表面等离子体共振技术快速筛检人血清蛋白质表达的方法应用

为建立用表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)技术快速筛检大样本人群血清蛋白质表达的方法,并用该法检测塑料垃圾拆解回收工人血清蛋白质是否存在异常表达。研究人员选取国内某地区从事塑料垃圾拆解回收的208名职业工人为暴露人群,生活水平和生活习惯相近且无已知污染源的197名农业人口为对照人群。用SPR技术检测     

邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯对MCF-7细胞DNA的氧化损伤

目的:研究邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(mono-2-ethylexyl phthalate,MEHP)对人乳腺癌MCF-7细胞DNA氧化损伤的作用。方法:分别用不同浓度的MEHP(6.25、12.5、25、50和100μmol/L)和二甲基亚砜(溶剂对照,0.1%)处理MCF-7细胞12和24 h后用MTT比色法检测细胞的存活率。再分别于染毒后1.5、3、6、12和24 h,测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OHdG)水平。结果:与对照组比较,MEHP染毒12 h,6.25和12.5μmol/L组细胞的存活率显著增加(P0.05)。MEHP染毒24 h,在较高浓度处理组(≥25μmol/L)的细胞存活率显著降低(P0.05);各处理组细胞的SOD活性有所增加,细胞MDA水平、GSH-Px活性以及8-OHdG生成量无显著变化(P0.05)。当MEHP染毒MCF-7细胞较短时间(1.5、3和6 h)时,各处理组MDA水平和8-OHdG生成量均显著升高(P0.05),而SOD和GSH-Px活性则显著性降低(P0.05)。结论:一定浓度MEHP作用在短时间内(1.5、3和6 h)可引起MCF-7细胞的氧化应激反应,并触发细胞DNA的氧化性损伤,具体调控机制有待深入研究。     

B（a）P和DEHP联合染毒对HepG2细胞CYP1A1和CYP3A4酶活性的影响

[目的]研究邻苯二甲酸二乙基己基酯[di-（2-ethylhexyl）phthalate,DEHP]和苯并㈦芘[benzo（a）pyrene,B（a）P]联合染毒人肝癌细胞株（HepG2细胞）对其细胞色素P450酶系1A1（cytochrome 1A1,CYP1A1）和细胞色素P450酶系3A4（CYP3A4）酶活性的影响。[方法]分别用B（a）P64．0μmol／L和DEHP62．5、125．0、250．0、500．0、1000．0μmol／L单独染毒和两者联合染毒HepG2细胞48h和72h。溶剂对照组为二甲基亚砜（dimethyl suffoxide,DMSO〈1‰）。用CCK8法检测细胞活性;用7-乙氧基异吩嗯唑-O-去乙氧基酶和7-乙氧基香豆素O-去乙基酶（EROD和ECOD）实验评价细胞CYP1A1和CYP3A4酶活性;分别用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测CYP1A1和CYP3A4基因的mRNA和蛋白质表达水平。[结果]与DEHP单独染毒组相比,联合染毒组细胞的存活率明显下降（P〈0．01）;EROD和ECOD活性却明显增加（P〈0．05,P〈0．01）;联合染毒组CYP1A1基因仅有mRNA表达增加,但CYP3A4基因在mRNA和蛋白质表达水平均较DEHP单独染毒组明显升高（P〈0．01）。[结论]DEHP和B（a）P联合染毒诱导了HepG2细胞CYP1A1和CYP3A4酶活性,并在mRNA和蛋白质水平对CYP1A1和CYP3A4的表达量产生一定影响。     

p73和GADD45α蛋白在邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯致人正常肝细胞L02和人肝癌细胞Hep3B周期阻滞中的作用

目的 研究抑癌基因p73和生长抑制及DNA损伤诱导基因45α(GADD45α)蛋白对邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯[di( 2-ethylhexyl )phthalate,MEHP]染毒人正常肝细胞L02和人肝癌细胞Hep3B周期的影响。方法 将处于对数生长期的L02细胞和Hep3B细胞分别暴露于终浓度为0（溶剂对照,...     

DEHP与BaP联合诱导Chang liver细胞线粒体 介导细胞凋亡作用

目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)与苯并(a)芘(BaP)联合染毒对Chang liver细胞的毒性。方法 DEHP(62.5、125、250、500和1 000 μmol/L)与BaP(64 μmol/L)单独或联合染毒Chang liver细胞24 h,检测细胞活力、细胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡率和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)以及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达量。结果 联合染毒各组细胞存活率均低于DEHP单独染毒组(t=6.22、4.64、6.64、5.84、7.29,P<0.01),但胞内ROS水平均升高(t=4.57、2.23、2.39、2.22、2.16,P<0.05或P<0.01);≥250 μmol/L DEHP与BaP联合染毒组的MMP分别为(80.12±6.41)%、(69.92±5.56)%和(53.76±1.88)%,均低于BaP单独染毒组的(165.93±5.09)%(t=10.92、12.51、14.62,P<0.01);细胞凋亡率分别为(7.73±1.91)%、(11.00±3.04)%和(14.20±3.96)%,均高于BaP单独染毒组的(1.55±0.21)%(t=3.96、6.06、8.11,P<0.01);此外,活化caspase-3的高表达和升高的Bax/Bcl-2比值也被检出。结论 较高浓度DEHP与BaP联合染毒Chang liver细胞促发ROS水平升高和线粒体膜电位降低,并导致了细胞凋亡;Bax、Bcl-2和活化caspase-3参与了此调控过程。     

表面等离子体共振技术快速筛检人血清蛋白质表达的方法应用

[目的]建立用表面等离子体共振（surface plasmon resonance,SPR）技术快速筛检大样本人群血清蛋白质表达的方法,并用该法检测塑料垃圾拆解回收工人血清蛋白质是否存在异常表达。[方法]选取国内某地区从事塑料垃圾拆解回收的208名职业工人为暴露人群,生活水平和生活习惯相近且无已知污染源的197名农业人口为对照人群。用SPR技术检测研究对象血清中HSP90、HSP70、HSP60、CYP1A1和XPA蛋白质含量。[结果]人血清HSP90、HSP70、HSP60、CYPIAl和XPA蛋白质均可检出;用磷酸盐蛋白缓冲液（phosphate buffer solution,PBST）以1：100体积比稀释血清后即可进行检测,检测流速为25μL／min。暴露人群的血清中HSP60、HSP70、CYP1A1蛋白质含量均高于对照人群（P〈0．05）。[结论]SPR技术可用于检测大样本人群血清蛋白质的表达,且具有用样量少、高通量、快速、灵敏的优势;从事塑料垃圾拆解回收的工人血清HSP60、HSP70、CYP1A1蛋白质表达量较高,可能与其职业环境中污染物暴露有关。     

不同浓度的多壁碳纳米管对HEK293细胞的影响

目的 研究多壁碳纳米管(MWCNT)对正常人胚肾293细胞的增生及细胞活性的影响.方法 采用离体培养的正常人胚肾293细胞株,接种人96孔板,细胞生长18h后加入不同浓度的单壁碳纳米溶液,碳纳米溶液作用于人胚肾293细胞48个h后,使用MTT(methyl thiazolyl tetrazoliun)比色法测每个孔的吸光值,计算人胚肾293细胞的生长抑制率并绘制细胞活性曲线.结果 不同浓度的多壁碳纳米管对人胚肾293细胞具有不同程度的抑制作用,且当其浓度达到0.5μg/ml时对细胞出现显著的抑制作用.结论 多壁碳纳米管能通过正常人胚肾293细胞膜进入细胞内,一定程度地影响细胞的活性,到达一定剂量时,细胞增生能力显著降低.因此,可以推测多壁碳纳米管对正常细胞生长作用有一定的安全剂量范围.     

碳纳米管对小鼠肝和肺细胞DNA损伤的彗星实验研究

目的检测碳纳米管进入小鼠体内后对小鼠肝细胞和肺细胞DNA的损伤作用。方法将小鼠分别用不同剂量多壁碳纳米管(0.1、0.2、0.4mg/ml)暴露14天,每次0.2ml,每隔24h暴露1次,用单细胞凝胶电泳技术检测肝细胞和肺细胞DNA的损伤程度。结果0.1mg/ml剂量大小的碳纳米管可造成小鼠肝细胞和肺细胞DNA的严重断裂(P<0.01),而0.2、0.4mg/ml剂量则引起了明显的交联作用。结论碳纳米管可造成机体内肝细胞和肺细胞DNA的断裂和交联。     

p73在苯并(a)芘致人肺纤维细胞株MRC-5和人肺腺癌细胞株H1299(p53-null)周期阻滞中的作用

目的 研究p73在苯并(a)芘[B(a)P]致人肺纤维细胞株MRC-5和人肺腺癌细胞株H1299(p53-null)周期阻滞中的作用.方法 采用0(溶剂对照)、8、16、32、64和128 μmol/L的B(a)P分别处理处于对数生长期的MRC-5和H1299细胞24 h.采用MTT比色法检测两种细胞系的生长率,采用流式细胞术检测细胞周期各时相的细胞百分比,采用实时荧光定量PCR方法测定p53,p73,p21和Gadd45的mRNA表达水平.结果 与溶剂对照组比较,8、16、32、64μmol/L B(a)P染毒组MRC-5细胞和H1299细胞的增殖活性均升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).16μmol/L B(a)P染毒组MRC-5细胞和32 μmol/LB(a)P染毒组H1299细胞的增殖活性达到峰值,与溶剂对照组相比,分别增加了40%和30%.与溶剂对照组比较,8、16、32、64和128μmol/L的B(a)P染毒组MRC-5细胞的p53.p73和p21基因mRNA表达水平上升,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),细胞阻滞在G1期.与溶剂对照组比较,8 μmol/L的B(a)P染毒组H1299细胞p73和p21基因mRNA表达的表达水平上升,差异均有统计学意义(P＜0.05),细胞阻滞在G1期;但各处理组Gadd45基因的mRNA表达水平间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 一定浓度B(a)P可通过p53介导引起MRC-5细胞周期G1期阻滞,而对于p53缺失的H1299细胞,其细胞周期G1期阻滞可能依赖于p73参与的细胞信号通路的调节.