产硫酸软骨素酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化

目的从土壤中分离筛选产硫酸软骨素酶活性较高的菌株,对目标菌株进行鉴定及发酵条件优化,分析其酶解产物。方法通过初筛及复筛筛选出1株高产硫酸软骨素酶菌株LHYM225,经形态学观察及16SrDNA序列测定并进行系统发育分析对其进行鉴定。利用单因素实验及正交实验对发酵培养基组分及发酵条件进行了优化。通过质谱法检测该酶的酶解产物。结论 16SrDNA序列分析表明菌株LHYM225与节杆菌属菌株(Arthrobacter)亲缘关系最近,将其初步鉴定为节杆菌属菌株(Arthrobacter sp.),该菌株的最佳发酵培养基:硫酸软骨素0.8%,KH2PO40.02%,酵母浸粉0.6%,MgSO4·7H2O...     

甲壳素疝补片修复大鼠腹壁部分缺损模型的研究

目的 评价制备的甲壳素疝补片的基本力学性能、细胞相容性及其对腹壁部分缺损大鼠模型的修复作用。方法 AGS-X拉力机测试甲壳素疝补片基本力学性能,评价甲壳素疝补片对L929细胞相容性,制作SD大鼠腹壁部分缺损模型,评价甲壳素疝补片对腹壁缺损的修复作用。结果 甲壳素疝补片无明显细胞毒性,较聚丙烯补片炎症反应轻,不引起腹壁组织生理结构的非正常变化,其力学强度还需要进一步提高。     

副溶血弧菌噬菌体的发酵优化及中试制备工艺探索

目的 为了以低成本的方法制备出高效价的噬菌体制剂，对副溶血弧菌噬菌体Vpas_PP24的发酵条件和关键工程化制备工艺进行探索。方法 采用单因素实验法，研究噬菌体Vpas_PP24发酵体系的不同培养基、金属离子、pH、接种量及培养时间对其效价的影响；在中试规模对优化发酵工艺进行了工程化放大；并以膜过滤结合热除菌法进行了下游工程化噬菌体分离及终端除菌工艺探索。结果 确立了副溶血弧菌噬菌体Vpas_PP24的最优培养基及最佳发酵条件。摇瓶水平最适出发培养基为2216E液体培养基；Mg2+和Ca2+可促进Vpas_PP24的增殖，且最适浓度为30 mmol·L-1；最适pH为8；VP8最适接种量为1%；最适培养时间为16 h。在摇瓶水平优化后的效价达到3.0×1010 PFU/mL，较优化前提高了14倍。随之，基于该优化条件，成功将噬菌体发酵放大到50 L中试规模，并建立上游液体深层发酵工程化生产Vpas_PP24的上游工艺，效价达到3.2×1010 PFU/mL，与此同时，建立了下游噬菌体除菌工艺，得到效价为2.5×108 PFU/mL的噬菌体Vpas_PP24批量液体制剂。结论 系统优化了噬菌体Vpas_PP24的发酵条件，并在中试规模进行了工艺放大，成功建立了中试上游噬菌体发酵工艺及下游噬菌体分离工程化工艺及末端去除宿主菌的技术手段，为噬菌体类替抗产品的工程化生产提供了可参考的范例。