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1.
构建玻片蛋白质芯片的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化。方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;最后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果。结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片。结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面.制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析。 相似文献
2.
目的:探讨aFGF及TPK抑制剂Genistein对AGZY-83A细胞内PKC活性游离Ca^2+浓度的影响。方法:用不同浓度的aFGF和Genistein诱导AGZY-83A细胞,(γ-P^32)-ATP标记的Histone Ⅰ为底物,液体闪烁测定PKC活性;Fura-2/AM负载荧光光度法测定细胞内游离Ca^2+浓度。结果:aFGF诱导后,细胞内PKC活性及Ca^2+浓度升高,且与aFGF呈剂 相似文献
3.
目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。 相似文献
4.
目的 探讨高脂饮食对胸主动脉瘤形成过程中细胞黏附分子包括血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法 将30只成年雄性Wistar大鼠随机分为3组,即对照组、手术组和高脂饮食组,采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉.采用地衣红染色和HE染色观察胸主动脉形态学改变;免疫组织化学技术检测CD45、VCAM-1和ICAM-1的表达.结果 高脂饮食组动脉管径较手术组扩张明显,动脉管壁破坏更广泛,伴有更多的炎性细胞浸润;VCAM-1、ICAM-1较手术组表达升高.结论 高脂饮食可促进胸主动脉瘤管壁VCAM-1和ICAM-1的表达. 相似文献
5.
铅对大鼠海马神经元胞质PKC活性的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 :观察不同低浓度醋酸铅不同染铅时间对大鼠海马神经元原代培养细胞胞质蛋白激酶C(PKC)活性及神经元细胞生长的影响。方法 :出生 4~ 8dWistar大鼠海马神经元原代细胞培养 ,显微照相 ,并不同时间不同浓度染铅 ,应用改良的Takai法测定PKC活性的变化。结果 :0 .1~ 1.0 μmol/L染铅 ,PKC活性依浓度依赖方式被激活 ,染铅浓度 >1.0 μmol/L ,PKC活性下降 ;染铅 15min后PKC活性升高并保持。低浓度醋酸铅并可抑制原代神经元细胞生长 ,呈浓度依赖方式。结论 :低浓度醋酸铅可持续激活大鼠海马神经元原代培养细胞胞质PKC ,抑制原代神经元细胞生长。 相似文献
6.
目的:建立肺癌与肺良性胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者表达蛋白质的差异及特点。方法:利用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离肺癌和肺良性胸腔积液中的总蛋白质。凝胶经银染色后用PDQUEST6.2.1电泳分析软件对胸水中的蛋白质谱进行分析,识别差异表达的蛋白质。结果:肺癌与肺良性胸腔积液的蛋白质组分布的基本框架很相似,并可发现二者之间有差异蛋白点;两种胸腔积液电泳图谱平均蛋白质点数分别为326±16和343±12,平均匹配点数为286±14和298±21,匹配率87.7%,86.9%.差异蛋白点82个,其中37个在肺癌胸腔积液中高表达,24个在肺癌胸腔积液中低表达。有17个点仅在良性胸腔积液表达,4个点仅在肺癌胸腔积液表达。结论:用双向电泳法得到了分辨率较高且重复率较好的肺癌与肺良性胸腔积液蛋白质组图谱,二者存在一些表达差异蛋白质。 相似文献
7.
目的:探讨谷氨酸对脑组织即早基因表达的影响以及醋酸锌对谷氨酸诱导c-fos和c-jun过度表达的拮抗作用。方法:体外小鼠海马脑片培养;在培养基中加入200μmol/L的谷氨酸(或同时加入谷氨酸和醋酸锌),作用0.5,1,2,3h,然后进行RT-PCR实验,检测c-fos和c-jun的表达变化。结果:200μmol/L谷氨酸处理的脑片中,1-2h期间c-fos的表达升高,当谷氨酸与100μmol/L醋酸锌共同处理脑片时,1-3h期间c-fos表达基本恢复正常;200μmol/L谷氨酸作用下,脑片c-jun表达水平从0.5h起即明显升高,谷氨酸与醋酸锌共同作用时,可见c-jun基因在各检测时段表达基本接近正常。结论:谷氨酸可引起c-fos及c-jun的过度表达,锌离子可拮抗谷氨酸诱导的c-fos和c-jun过度表达作用,使二基因表达恢复正常。 相似文献
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9.
肝细胞生长因子对肝细胞酪氨酸蛋白激酶内源性底物的磷酸化作用侯伟健,王殿鸿(基础医学院生物化学教研室)关键词肝细胞生长因子,受体,酪氨酸,磷酸化作用肝细胞生长因子(Hepatocytegrowthfactor,HGF)是一种无种属特异性,对肝细胞增殖和... 相似文献
10.
铅与幼鼠脑蛋白激酶C活性及记忆功能改变的关系 总被引:13,自引:3,他引:10
铅具有很强的神经亲和性 ,可在神经组织中蓄积 ,引起神经系统功能 (主要是学习记忆功能 )的长期损害[1~ 4 ] 。铅可干扰神经发育和学习记忆机制中的多个环节。现已知 ,铅通过对PKC(proteinkinaseC ,蛋白激酶C)的异常激活或抑制而干扰LTP(长时程增强 )的形成和维持 ,并影响发育期大鼠脑海马中PKC活性和PKCγ同工酶的分布[5~ 6 ] 。在本研究中我们在体外测定了铅暴露的不同发育期小鼠脑组织PKC活性变化 ,并结合动物行为学测试 ,分析研究了不同浓度铅对不同发育期小鼠脑组织中PKC活性变化及其对小鼠记忆功… 相似文献