人乳头瘤病毒16型E6/E7基因shRNA真核表达载体构建及其对人宫颈癌SiHa细胞增殖及迁移能力的影响

目的 构建针对人乳头瘤病毒16型E6/E7基因的shRNA真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的人宫颈癌SiHa细胞系并探讨其对SiHa细胞增殖及迁移能力的影响。方法 合成3条特异性干扰HPV16 E6/E7基因的shRNA片段并定向插入psilencer 2.1-U6 hygro载体,构建重组质粒psilencer 2.1-U6hygro-shE6/E7并转染入人宫颈癌SiHa细胞, Real- time PCR检测转染后细胞E6/E7 mRNA的表达,选择沉默效应最好的重组质粒并用潮霉素B稳筛,获得稳定表达重组质粒的SiHa细胞,并用real time-PCR和Western blot方法进行鉴定;分别运用CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕愈合实验检测细胞的增殖及迁移能力。结果　测序证实针对HPV16 E6/E7的shRNA真核表达载体psilencer 2.1-U6 hygro-shE6/E7构建正确;转染psilencer 2.1-U6 hygro-shE6/E7的SiHa细胞HPV16 E6/E7表达明显受抑,同时其增殖及迁移能力也明显受抑制。结论 psilencer 2.1-U6 hygro-shE6/E7真核表达载体的成功构建并获得稳定沉默表达HPV16 E6/E7的人宫颈癌SiHa细胞系,证实沉默表达HPV16 E6/E7的SiHa细胞增殖及迁移能力会明显受到抑制,这为进一步研究HPV 16 E6/E7基因在宫颈癌发生发展过程中的功能奠定了实验基础。     

乌鲁木齐市2010-2014年男男性行为兼异性性行为者HIV感染状况及相关因素分析

目的 了解乌鲁木齐市（乌市）男男性行为兼异性性行为者（MSMW）人口学、行为特征及HIV感染因素。方法 按照《全国艾滋病哨点监测实施方案》,通过哨点监测系统获取乌市某区2010-2014年MSM一般人口学、性行为及血清学等资料,按其是否近6个月内与异性发生过性行为分MSMW、仅为男男性行为者（MSMO）两个亚组人群对比分析。结果 共监测MSM 2 073人,其中MSMW 216人（10.4%）,MSMO 1 857人（89.6%）。MSMW年龄集中在>30岁为115人（53.2%）,与MSMO相比,MSMW倾向于与同性发生商业性行为（OR=2.09,95%CI：1.35～3.21）;且最近一次同性性行为安全套使用率较低（OR=0.58,95%CI：0.40～0.85）。MSMW和MSMO人群HIV感染率分别为7.4%和9.0%,差异无统计学意义（χ²=0.604,P>0.05）。多因素logistic回归分析显示,MSMW感染HIV的影响因素为最近一次同性肛交性行为时使用安全套（OR=0.24,95%CI：0.09～0.71）、最近一周同性肛交性行为次数（OR=6.63,95%CI：1.47～29.90）;MSMO人群感染HIV的影响因素为非汉族（OR=6.40,95%CI：1.62～25.36）、本地居住时间短（OR=7.47,95%CI：1.98～28.20）、同性商业性行为从未/有时使用安全套（OR=6.14,95%CI：1.93～19.52）。结论 乌市MSMW亚人群HIV感染状况与其影响因素较MSMO差异较大,应制定针对不同亚群体的预防策略。     

宫颈腺癌细胞中HPV18-E7与上皮间质转化的关系研究

目 的:探究宫颈腺癌细胞中HPV18-E7与上皮间质化(EMT)之间的关系。方法: 针对HPV18-E7的siRNA转染入人宫颈腺癌HeLa细胞,观察细胞形态变化,并运用Realtime PCR技术、免疫印迹实验和细胞免疫荧光染色实验在mRNA水平和蛋白水平检测E7、EMT相关的标记因子的表达及定位变化;应用细胞划痕愈合实验及Transwell细胞体外侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果: 特异性沉默HPV18-E7表达后HeLa-siE7细胞间连接变得疏松,细胞中E7与间质性标记物的mRNA及蛋白表达水平较对照组细胞显著下降,上皮性标记因子较对照组细胞明显增加（P<0.01）;随着HeLa细胞E7表达的下调,E-cadherin在细胞膜上的表达增加,间质性标记因子在细胞质内的表达随之下降。HeLa-siE7细胞迁移及侵袭能力明显低于对照组（P<0.01）;沉默HPV18-E7表达的HeLa细胞其增殖能力也明显减弱。结论:宫颈腺癌细胞中HPV18-E7能够引起EMT发生,促进肿瘤发生侵袭转移。     

Prognostic impact of peak oxygen uptake and heart rate reserve in patients after off‐pump coronary artery bypass grafting

BackgroundPeak oxygen uptake (peak VO₂) and heart rate reserve (HRR) are independent prognostic markers of cardiovascular disease. However, the impact of peak VO₂ and HRR on long‐term prognosis after off‐pump coronary artery bypass grafting (OP‐CABG) remains unclear.HypothesisTo determine the prognostic impact of peak VO₂ and HRR in patients after OP‐CABG.ResultsWe enrolled 327 patients (mean age, 65.1 ± 9.3 years; male, 80%) who underwent OP‐CABG and participated in early phase II cardiac rehabilitation. All participants underwent cardiopulmonary exercise testing (CPET) at the beginning of such rehabilitation. Overall, 48 (14.6%) patients died during the median follow‐up period of 103 months. The non‐survivor had significantly lower levels of peak VO₂ (10.6 ± 0.5 vs. 13.7 ± 0.2 ml/kg/min, p < .01) and HRR (24.2 ± 1.8 vs. 32.7 ± 0.8 beats/min, p < .01) than the survivor. In both groups, peak VO₂ significantly correlated with HRR (p < .01). Moreover, patients were divided into four groups according to the peak VO₂ and HRR levels for predicting total mortality. The low‐peak VO₂/low‐HRR group had a significantly higher mortality risk than the other groups (hazards ratio, 5.61; 95% confidence interval, 2.59–12.16; p < .01). After adjusted the confounding factors, peak VO₂ and HRR were independently associated with total mortality (both p < .05).ConclusionsHRR is a simple parameter of CPET and an important prognostic marker for the risk stratification of total mortality even in patients with low‐peak VO₂ after OP‐CABG.