幽门螺杆菌ureA、ureB基因克隆、序列分析及在E.coli中表达

目的　构建含幽门螺杆菌 （Hp） ure A、ure B基因重组质粒 ,测定、分析其核酸序列及推定的氨基酸序列 ,在 E.coli中高效表达两基因 ,为检测试剂和疫苗研究提供基础依据和抗原。方法　PCR法扩增 Hp菌株 HPSH4的 ure A、ure B基因 ,分别与 p GEX- 2 T载体连接并转化大肠杆菌JM10 5 ,测定克隆基因的核酸序列并与 Gen Bank公布的国外 5株 Hp菌株 （2 6 6 95 ,HPK 5 ,J99,CPM6 30 ,M6 0 398）的 ure A、ure B基因作序列比较 ,以 IPTG诱导 ,ure A、ure B基因在 E.coli中高效表达。结果　 ure A核酸同源性 96 .3%～ 98.1% ,氨基酸同源性 98.3%～ 10 0 % ;ure B核酸同源性95 .8%～ 98.0 % ,氨基酸同源性 96 .4 %～ 99.6 %。以 IPTG诱导 ,在 E.coli中表达 rure A融合蛋白5 5 6 0 0 D,rure B融合蛋白 85 5 0 0 D。结论　不同地区 Hp菌株的 ure A、ure B存在程度不同的变...     

上海部分健康体检人员中感染TTV的基因分型

目的 调查上海地区健康人群TTV感染情况及其基因分型。方法 用PCR法检测血清标本中的TTVDNA，对TTVDNA阳性标本作核酸序列测定。结果 100份健康体检人员血清标本，用PCR法检出TTVDNA阳性标本21份。其中14份作了部分序列测定，10份部分序列与TTVG1a基因亚型组的TA278株等的同源性为96．2％－99．5％。另4份与G1a组同源性为662．％－67．6％，与TTVG4基因型相同源性为81．9％－84．8％，与国内报道的各株TTV中同源性最大的61．SEQ为81．9％－84．3％。结论 上海地区部分健康人群中除分布有TTGG1a基因亚型感染外，还分布有国内未见报道的TTV基因型感染，其可归为TTVG4的一基因亚型。     

大肠杆菌表达的甲型肝炎病毒核壳蛋白的抗原性和免疫原性

作者用基因工程方法在大肠杆菌中表达出甲型肝炎病毒(HAV)核壳蛋白VP1基因,研究其表达的Trp E/HAV VP1融合蛋白的抗原性和免疫原性。用限制性内切酶从质粒pHAV_L1307和pHAV_(LB)228中分离得重叠的亚基因组HAVcDNA片段,重组成质粒pHAV113。该质粒含病毒基因组完整的核壳编码区。再从pHAV113中分离得核苷酸位置从2069到3492位1.4千个碱基对(Kb)片段。在片段两端接连EcoRI衔接物再将修饰的片段插入表达质粒pA     

幽门螺杆菌ureA、ureB基因克隆、序列分析及在E.coli中的表达

目的：构建含幽门螺杆菌（Hp）ureA、ureB基因重组质粒，测定、分析其核酸序列及推定的氨基酸序列，在E.coli中高效表达两基因，为检测试剂和疫苗研究提供基础依据和抗原。方法：PCR法扩增Hp菌株HPSH4的ureA、ureB基因，分别与pGEX-2T载体连接并转化大肠杆菌JM105，测定克隆基因的核酸序列并与GenBank公布的国外5株Hp菌株（26695，HPK5，J99，CPM630，M60398）的ureA、ureB基因作序列比较，以IPTG诱导，ureA、ureB基因在E.coli中高效表达。结果：ureA核酸同源性96.3％-98.1％，氨基酸同源性98.3％-100％；ureB核酸同源性95.8％-98.0％，氨基酸同源性96.4％-99.6％。以IPTG诱导，在E.coli中表达rureA融合蛋白55600D，rureB融合蛋白85500D。结论：不同地区Hp菌株的ureA、ureB存在程度不同的变异，克隆并表达HPSH4的ureA、ureB与GenBank已公布的多数Hp菌株有极高同源性，在E.coli以融合蛋白高效表达rureA和rureB。     

几种用于发现未知病毒核酸序列的技术及其应用

病毒是引发人类传染性疾病的主要病原体之一,它们极大地威胁着人类健康。目前还存在人类尚未认知或新出现的病毒,随时可能严重危害人类健康安全〔1-3〕。及早地发现,鉴别未知的或新出现的病毒,是有效的预防和控制的先决条件之一。因此,建立、储备、改良、发展、乃至创新应用于发现、鉴别未知或新出现病毒的技术方法是十分必要的。近20多年来,常采用传统的微生物学技术方法和现代分子生物学技术方法相结合的途径,发现和鉴别未知病毒。通过细胞培养的方法分离病毒、电镜观察、用已知病毒的抗血清建立的免疫学方法作排他性检测、用已知病毒核酸…     

分子生物学技术检测水中病毒

对饮用水、环境水源乃至各级污水中污染病毒的检测,是预防控制疾病、评估水源卫生质量、环境卫生状况的一项有价值的工作。病毒的细胞培养是检测水中病毒的方法之一,尤其是对水中病毒的感染性评价,更是其他方法难以取代。但病毒的细胞培养检测周期长,且有不少病毒目前还难以分离培养,故难以完全满足检测水中病毒的要求。分子生物学技术己逐渐应用于检测水中病毒,不断有报道对水中污染的甲型肝炎病毒（HAV）、戊型肝炎病毒（HEV）、脊髓灰质炎病毒（Poliovirus）、轮状病毒（Rotavirus）、诺澳克病毒（Norwalk　virus）、柯萨奇病毒（Coxsackievirus）、腺病毒（Adenovirus）、呼肠弧病毒（Reovirus）等等病毒的检测,并以敏感、快速、特异等优点扩大在这一领域中的应用。现将分子生物学技术检测水中病毒作一简介,以供参考。     

上海地区1株SARS-Cov N基因序列分析及表达

目的通过基因克隆、序列分析以及在大肠埃希菌中的表达和分离纯化，研究上海地区1株SARS-Cov N蛋白编码基因变异情况，为SARS-Cov N蛋白应用于检测SARS感染作基础。方法用RT-PCR法从患者血清样品中扩增获取SARS-Coy N蛋白编码基因，并重组于质粒pGEX-2T。双脱氧法双向测定N基因序列，与GenBank公布的89株SARS-Cov N基因序列比对分析；重组N蛋白编码基因在E.coli中表达，亲和层析法分离纯化表达产物。结果RT-PCR扩增获取SARS-Cov N基因1269bp，测定的核酸序列与GenBank中公布SARS-Cov N基因序列比对，变异位点数1～4bp，其中导致1～3个编码氨基酸突变。重组N基因的表达质粒pGEX-2T／SARS-Cov N转化大肠埃希菌JM109，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，N基因在大肠埃希菌中高效表达，经亲和层析，得纯度〉90％的表达产物，表达的融合蛋白分子量为74000Da。结论上海地区1株SARS-Cov N蛋白编码基因与已公布的89株毒株核酸同源性为99．92％～99．68％，编码氨基酸同源性为99．8％～99．3％；该基因在E．coli中表达，经分离纯化得到高纯度表达产物，为进一步应用于SARS-Coy感染检测打下基础。     

抗氧化能力指数测定法的研究与应用进展

随着深入了解氧化压力对各种疾病发生、发展的影响,抗氧化物质及其抗氧化功能越来越受到关注.现有多种测定评价抗氧化能力的方法,抗氧化能力指数(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)测定是其中常用的一种体外抗氧化能力评价方法.本文综述报道ORAC法的原理、方法学研究及应用进展.     

SELDI-TOF-MS技术在生物医学应用中局限性

表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(surface-enhanced laserdesorption/ionization-time Of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)是近年发展起来的蛋白质组学研究前沿技术[1].2001年以来,国内外许多文献报道介绍了用SELDI-TOF-MS技术分析血浆/血清等人体液中的差异表达蛋白质图谱,发现多种肿瘤等疾病如卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、肺癌等相关生物标志物[2].随着研究深入,SELDI-TOF-MS技术在生物医学中研究中重现性较差,引起了人们注意[3-5].由于逐渐发现和了解SELDI-TOF-MS技术应用于生物医学研究中的问题和局限性,导致对SELDI-TOF-MS技术的血浆/血清蛋白质图谱产生争议[5-7].本研究对该技术在生物医学研究中若干方法学上问题及其局限性作一综述.