不同干燥与提取方式处理的人源胎盘防治贫血活性差异研究

目的 评价经不同干燥与提取方式处理后的人源胎盘样品对斑马鱼贫血模型的影响。方法 取健康产妇新鲜胎盘，经-40℃冷却后于真空冷冻干燥机中冷冻干燥，研磨成粉，制成胎盘冻干粉；取健康产妇的新鲜胎盘，于90℃热风循环烘箱中烘干，研磨成粉，制成胎盘烘干粉。胎盘冻干粉或烘干粉分别经胰蛋白酶酶解提取、梯度溶剂（依次为水、50%乙醇水、无水乙醇、二氯甲烷）提取。发育至56 h（56 hpf）的健康野生型AB系斑马鱼分为对照组、模型组、给药组，对照组给予斑马鱼养殖水，模型组给予0.1 μg·mL^-1苯肼溶液制备贫血模型，给药组给予苯肼与胎盘冻干粉或烘干粉各提取样品，样品质量浓度分别为10、20、50、100 μg·mL^-1，培养至3 dpf，采用O-dianisidine染色法对斑马鱼进行红细胞染色。结果 与对照组比较，模型组红细胞染色积分吸光度显著下降（P＜0.001）。与模型组比较，胎盘冻干粉酶解样品100 μg·mL^-1组，水提样品10、20、50、100 μg·mL^-1组，醇提样品20、100 μg·mL^-1组，50%醇提样品10、20 μg·mL^-1组，二氯甲烷提取样品10、20、50、100 μg·mL^-1组红细胞染色积分吸光度显著增加（P＜0.05、0.001）；胎盘冻干粉酶解样品20 μg·mL^-1组，水提样品10、20 μg·mL^-1组，醇提样品20、50、100 μg·mL^-1组，二氯甲烷提取样品50、100 μg·mL^-1组红细胞染色积分吸光度显著增加（P＜0.05、0.01、0.001）。经酶解、水提取及二氯甲烷提取的胎盘冻干粉样品和经水提取、醇提取及二氯甲烷提取的胎盘烘干粉样品作用呈浓度相关性，其中冻干粉水提取样品100 μg·mL^-1效果最佳，染色后的红细胞积分吸光度达到对照组的94.77%。结论 人源胎盘样品处理方式可优先选择冻干技术结合水提取方式。     

紫河车冻干粉改善睡眠作用及机制研究

目的 研究紫河车冻干粉改善睡眠的作用及机制。方法 利用ip氯苯丙氨酸(PCPA)法制备大鼠失眠模型,设置对照组、模型组和紫河车冻干粉低、中、高剂量(0.09、0.18、0.36 g·kg^-1)组,每天ig给药1次,连续给药7 d,对照组和模型组ig等量去离子水。通过检测体质量增长量、一般观察、翻正实验、旷场实验、强迫游泳实验、悬尾实验评价紫河车冻干粉改善睡眠的作用;利用Western blotting技术检测γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)、谷氨酸脱羧酶-65(GAD65)、γ-氨基丁酸转运体1(GAT1)蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,紫河车冻干粉低、中、高剂量组大鼠体质量增加量显著升高(P＜0.01);中、高剂量紫河车冻干粉具有显著缩短睡眠潜伏期(P＜0.05)、显著延长睡眠时间(P＜0.01)的作用;高剂量紫河车冻干粉使大鼠中央格停留时间显著延长(P＜0.01)、中央格穿格次数显著增多(P＜0.05)、站立次数和修饰次数显著增多(P＜0.01),说明高剂量紫河车冻干粉能够减轻失眠大鼠焦虑情绪,增强自发探索活动能力;高剂量紫河车冻干粉使大鼠漂浮时间缩短(P＜0.05),挣扎时间延长(P＜0.01),说明高剂量紫河车冻干粉能够减轻失眠大鼠的抑郁状态。Western blotting结果显示,与模型组相比,紫河车冻干粉处理组大鼠下丘脑组织中GABA-T的表达水平显著降低(P＜0.05),GAD65、GAT-1的表达水平显著升高(P＜0.05、0.01)。结论 紫河车冻干粉可能通过调控GABA-T、GAD65、GAT-1蛋白的表达水平,发挥改善睡眠的作用。     

基于斑马鱼模型不同提取方法人源胎盘冻干粉抗抑郁活性及作用机制研究

目的 明确人源胎盘冻干粉是否具有抗利血平诱发斑马鱼抑郁症的活性，比较不同提取方法胎盘冻干粉抗抑郁活性并探索其作用机制。方法 将6月龄野生型斑马鱼AB随机分为8组：对照组、模型组、丁螺环酮（阳性药，3mg·L^-1）组和胎盘冻干粉酶解、水提、50%醇提、醇提、二氯甲烷提（均为5mg·L^-1）组，每组12条。除对照组外，各组以利血平处理20min造模，而后更换相应含药养鱼用水，至14d，每天换水。14d时用Zebrabox斑马鱼行为分析仪对各组斑马鱼进行新型水槽测试，分析其行为变化。收集鱼脑，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测抑郁、神经调控相关基因（bdnf、pomc、hcrt、mao、nf-κb、pparγ）的mRNA表达；试剂盒法检测氧化应激相关超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性。结果 与对照组比较，模型组斑马鱼进入新型水槽上部次数显著减少（P＜0.001），上部游动距离及时间比例均显著减少（P＜0.001）；与模型组比较，丁螺环酮、胎盘冻干粉酶解物组斑马鱼进入上部次数显著增加（P＜0.05），上部游动距离及时间比例均显著增加（P＜0.05）。与对照组比较，模型组中的bdnf、pomc、hcrt和mao基因表达显著上调（P＜0.01、0.001），nf-κb和pparγ基因表达显著下调（P＜0.05、0.01）；与模型组比较，经不同提取方法胎盘冻干粉处理后bdnf、pomc和mao基因表达显著下调（P＜0.05、0.01、0.001），酶解、水提、醇提组hcrt mRNA水平显著降低（P＜0.05、0.001），酶解、水提组nf-κb mRNA水平和酶解组pparγ mRNA水平显著上调（P＜0.01）。与对照组比较，模型组CAT活性显著升高（P＜0.001），SOD活性升高，但没有统计学意义；与模型组比较，经不同提取方法胎盘冻干粉处理后CAT活性显著降低（P＜0.001），SOD活性有不同程度的降低。结论 人源胎盘冻干粉具有抗利血平诱发斑马鱼抑郁症的活性，且胎盘冻干粉酶解抗抑郁症活性最好，作用机制可能与改善氧化应激状态有关。     

基于斑马鱼模型的紫河车冻干粉水提物抗衰老功效研究

目的 应用斑马鱼模型评价紫河车冻干粉水提物（PHFAE）抗衰老的功效。方法 将健康产妇新鲜胎盘冷冻干燥后碾磨为粉，并使用蒸馏水进行提取，制成紫河车冻干粉水提物（PHFAE）。发育8 h （8 hpf）的AB系斑马鱼使用PHFAE（0、1、10、25 μg·mL^-1）连续作用72 h，对其体内β-半乳糖苷酶进行染色。随后将AB系与皮肤荧光转基因斑马鱼均随机分成对照组、模型组和PHFAE （1、10、25 μg·mL^-1）组，对照组给予培养水，模型组给予0.5 mmol·L^-1 H₂O₂溶液制备氧化损伤模型，PHFAE组同时给予H₂O₂与不同浓度PHFAE，连续作用72 h后，测定皮肤表面荧光斑点的数量；试剂盒法检测鱼体内活性氧（ROS）含量；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测ampk、mdm2、Cu/Zn-sod和Mn-sod的mRNA表达变化。结果 与对照组比较，1、10、25 μg·mL^-1的PHFAE组斑马鱼体内β-半乳糖苷酶的活性均显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，1、10、25 μg·mL^-1的PHFAE显著抑制H₂O₂诱导的角质细胞的死亡（P＜0.01），明显抑制ROS的积聚，显著升高ampk、mdm2、Cu/Zn-sod和Mn-sod的mRNA表达（P＜0.01）。结论 PHFAE通过调控ampk、mdm2、Cu/Zn-sod和Mn-sod基因的表达，提高了机体的抗氧化能力，进而发挥抗衰老之功效。