增强子Ⅰ对乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫应答的影响

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）自身增强子I（enhancerI，ENHI）对HBV DNA疫苗免疫应答的影响。方法 采用PCR法以HBVadr亚型全基因DNA序列为模板分别扩增表面抗原（HBsAg）和HBsA-ENHI基因片段，重组到载体VR1012中，构建两种HBV DNA疫苗，转染CADS-7细胞及HepG2细胞并免疫BALB／c小鼠。采用蛋白印迹、ELISA、ELISPOT等方法检测其在COS-7和HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答效果。结果 转染的HepG2和COS-7细胞均表达HBsAg;连接ENHI的HBV DNA疫苗转染HepG2细胞后HBsAg表达量明显升高，两种疫苗转染COS-7细胞表达HBsAg无明显差异；免疫小鼠后第2周产生HBsAb及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL），两种疫苗免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL无明显差异。结论ENHI可使HBV DNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg明显增加，对转染COS-7细胞表达HBsAg及接种BALB／C小鼠引起的免疫应答无明显影响。     

增强子Ⅰ对乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫应答的影响

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)自身增强子Ⅰ(enhancerⅠ,ENHⅠ)对HBVDNA疫苗免疫应答的影响。方法采用PCR法以HBVadr亚型全基因DNA序列为模板分别扩增表面抗原(HBsAg)和HBsAg-ENHⅠ基因片段,重组到载体VR1012中,构建两种HBVDNA疫苗,转染COS-7细胞及HepG2细胞并免疫BALB/c小鼠。采用蛋白印迹、ELISA、ELISPOT等方法检测其在COS-7和HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答效果。结果转染的HepG2和COS-7细胞均表达HBsAg;连接ENHⅠ的HBVDNA疫苗转染HepG2细胞后HBsAg表达量明显升高,两种疫苗转染COS-7细胞表达HBsAg无明显差异;免疫小鼠后第2周产生HBsAb及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),两种疫苗免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL无明显差异。结论ENHⅠ可使HBVDNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg明显增加,对转染COS-7细胞表达HBsAg及接种BALB/c小鼠引起的免疫应答无明显影响。     

HBeAg阴性慢性乙型肝炎抗病毒治疗研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个严重的公共卫生问题。全球60亿人口中,约20亿人披证明有HBV感染,3-4亿人为HBV慢性感染,其中25％-40％最终将死于HBV感染引起的肝硬化和肝癌。近年来由于HBV疫苗免疫、各种抗病毒药物的应用等,导致HBV变异株出现、HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎(CHB)增多。辛绍杰对解放军302医院近期745例CHB进行了分析,结果表明,HBeAg阴性患者322例,占43.2％。HBeAg阴性CHB的增多对CHB的治疗提出了新的挑战。     

实验性肝纤维化逆转过程中基质金属蛋白酶表达的动态研究

探讨基质金属蛋白酶在实验性肝纤维化逆转过程中的表达及意义。建立大鼠实验性四氯化碳中毒性肝纤维化模型,采用核酸原位杂交和免疫组化法检测实验性肝纤维化自然逆转过程中MMP-13、MMP-2、MT—MMP2的来源细胞、时序和量的变化。MMP-13、MMP-2、MT—MMP2在间质细胞和部分肝细胞表达,MMP-13先维持在一定水平,然后逐渐减弱;MMP-2、MT—MMP2先增强后减弱。肝脏间质细胞是基质金属蛋白酶的主要来源细胞,MMP-13、MMP-2、MT—MMP2表达与肝纤维化程度相关,在肝纤维化逆转过程中起重要作用。     

暴发型单纯疱疹病毒性肝炎

本文对单纯疱疹病毒所引起的暴发型肝炎的流行病学、临床表现、实验室检查、诊断和治疗等情况作了综述。     

常用核苷类似物抗乙型肝炎病毒效果比较

乙型肝炎病毒（HBV）感染所引起的肝脏疾病严重危害人类健康和生活质量,甚至导致死亡。治疗慢性乙型肝炎的目标在于长期抑制或消除HBV,以期控制病情发展。近年来,核苷类抗病毒药物用于慢性乙型肝炎的治疗效果显著,但仍存在耐药突变,以及停药导致病情加重或反复的问题。现就目前3种常用核苷类似物在作用机制、治疗效果和耐药变异等进行初步比较。     

混合型生物人工肝治疗设备的研制

目的:结合临床应用需求,研制一种新式混合型生物人工肝治疗应用系统。方法:以2个可编程控制器(PLC)作为控制系统核心,辅以多种安全监测报警装置,具有密闭、洁净和恒温的生物反应治疗环境,为离线混合型生物人工肝治疗提供一体化集成解决方案。结果:该设备能实现对血液流量、流速、质量等参数的精确控制,并提供温度、气泡、漏血等参数的报警监测功能。控制系统操作简便,人机界面友好,并为封闭式生物反应离线治疗过程提供实时影像监控。结论:新型治疗设备实现了混合式生物反应人工肝的离线治疗,有效缩短了生物人工肝治疗时间,同时改善了生物治疗环境。     

银屑病患者服用阿维A胶囊导致严重肝脏损害并文献复习

探讨阿维A胶囊可能存在的肝脏损害作用。方法对1例服用阿维A胶囊后出现严重肝脏损害的57岁女性银屑病患者进行临床观察随访,并进行相关国内外文献复习。结果该患者在服用阿维A胶囊12天后出现肝功能异常,16天后出现皮肤黄、眼黄等症状,入院化验为总胆红素364.0μmol/L、直接胆红素292.5μmol/L、丙氨酸氨基转移酶173 U/L、天冬氨酸氨基转移酶573 U/L、碱性磷酸酶203 U/L、γ-谷氨酰基转移酶142 U/L、总胆汁酸170μmol/L,诊断为阿维A胶囊导致的药物性肝损害。经停用阿维A胶囊及对症治疗,病情得到有效控制。结论阿维A胶囊有导致严重肝脏损害的可能,在应用过程中需要监测肝功能。     

转染重组质粒pBudCE4.1-CYP3A4-GSTA1的肝细胞系的建立及功能评价

目的:获得一株适合用于生物人工肝支持系统的细胞材料.方法:用已构建好的重组质粒pBudCE4.1-CYP3A4-GSTA1转染肝脏肿瘤细胞系C3A,用Zeocin筛选,所得细胞系命名为C3A-未优势化;通过qRT-PCR方法检测目的基因表达情况;对转染重组质粒的肝脏肿瘤细胞系C3A的合成、代谢、解毒等功能及性状进行综合评价.结果:成功构建了转染重组质粒pBudCE4.1-CYP3A4-GSTA1的细胞系;构建好的C3A-未优势化细胞系通过qRT-PCR方法检测其目的基因CYP3A4和GSTA1的表达量较正常C3A细胞系高;通过色谱法证明CYP3A4活性较正常C3A细胞系高;用免疫组织化学实验证实目的基因GSTA1的表达较正常C3A细胞系多;另外,对利多卡因的代谢能力亦高于正常C3A细胞.结论:构建的C3A-未优势化细胞系功能有所改善,有望成为生物人工肝系统的细胞材料.     

端粒和端粒酶与肝细胞的永生化

目的:端粒是位于真核细胞染色体末端的蛋白-DNA复合体,保护染色体完整性和稳定性。端粒酶是一种特殊的细胞核蛋白反转录酶,能以自身的RNA为模板,反转录合成端粒DNA序列,添加到染色体末端。端粒酶介导的端粒延长作为细胞中端粒缩短的主要补偿机制,对正常细胞以及肿瘤细胞延长分裂代数起着重要作用。分化良好并具有肝脏正常合成代谢功能的永生化肝细胞在生物医学研究,尤其是肝细胞移植、生物人工肝支持治疗以及药理学和毒理学研究方面具有广泛的应用前景。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1990-01/2005-12有关端粒、端粒酶和肝细胞永生化的文章,检索词“telomere,telomerase,hepatocyte,immortalization”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1994-01/2005-12期间的相关文章,检索词“端粒、端粒酶、永生化、肝细胞”,限定文章语言种类为中文。资料选择:纳入标准:①有关端粒和端粒酶结构和功能的研究文献。②有关端粒、端粒酶与肝细胞永生化相关性的文献。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集到32篇有关端粒、端粒酶与肝细胞永生化相关性的文献,查找全文,从中选取14篇作为主要参考文献。资料综合:将所选文献资料按照以下顺序归纳总结:①端粒的结构和功能:端粒是指位于真核细胞染色体末端的一种特殊结构,由富含G的DNA重复序列与端粒结合蛋白所构成的一种蛋白-DNA复合体,它既可保护染色体不受核酸酶的破坏,又避免了因DNA粘性末端的裸露而发生的染色体融合。②端粒酶的结构和功能:端粒酶是一种RNA依赖的DNA聚合酶,能以自身的RNA为模板,反转录合成端粒DNA序列,添加到染色体末端,以补偿细胞分裂时端粒DNA缩短,使细胞克服危机期,成为永生化细胞。③端粒、端粒酶在肝细胞永生化:将端粒酶基因转染正常的人体细胞能使一部分细胞的寿命延长,这一技术目前已成功用于延缓组织工程细胞的衰老。结论:端粒酶的活化和端粒长度的维持与肝细胞永生化密切相关,端粒酶介导的永生化肝细胞为生物人工肝脏、肝细胞移植等临床治疗提供了细胞学基础。