自制裸磁珠对常见食源性致病菌吸附性能的研究

目的：研究自制裸磁珠对常见食源性致病菌和卫生指示菌的吸附性能，摸索从样品中快速分离和浓集细菌的方法。方法：试验裸磁珠对细菌的吸附性能，摸索温度和样品成分对其吸附性能的影响。结果：自制裸磁珠在37℃对常见食源性致病菌和卫生指示菌有很强的吸附，吸附率均高于97％。食品成分对其吸附有一定影响，吸附率最低为58．42％。结论：自制裸磁珠可望用于环境和食品样品中多种细菌的非特异性吸附分离和浓集，值得进一步研究和推广。     

RNF43通过β-catenin抑制黑色素瘤细胞PD-L1表达并促进CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应

目的探讨环指蛋白43(RNF43)对黑色素瘤中CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的调节作用。方法利用慢病毒感染技术对小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA进行RNF43基因过表达与敲低;通过小鼠皮下成瘤实验检测Lv-Ctrl-OE组、Lv-RNF43-OE组、Lv-Ctrl-KD组和Lv-RNF43-KD组小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA体内增殖情况,通过流式细胞术检测黑色素瘤肿瘤免疫微环境中CD8^(+)T细胞穿孔素和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平;采用实时荧光定量PCR实验检测细胞中β-catenin和程序性死亡受体配体1(PD-L1)mRNA的表达水平;通过双荧光素酶报告基因实验检测RNF43对PD-L1的转录调控作用。结果本研究成功构建RNF43稳定过表达与敲低的小鼠黑色素瘤细胞株Lv-RNF43-OE和Lv-RNF43-KD。小鼠皮下成瘤实验结果显示,Lv-RNF43-OE组瘤体质量为(0.08±0.06)g,明显小于Lv-Ctrl-OE组的(1.04±0.52)g,差异有统计学意义(t=3.71,P=0.032);Lv-RNF43-KD组瘤体质量为(1.94±0.29)g,与Lv-Ctrl-KD组的(1.15±0.74)g相比差异无统计学意义(t=-1.70,P=0.164)。流式细胞术结果显示,Lv-RNF43-OE组CD8^(+)T细胞穿孔素荧光强度为9034±2628,明显高于Lv-Ctrl-OE组的3847±1637,差异有统计学意义(t=-3.35,P=0.015);Lv-RNF43-KD组CD8^(+)T细胞穿孔素荧光强度为966±247,明显低于Lv-Ctrl-KD组的2226±646,差异有统计学意义(t=3.16,P=0.034);Lv-RNF43-OE组CD8^(+)T细胞IFN-γ荧光强度为2422±429,明显高于Lv-Ctrl-OE组的1688±324,差异有统计学意义(t=-2.73,P=0.034);Lv-RNF43-KD组CD8^(+)T细胞IFN-γ荧光强度为614(454,863),与Lv-Ctrl-KD组的1159(1152,2068)相比差异有统计学意义(Z=-1.96,P=0.050)。实时荧光定量PCR实验结果显示,Lv-RNF43-OE组β-catenin mRNA相对表达量为0.67±0.16,明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.11,差异有统计学意义(t=2.98,P=0.041);Lv-RNF43-OE组PD-L1 mRNA相对表达量为0.32±0.09,明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.09,差异有统计学意义(t=9.13,P=0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,pCMV6-NC组、RNF43组、RNF43^(+)β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性分别为1.00±0.00、0.84±0.00、1.49±0.00和1.57±0.03(F=2218.33,P<0.001),进一步两两比较发现,与pCMV6-NC组相比,RNF43组PD-L1启动子荧光素酶活性明显降低(P<0.001),RNF43^(+)β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高(P<0.001;P=0.003);与RNF43组相比,RNF43^(+)β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高(P<0.001)。结论RNF43可能通过抑制β-catenin的表达降低黑色素瘤中PD-L1 mRNA的表达并促进CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。     

多重PCR快速检测致泻大肠埃希菌

大肠埃希菌(Escherichia coli,E. coli)是寄居在人和动物肠道中的正常菌群之一,但其中一些菌株携带毒力基因,具有致病性,能引起人类腹泻,被称为致泻E.coli.     

淋球菌临床分离株外膜蛋白PJ基因序列与耐药性关系初探

目的研究成都地区淋球菌临床分离株PI基因序列与青霉素和四环素耐药性的关系。方法用T-A克隆的方法得到PI基因克隆重组子,对PI基因测序后,用序列分析软件进行分析。同时测定青霉素和四环素对淋球菌的最低抑菌浓度,比较耐药性与PI基因序列的相关关系。结果成功克隆并测序淋球菌PI基因,17条PI序列根据blastn结果可分为PIA和PIB两类。序列在影响淋球菌耐药性的第120和121位的氨基酸序列仅有部分发生单位点的D突变,未见文献报道的双位点D突变。5-9、6-1两条序列在120位发生K突变,且2株菌的耐药性均处于中等水平,与文献报道一致。结论成都地区淋球菌临床分离株外膜蛋白PI的序列与染色体介导的青霉素和四环素耐药性可能存在一定的相关关系,是否与PI基因序列120和121位氨基酸残基突变相关,还有待调查更多的临床分离株。     

33例创伤性膈疝的诊断与治疗分析

目的总结分析33例创伤性膈疝患者的诊断及治疗经验。方法回顾分析2005年1月至2010年12月收治的33例创伤性膈疝患者病历资料,探讨诊断方法、手术原则及切口选择。结果 33例患者中,术前通过病史、体征、辅助检查确诊有25例（75.8%）,高度怀疑术中探查确诊的8例（24.2%）,其中在转入15例中院外误诊、漏诊10例（66.7%）。入院后均在72 h内明确诊断及手术,手术径路选择腹部切口19例（57.6%）,胸部切口10（30.3%）,采用胸腹联合切口4例（12.1%）。结论创伤性膈疝临床表现缺乏特异性,大多合并多部位严重损伤或休克,故容易误诊漏诊。因此,早期正确诊断是其治疗的关键,手术是其唯一的确定性治疗方法。     

裸磁珠对高菌量细菌吸附性能的初步研究

目的：研究不同实验条件下自制裸磁珠对细菌吸附效率，优化吸附条件，为后续裸磁珠的应用研究奠定基础。方法：考察不同的磁珠用量、菌量、孵育温度、孵育时间下磁珠对细菌吸附效率，比较磁珠的保存方法对其吸附率的影响。用磁珠吸附定量细菌后计数残留菌数，计算其吸附率。结果：磁珠用量与吸附率近似正相关，吸附容量与原始菌最存在对数线性相关。温度影响吸附效率。孵育时间40min后吸附率无明显差异，达到平衡。此外，干式和湿式保存的磁珠，对试验细菌的吸附率无明显差异。结论：自制裸磁珠以50mg（干式）37℃孵育40min对高菌量试验菌（〉10^6cfu／ml）有较高的吸附效率（〉80％），可望用于样品中细菌的分离富集。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中93种兽药和违禁化合物

目的 建立猪肉中93种兽药和违禁化合物残留的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。方法 样品用0.005 mol/L EDTA-乙腈-甲醇（3∶1, v/v,含1%乙酸）混合溶液提取后,冷冻除酯,再经壳聚糖净化,经稀释后,用超高效液相色谱-串联质谱法测定。结果 方法线性范围为0.05～200.00 μg/L,定量限为0.266～50.100 μg/kg,回收率为64.6% ～118.6%,日内和日间RSD分别为0.50%～15.90%和0.18%～19.20%。结论 本法简便快速、灵敏、准确,可用于猪肉中93种兽药和违禁成分的测定。     

4种检测产ESBLs菌株方法的比较

目的:比较4种检测产ESBLs菌株方法,为合理采用检测方法提供参考。方法:用纸片表型确证试验、双纸片协同试验、琼脂稀释法表型确证试验和改良三维试验法检测产ESBLs菌株,比较4种方法的检出率。结果:通过4种ESBLs检测法的结果比较,ESBLs菌株检出率无明显差异,并有较好的一致性。结论:琼脂稀释法表型确证试验、三维试验结果准确率较高,适合以科研为目的的检测;纸片表型确证试验和双纸片协同试验是临床检测ESBLs菌株最迅速、简便、经济的方法。     

Wnt/β-catenin信号通路在低氧促进骨肉瘤细胞体外增殖和侵袭中的作用

目的探讨缺氧条件下,Wnt/β-catenin信号通路在骨肉瘤细胞增殖和侵袭中的作用和机制。方法分别在常氧(21%O_2)和缺氧(1%O_2)环境下培养骨肉瘤SaOS-2细胞系24 h,采用CCK-8法检测细胞在缺氧环境下的增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Real time-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt/β-catenin mRNA和蛋白的表达水平,进一步使用β-catenin特异性siRNA阻断其表达并检测。结果缺氧可明显促进骨肉瘤SaOS-2细胞的增殖以及体外侵袭能力的增强,同时上调Wnt/β-catenin mRNA和蛋白表达水平。靶向沉默Wnt/β-catenin之后,缺氧失去了对骨肉瘤SaOS-2细胞增殖和侵袭的诱导作用。结论缺氧条件下,骨肉瘤SaOS-2细胞系中的Wnt/β-catenin信号通路显著激活,从而促进细胞的异常增殖与侵袭能力增强。     

沙门菌检测方法的循证确定

目的将循证医学的研究方法应用于卫生检验，寻找沙门菌快速检测的最佳方案。方法通过检索多个数据库，全面查找沙门菌检测方法的文献，并对找到的文献进行评估和筛选，找到符合要求的文献确定检测方法。结果从5256篇检索到的文献中，共找到相关Ⅱ级文献4篇，Ⅲ级综述文献1篇用于确定沙门菌快速检测的最佳方案。结论在沙门菌的快速检测中，宜采用以139-141为引物的PCR检测法。