液透析治疗的ESRD患者为观察组,同时选取50名肾功能正常体检者作为对照组。比较两组血浆Obestatin、AVP、肾小球滤过率(GFR)、脑钠肽(BNP)、血肌酐(Scr)、血清白蛋白(Alb)、甲状旁腺激素(PTH)水平的差异。采用Pearson相关分析评估观察组血浆Obestatin以及AVP分别与GFR、SCr、BNP、Alb、PTH相关性。随访12月,根据ESRD患者预后生存情况分为：生存组,共56例;死亡组,共34例。比较两组血浆Obestatin、AVP、GFR、SCr、BNP、Alb及PTH差异。应用多元Logistic回归分析与随访12月ESRD患者生存相关的危险因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估血浆Obestatin以及AVP对随访12月ESRD患者预后的评估价值。结果：与对照组比较,观察组血浆Obestatin、AVP、SCr、BNP水平明显升高(均P<0.05),而GFR、Alb、PTH水平明显降低(均P<0.05)。Pearson相关分析,ESRD患者血浆Obestatin及AVP值分别与GFR呈负相关(P<0.05),与SCr及BNP呈正相关(P<0.05)。生存组ESRD患者的血浆Obestatin、AVP显著低于死亡组(均P<0.05),而GFR显著高于死亡组(P<0.05)。多元Logistic回归分析显示,血浆Obestatin、AVP为随访12月ESRD患者生存相关的危险因素(OR=3.219, P=0.011、OR=2.872, P=0.020)。ROC曲线显示,血浆Obestatin截断值为380.5 pg/ml,预测ESRD患者随访12月预后不良的AUC为0.849,敏感度为87.4%,特异度为79.2%。而AVP截断值为65.4 pg/ml,预测的AUC为0.822,敏感度为86.3%,特异度为80.6%。两者联合预测的AUC为0.885,敏感度为91.0%,特异度为86.4%。结论：ESRD患者血浆Obestatin及AVP值显著增加,且两者联合评估短期预后结局的准确度较好,值得临床推广应用。