RPE细胞光损伤相关新基因s-lap编码区克隆及s-lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞中的表达与定位

目的 克隆新基因s-lap编码区序列，研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。方法 分析s-lap cDNA序列，建立视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞光损伤模型，RT-PCR克隆其编码区序列，构建了带有绿色荧光蛋白的目的基因真核表达重组质粒pcDNA3.1-GFP/s-lap，转染B16黑色素瘤细胞，观察s-lap／GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。结果 s-lap cDNA序列含有编码101个氨基酸的开放读码框架，有2个可能的N-糖基化位点，1个可能的casein kinase Ⅱ磷酸化位点和2个可能的PKC磷酸化位点；成功地克隆了s-lap蛋白编码区序列，构建了其真核表达载体，荧光显微镜观察，在转染pcDNA3．1-GFP质粒的B16黑色素瘤细胞中，荧光呈网状分布于细胞浆内，而细胞核内低表达；在转染s-lap／GFP融合基因的B16黑色素瘤细胞中，荧光均匀分布于整个细胞，尤其以细胞核内高表达。结论 新基因s-lap编码的蛋白质可在B16黑色素瘤细胞中获得表达，并以细胞核内高表达。     

角膜塑形镜治疗近视的有效性和安全性研究现状

<正>青少年为近视的高发群体,有研究[1]显示我国青少年近视患病率为38.37%(95%CI29.06%~48.61%),北方、南方、西部地区合并患病率分别为29.77%、40.00%、42.75%。2001—2007年、2008—2014年合并患病率分别为40.55%、36.23%,小学、初中和高中的合并患病率分别为22.53%、51.07%、65.44%,轻度、中度和重度近视合并患病率分别为 更多还原     

新基因s-lap编码区的克隆及其重组表达质粒PHB/s-lap的构建

目的：克隆新基因s-lap编码区序列并构建其重组表达质粒。 方法：利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法,以可见光损伤早期的培养的猪视网膜色素上皮（RPE）细胞ds cDNA为模板,扩增新基因s-lap编码区序列;利用基因重组技术构建PHB/s-lap重组表达质粒。 结果：经测序证实获得了正确的新基因s-lap编码区序列,酶切鉴定及DNA序列分析表明已经将s-lap基因编码区序列克隆到PHB表达载体, 成功地构建了PHB/s-lap重组表达质粒。结论：成功地克隆了新基因s-lap编码区序列,并构建了其重组表达质粒PHB/s-lap。     

有氧运动训练对剥夺性弱视小鼠视觉功能及皮层突触可塑性的影响

目的 探讨有氧运动训练对单眼剥夺性(MD)弱视小鼠视觉功能及对视皮层突触可塑性的影响。方法 选取40只7 d龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为Sham+Control组、Sham+Exercise组、MD+Control组及MD+Exercise组,每组10只。视动反应检测小鼠的视功能;神经元特异核蛋白(NeuN)免疫荧光染色观察小鼠视皮层神经元的数目及结构;微管相关蛋白2(MAP2)免疫荧光染色观察小鼠视皮层神经元轴突和树突形态,并比较树突棘密度;膜片钳技术记录视皮层L5锥体神经元电生理活动。结果 与Sham+Control组相比,MD+Control组小鼠视功能、皮层神经元数目、树突棘密度及自发放电频率均显著下降(均为P<0.01),神经元结构完整性受损;而经过有氧运动训练后,与MD+Control组相比,MD+Exercise组小鼠的视功能、皮层神经元数目、树突棘密度及自发放电频率均显著增加(均为P<0.05),神经元结构完整性得到改善。结论 有氧运动对剥夺性视皮层神经异常具有改善作用。