鼠类携带淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的建立检测鼠类携带淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV）的实时荧光定量RT-PCR方法。方法根据LCMV核蛋白编码基因序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应体系和条件,建立LCMV实时荧光定量RT-PCR检测方法,然后进行灵敏度、特异性和重复性试验,并对79份宁波口岸捕获的鼠样品进行检测。结果建立实时荧光定量RT-PCR方法对鼠肺总RNA检测的灵敏度为20pg,是常规PCR方法的100倍;试验的重复性良好,CV值为0.85%;试验的特异性为100%。用该方法检测79份鼠样品有3份LCMV阳性,与常规RT-PCR结果一致。结论成功建立了鼠LCMV实时荧光定量RT-PCR检测方法,对于监测和防控鼠传LCM有重要意义。     

大榭港区医学媒介生物监测与控制技术报告

大榭港区从2003年以来,按照国家质量监督检验检疫总局的统一布置与要求,全面开展了医学媒介生物本底调查与监测工作,2007年在原有调查与监测的基础上,根据创建国际卫生港口的工作计划     

一例输入性鼠类携带汉坦病毒的分子遗传学分析

目的 对1例在境外输入褐家鼠中分离的汉坦病毒DX1101株进行分子遗传学特征分析.方法 剖取鼠肺组织,提取病毒RNA,用简并RT-PCR和巢式RT-PCR分别扩增汉坦病毒L基因和M基因片段,对扩增产物测序并构建系统发生树进行分型与系统发生分析.结果 2个基因的扩增片段序列同源性系统发生树分析均显示该病毒株为汉城型汉坦病毒;M基因的系统进化树显示与英国分离株IR461基因距离最为接近.结论 证实入境集装箱中截获的鼠类携带汉坦病毒,加强入境集装箱的卫生检疫有重要意义.     

首例入境集装箱中发现疑似鼠疫感染死鼠的检测

目的通过对入境集装箱中发现的死鼠进行实验室检测,加强口岸对入境啮齿动物携带鼠疫杆菌的监测力度。方法分别用胶体金和PCR方法对入境集装箱中发现的死鼠进行鼠疫杆菌检测。结果该样本鼠疫杆菌F1抗原阳性,pla基因和fra基因PCR扩增均为阳性,判定该样本为疑似鼠疫杆菌感染。结论在口岸一线加强对入境鼠类携带鼠疫杆菌检测具有重要意义。同时,应不断加强口岸公共卫生核心能力建设,加强公共卫生实验室建设及重大疫情检测技术储备。     

大榭港区2006-2011年鼠密度及种群变化趋势分析

目的分析大榭港区2006-2011年鼠密度和种群变化状况。方法在大榭港区设立7个监测点,并利用夹夜法调查鼠密度和鼠种。结果共捕获鼠类1 026只,隶属2目2科5属7种,鼠密度从2006年的3.16%下降至2010年的0.1%以下,下降趋势明显。鼠类种群结构也发生了明显变化,2006-2008年鼠类优势种群为黑线姬鼠;2009年为小家鼠;2010-2011年为褐家鼠。结论大榭创建国际卫生港口期间所采取的防鼠措施非常有效,但仍有必要进一步开展鼠类监测来巩固成果。     

基于Cytb基因序列对入境集装箱中截获的疑似鼠样本的种类鉴定简

目的根据线粒体Cytb基因部分序列,对从入境集装箱中截获的疑似鼠样本进行鉴定种类。方法提取样本中的DNA,采用PCR方法进行线粒体Cytb基因扩增,对目的片段测序,通过blast比对进行同源性比对。从Genbank获取宁波口岸常见8个鼠种24个样本的Cytb基因序列作为参照,利用生物信息学软件Mega5.0进行系统进化分析。结果样本DXR1110与小家鼠同源性最高,DXR1203与褐家鼠同源性最高,系统进化树显示不同鼠种间形成独立分支。结论Cytb基因分析是进行鼠种鉴定的有效手段。     

鼠类感染沙粒病毒CODEHOPRT-PCR检测方法的建立

目的建立鼠类感染沙粒病毒的CODEHOPRT—PCR检测方法。方法依据沙粒病毒N蛋白氨基酸序列设计1对CODEHOP引物,建立沙粒病毒一步RT—PCR检测方法,分析该引物在对不同种沙粒病毒基因序列上的结合位点及所能获得的产物序列大小;通过检测分离自鼠类的沙粒病毒属淋巴细胞脑膜炎病毒（LCMV）株MS111013,评价方法的特异性和灵敏度;对MS111013扩增产物进行Blast同源性比对。结果从GenBank获得的22种沙粒病毒均存在CODEHOP引物结合位点,扩增产物大小在406～429bp之间。建立的CODEHOPRT—PCR方法可特异性扩增LCMV病毒核酸,目的片段大小与预期结果相符,核酸的最小检出量为11．8Pg。经Blast比对,MS111013与LCMV病毒株Douglas strain（4707）同源性较高,为86％。结论建立的沙粒病毒CODEHOPRT—PCR检测方法敏感、特异,可用于鼠类沙粒病毒感染检测。     

5株鼠样品中分离汉坦病毒毒株S基因序列比较与分析

目的 了解近年来从宁波口岸捕获的鼠类样品中分离的5个汉坦病毒株遗传学差异。方法 利用RT-PCR方法,对5个汉坦病毒株S基因全长进行扩增、克隆和测序,并将这5个毒株的S基因序列分别与GenBank登录的20个汉坦病毒感毒株进行比较分析。结果 DX1507株和DX1408株S基因核苷酸序列长度为1766 bp与汉城型(SEOV)病毒株 Rn-DH27同源性最为接近,LJ1112株S基因核苷酸序列长度为1772 bp与汉城型(SEOV)病毒株Cherwell同源性最为接近,DX0903株和BL1402株S基因核苷酸序列长度为1725 bp与大别山型(DABV)病毒株 Yongjia-Nc-95和Yongjia-Nc-38同源性最为接近。结论 宁波口岸分离到的汉坦病毒株分别为汉城型和大别山型,对宁波口岸开展汉坦病毒传播防控有重要意义。     

大榭港区食品卫生监督技术报告

宁波大榭港区食品生产经营单位自开港以来,不断完善卫生设施,合理改造食品生产加工流程,建立健全卫生管理制度,提升自身卫生管理水平,卫生主管部门进一步加强卫生监管,实行卫生监管新模式,确保各单位均在许可范围内从事食品生产、经营活动,操作规范,管理到位,食品卫生安全状况得到了有力保障.     

大榭港区啮齿动物携带汉坦病毒基因分型和序列分析

〔目的〕研究大榭港区啮齿动物中汉坦病毒的感染流行情况以及病毒基因分型。〔方法〕采用夹夜法捕捉鼠类,直接免疫法(DIF)检测鼠肺中的汉坦病毒抗原;巢式RT-PCR法扩增阳性标本中核苷酸片段并测序,构建系统发生树进行分型与系统发生分析。〔结果〕共捕获鼠253只,经鉴定隶属2目2科5属7种。经检测,其中2份样本为汉坦病毒阳性,阳性检出率为0.79%,宿主均为社鼠,核苷酸序列同源性及系统发生树分析表明分型均为汉滩型(HTN型)。〔结论〕大榭港区啮齿动物汉坦病毒的阳性检出率比较低,以HTN型为主,宿主为社鼠。