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目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。 相似文献
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H5N1病毒高度变异,为确保本中心研制的H5N1禽流感病毒抗原快速诊断试剂对不同变异分支的H5N1病毒,特别是实时流行株的高度检测准确性,本研究根据抗原活性变异情况对中心开发的第一代H5抗原快速诊断试剂进行了改进。改进后的第二代H5抗原快速诊断试剂(H5-Dot-2nd)对25株代表亚洲地区流行的不同进化分支的H5N1禽流感病毒检测均为阳性,其中12株检测下限达到0.01HA;而对20株32HA滴度的非H5亚型流感病毒株检测均为阴性;不同机构的评价结果显示,H5-Dot-2nd的灵敏度比国外同类试剂高出10～1000倍,对非H5现场标本特异性达到99.0%(399/403)。上述结果提示,H5-Dot-2nd对历年来特别是当前流行株均具有很好的检测灵敏度,能更好地满足流感疫情监控的需要。 相似文献
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