慢性牙周炎伴咬合创伤患者龈沟液炎性因子表达及与骨代谢指标的相关性研究

目的　观察慢性牙周炎伴咬合创伤患者龈沟液炎性因子表达情况,并分析与骨代谢指标的相关性。方法　选取2020年1~4月收治的52例慢性牙周炎伴咬合创伤患者为伴咬伤组,另选取同期慢性牙周炎52例为不伴咬伤组。伴咬伤组和不伴咬伤组均于治疗前采用酶联免疫吸附法进行龈沟液中炎性因子(TNF-α,IL-1β,CRP和IL-6)和骨代谢指标(BALP,CTX-1和tPINP)检测,采用放射免疫法进行骨代谢指标BGP表达值检测。比较伴咬伤组和不伴咬伤组龈沟液炎性因子、骨代谢指标表达差异,并采用Pearson相关系数分析描述龈沟液炎性因子表达及与骨代谢指标的相关性。结果　伴咬伤组的龈沟液炎性因子(TNF-α,CRP,IL-1β和IL-6)表达值、骨代谢指标(BGP,CTX1和tPINP)表达值均高于不伴咬伤组,差异均有统计学意义(t = 5.499 ~ 28.161,均P<0.05)。伴咬伤组的骨代谢指标(BGP)表达值高于不伴咬伤组,差异有统计学意义(t = 4.054,P<0.05)。龈沟液炎性因子(TNF-α,CRP,IL-1β和IL-6)表达值与龈沟液BALP表达值呈负相关性(r = - 0.813 ~ -0.694,均P<0.05),与龈沟液BGP表达值呈正相关(r =0.708 ~ 0.767,均P<0.05),与龈沟液CTX1表达值呈正相关(r =0.709 ~ 0.791,均P<0.05),与龈沟液tPINP表达值呈正相关(r = 0.695 ~ 0.842,均P<0.05)。结论　伴咬合创伤可加重慢性牙周炎患者机体炎性反应,而伴咬合创伤导致的炎性反应也可对慢性牙周炎患者骨代谢水平产生影响,伴咬合创伤对慢性牙周炎病情的促进作用需给予临床重视。     

马兜铃酸诱导大鼠肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积及垂盆草提取物的作用

 目的：研究垂盆草（SSB）提取物对马兜铃酸（AA）诱导的肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积的作用,并初步探讨可能的分子机制。方法：将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）分为：(1) 溶剂对照组：未加入SSB和AA;(2) AA损伤组：只加AA,浓度为1~100 mg/L;(3) SSB提取物干预组：在加入10 mg/L AA基础上,同时加入SSB提取物（10~2 000 mg/L）。细胞培养24 h后,酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β1(TGF-β1)含量;细胞免疫荧光染色检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、上皮细胞标志物E-cadherin和基质成分III型胶原的表达;实时荧光定量PCR检测α-SMA、E-cadherin、骨形成蛋白7（BMP-7）和I型胶原mRNA的表达。结果：AA可诱导NRK-52E细胞呈现纤维化样改变;1 mg/L和10 mg/L AA不仅可增加基质成分I型和III型胶原的表达量,同时也可促进α-SMA表达,抑制E-cadherin的表达。用SSB提取物干预后,AA所致的纤维化改变明显减轻;SSB提取物下调了α-SMA、I型和III型胶原的表达,并且促进E-cadherin和BMP-7的表达。此外,SSB提取物也抑制TGF-β1的分泌,并呈浓度依赖性。结论：应用SSB提取物干预可明显降低AA所致的肾纤维化效应,可能的机制为SSB提取物降低TGF-β1的表达,抑制小管上皮细胞的表型转化,进而抑制胶原的累积。     

慢性牙周炎患者动脉粥样硬化与牙周病病原关系的研究

[目的]探究慢性牙周炎患者动脉粥样硬化与牙周病病原的关系.[方法]选择2018年4月至2019年4月本院收治的慢性牙周炎患者90例为研究对象,根据其是否合并动脉粥样硬化分为观察组和对照组,各45例.比较两组临床牙周参数[菌斑指数(PLI)、牙龈指数(GI)、探诊深度(PD)、临床附着水平(CAL)、探诊出血(BOP)比...     

改良通用茎环引物筛查和定量检测微小RNA方法的建立

目的 建立可同时筛选和定量检测成熟型miR的荧光定量PCR方法.方法 改良通用茎环引物,在其茎环尾端引入8个随机碱基片段,用于成熟型miR逆转录,以建立SYBR Green PCR筛选和定量检测miR的方法(简称“改良通用茎环引物miR法”).同时,采用10倍梯度稀释的miR-155标准品cDNA(1～109拷贝/μl)评价其灵敏度;采用熔解曲线评价其检测miR-155的特异性;通过对2×105、2×106、2×107拷贝/μl的miR-155标准品cDNA分别进行批内20次重复实验,以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度;并与传统茎环法进行比较,计算实验所用时间和引物成本.然后,采用改良通用茎环引物miR法对植物血凝素(PHA)刺激培养0、16、24、48、72 h的人外周血T淋巴细胞内miR进行筛选(87个靶miR,经PubMed检索可能与免疫功能相关),并用以进行miR定量检测分析.结果 建立的改良通用茎环引物法的最低检测限为103拷贝/μl的miR-155 cDNA标准品;熔解曲线于80℃呈单峰,证实为针对miR-155的特异性扩增;其批内重复实验的精密度为CV＜2.5％.优化后的通用引物方法与传统方法相比较,节约引物约75％(1 917 bp比7 851 bp),节省逆转录时间约120min(85 min比205 min).用改良通用茎环引物法筛选T淋巴细胞中87个miR,85个miR在PHA刺激前、后的Ct无变化,而miR-150和miR-155表达量在T淋巴细胞激活前后分别发生超过10倍下降(72 h)和8倍的升高(48 h),且差异有统计学意义(Z=-2.023,P=0.043;Z=-2.032,P=0.042).结论 建立的改良通用茎环引物miR法具有快速、重复性好、灵敏、节约引物用量和实验时间的优点,可用于T淋巴细胞的miR筛查和定量检测.     

正畸拔牙矫治对AngleⅡ1类错[牙合]垂直骨面型患者牙槽骨厚度的影响

【目的】探讨正畸拔牙矫治对AngleⅡ1类错[牙合]垂直骨面型患者牙槽骨厚度的影响。【方法】选择2016年8月至2020年9月在宝鸡市中医院、宝鸡市口腔医院和渭南市人民医院就诊的80例AngleⅡ1类错[牙合]垂直骨面型患者,根据下颌平面角(MP-SN)角度及面高指数分为高角组、低角组、均角组,所有患者均给予正畸拔牙矫治处理,分析治疗前后患者牙槽骨厚度变化。【结果】矫治后,高角组、低角组患者右上[牙合]颌面距釉牙骨质界(Cemento-enamel junction,CEJ)6 mm、9 mm、根尖点处牙槽骨总厚度降低,且高角组低于低角组,差异均有统计学意义(P<0.05);高角组患者右侧下颌[牙合]颌面距CEJ 3 mm、6 mm、9 mm牙槽骨总厚度和唇侧牙槽骨厚度降低最多,左侧[牙合]颌面距CEJ 6 mm、9 mm,根尖点牙槽骨总厚度及距CEJ 9 mm唇侧和距CEJ 6 mm腭侧减少量最多(P<0.05)。高角组距CEJ 3 mm处腭侧牙槽骨厚度明显减少,低角组左侧上颌第一磨牙远中根距CEJ 3 mm、6 mm、9 mm处牙槽骨厚度明显减少(P<0.05)。矫治后,低角组近远中根颊舌侧牙槽骨厚度明显减少,高角组颊侧牙槽骨厚度明显减少(P<0.05);高角组近中根唇侧牙槽骨减少量高于低角组(P<0.05)。【结论】正畸拔牙矫治能减少AngleⅡ1类错[牙合]垂直骨面型高角患者牙槽骨厚度,应慎重选择治疗方案。     

小G蛋白Rac1在马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用及意义

目的：探讨马兜铃酸（从）致肾小管上皮细胞损伤的机制及小G蛋白Racl在此过程中发挥的作用。方法：以溶剂作为对照组,从以浓度10μg／mL作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24h后,WST-1法检测细胞增殖的抑制率;Hoechst33258染色观察细胞核的形态变化;细胞免疫荧光染色检测Ⅲ型胶原和Racl蛋白的表达;real—time RT—PCR检测TGF—D1mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Racl和TGF—β1含量,并分析两者相关性。结果：从可明显抑制NRK-52E细胞增殖,并诱导细胞凋亡。从以10μg／mL处理NRK-52E细胞24h后,TGF—β1 mRNA的表达明显升高（p〈0．05）,并且细胞外基质成分Ⅲ型胶原的表达明显增加（P〈0．05）。此外,从也可诱导小G蛋白Racl的表达（P〈0．05）。相关分析显示,AA诱导NRK-52E细胞损伤过程中,Racl的表达量与TGF—β1的分泌水平呈现明显正相关（r=0．967,P〈0．01）。结论：从诱导肾小管上皮细胞出现纤维化样改变,同时伴有Racl蛋白的高表达;Racl及其介导的信号通路可能被TGF-β1的高表达所活化,进而参与从所致的胶原累积过程。     

曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol.L-1培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC50。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～48 h,Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～12 h,检测胱天蛋白酶3活性。TSA 0.4μmol.L-1与PANC-1培养24 h,实时定量PCR检测c-myc,p53,Bcl-2,Bax,存活素,基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)和Notch-1基因的表达。TSA 0.4和0.6μmol.L-1与PANC-1培养24 h,细胞免疫化学方法检测Notch-1蛋白的胞内活性形式NICD表达。结果TSA可以明显抑制PANC-1细胞增殖,12,24和48 h的IC50值分别为0.42,0.32和0.19μmol.L-1,具有量效(r=0.640,P=0.01)和时效(r=0.768,P=0.002)关系。Hoechst 33258染色结果表明,TSA 0.4μmol.L-1增加PANC-1细胞核的蓝色荧光并出现凋亡特征。TSA 0.4μmol.L-1作用4,8和12 h后,胱天蛋白酶3的活性分别为正常对照组的1.62±0.12,2.68±0.17和(3.92±0.23)倍。PCR结果显示,TSA 0.4μmol.L-1作用24 h后,p53,c-myc和存活素mRNA表达下降,分别为对照组的(18.3±5.1)%,(24.2±0.9)%和(15.8±1.0)%,Bcl-2和Notch-1 mRNA未见明显变化,而Bax,MMP1和TIMP-1 mRNA升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低到正常对照组的(13.0±2.8)%。Notch-1活性分子NICD明显升高(P<0.05)。结论TSA可通过线粒体途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,而且使Notch-1激活,促进转移相关基因表达。     

miR-21在大鼠肝卵圆细胞活化和增殖过程中作用研究

目的 探讨miR-21调控肝卵圆细胞活化和增殖过程的可能机制.方法 采用2-乙酰氨基芴(2-AAF)/部分肝切除法诱导SD大鼠肝卵圆细胞活化模型,分别于0、6、12、24、72、168 h处死动物,同时以单纯肝切除的相应时间点作为对照,分别提取各标本RNA逆转录后行SYBR Green实时荧光定量PCR,检测各组miR-21的表达,行两样本t检验,并用生物信息学方法分析其调控的miRNA转录分子和靶基因.实时荧光定量PCR检测其靶基因表达,Westem blot法检测其靶基因蛋白表达,进行两样本均值的t检验,以P＜ 0.05为差异有统计学意义. 结果 成功建立大鼠肝卵圆细胞活化模型,检测miR-21的扩增信号,miR-21在实验组表达12h开始升高,24 h达到峰值,随后开始降低,168 h再次升高;而对照组6h开始升高,24h后开始下降后基本恢复原水平.实验组与对照组表达比较,实验组在6 h miR-21的表达低于对照组,t=3.029,P=0.039,差异有统计学意义;而在24 h和168 h的表达高于对照组,t值分别为-3.433、-5.105,P值均＜0.05,差异有统计学意义.根据三个数据库的综合评分,结合相关文献,我们选取Smad7为研究的靶基因.检测两组Smad7mRNA表达,对照组中在6h略有下降,后开始升高,在24 h达到峰值后开始下降恢复原水平;在实验组中,6h升高后至24 h达到峰值,随后开始降低,168 h又略有升高.对照组Smad7蛋白表达从6h开始降低,到24 h达到最低后开始升高;实验组6h升高,随后下降,168 h达到最低.Smad7 mRNA表达量变化趋势与miR-21表达变化趋势基本一致,Smad7蛋白表达和miR-21表达变化趋势呈负相关. 结论 成功建立SYBR Green实时荧光定量PCR检测大鼠miR-21的方法,证实miR-21在肝卵圆细胞活化与增殖中起重要作用,Smad7作为miR-21的靶基因可能参与这一过程.     

白藜芦醇抑制血管平滑肌细胞成骨样转化的实验研究

目的 研究白藜芦醇（resveratrol,Res）对血管钙化的抑制作用,观察不同浓度的Res对高钙高磷诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞（hVSMC）成骨样转化的影响。方法 体外培养hVSMC细胞,通过形态学和α-SMA标记进行鉴定。用高钙高磷（钙2.5 mmol/L、磷3.0 mmol/L）培养基诱导hVSMC成骨样转化,通过茜红素染色法鉴定成骨样转化。以普通培养hVSMC作为对照组,加高钙高磷为阳性对照组,实验组为阳性对照加不同浓度的Res（5、10、20 μmol/L）干预,培养12 d后,检测各组细胞含钙量,实时荧光定量PCR检测hVSMC成骨样转化相关基因骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨形态蛋白（BMP-2）、骨桥蛋白（OPN）的表达水平;Western blotting和免疫荧光标记方法检测BAP、BMP-2、OPN蛋白的表达。结果 与对照组比较,阳性对照组细胞内含钙量明显升高约5倍,α-SMA蛋白表达下降,而成骨样细胞特异性标记BAP、BMP-2、OPN mRNA和蛋白质表达均显著升高（P<0.01）。不同浓度Res干预后后,细胞内含钙量下降,BAP、BMP-2、OPN mRNA水平降低（P<0.05、0.01）;BMP-2及OPN的蛋白表达显著降低（P<0.01）,并与Res浓度呈负相关。结论 hVSMC在高钙高磷条件下发生成骨样转化,而Res抑制此过程的进展并与其浓度呈正相关。     

慢性乙型肝炎患者血清GP73与肝纤维化的相关性

目的:探讨慢乙肝患者血清GP73与肝纤维化的相关性。方法:收集40例健康志愿者,110例慢乙肝患者进行血清GP73检测,同时病患组均进行HBeAg及肝功能等测定,并对结果进行统计。结果:1.肝纤维化各组较正常组均明显增高(P<0.01),随着纤维化的进展,肝纤维化分期组间也存在明显差别(P<0.01)。45例入院确诊为肝硬化的患者经扶正化瘀等治疗后,第7、30天复查GP73均较治疗前明显减低(P<0.05)且治疗后第30天与第7天相比也有明显差别(P<0.01)。2.所有肝硬化患者经child-pugh分级并与其GP73值进行相关分析,发现两者高度正相关(相关系数为r=0.922,P<0.01)。3.所有患者根据HBeAg阴、阳性进行分组,HBeAg(+)组GP73明显高于HBeAg(-)组(P<0.01)。结论:血清GP73的测定有助于肝纤维化病的诊断和肝损害情况的判断。