锌和硒对二氧化硅致成纤维细胞DNA损伤的影响

[目的]观察葡萄糖酸锌、亚硒酸钠单独及联合作用对二氧化硅致成纤维细胞DNA损伤的影响,寻找两者的最佳剂量组合。[方法]生长良好的中国仓鼠肺成纤维细胞,以5×108个/L的密度接种到25ml培养瓶中,经24h培养后加入终浓度为100mg/L的SiO2,同时分别加入终浓度分别为1.0、1.5、2.25mg/L的葡萄糖酸锌(ZnG)和终浓度分别为0.5、1.0、2.0μmol/L的亚硒酸钠(Na2SeO3)及各浓度的ZnG Na2SeO3交互组合。作用2h后收获细胞,调细胞密度为1×109个/L,通过彗星试验分别观察DNA的损伤情况。同时设阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(终浓度为100mg/L的SiO2)、ZnG对照组(2.25mg/L)、Na2SeO3对照组(2.0μmol/L)。联合作用时,采用L(34)正交设计表进行试验。9[结果]与SiO2组比较,1.0、1.5、2.25mg/L的ZnG及0.5、1.0、2.0μmol/L的Na2SeO3均可以显著减轻SiO2致成纤维细胞DNA链的断裂作用(P<0.05);2.25mg/L的ZnG与0.5μmol/L的Na2SeO3联合作用效果最好。[结论]ZnG、Na2SeO3单独和联合作用在体外可有效减轻SiO2粉尘所致成纤维细胞DNA的损伤作用。     

苯并(a)芘通过活化蛋白-1非依赖性通路诱导细胞中p53蛋白过表达及高磷酸化

目的探讨苯并(a)芘[B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白、p53磷酸化水平及亚细胞分布和活化蛋白-1(AP-1)活性的改变,以及p53与AP-1的上下游关系。方法转染p53小干扰RNAp53 siRNA质粒(p53-H)、载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)和转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48h后,加入2μmol/L B(a)P作用24h,用Western blot及免疫荧光法检测细胞中p53蛋白及p53磷酸化的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位,用荧光检测法检测AP-1的相对活性。用AP-1的化学抑制剂curcumin抑制其活性,用p53的化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察了二者的上下游关系。结果2μmol/L B(a)P作用24h后细胞内p53蛋白及p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平增加,并且主要分布在细胞核内;AP-1的活性增加。抑制AP-1活性后,对B(a)P诱导的p53蛋白含量增加没有明显的影响;抑制p53表达后,对B(a)P诱导的AP-1活性的增加没有明显影响。结论B(a)P通过AP-1非依赖的信号通路引起人胚肺成纤维细胞p53蛋白含量的增加。     

ERK和JNK/AP-1通路参与石英诱导的细胞周期改变

目的 探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞(human embryo lung fibroblasts,HELF)中转录因子活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的活性改变,以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK),AP-1通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用.方法 用200 μg/ml石英处理HELF细胞;用免疫荧光法检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regdated protein kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化水平及细胞分布;运用AP-1荧光素酶报告基因技术检测AP-1荧光素酶活力;用MAPK显性失活突变体(dominant negative mutant,DN)(DN-ERK2、DN-JNKl和DN-p38)证明通路的上下游关系;用流式细胞术检测细胞周期变化.结果 用200μg/ml石英分别处理转染AP-1报告基因的细胞(HELF-AP-1)6、12、24h,结果显示,AP-1活性随着时间变化而发生变化,6 h活性增强,12 h活性达峰值,24 h活性略有降低;用200 μg/ml石英分别处理细胞1和2 h,结果显示,ERK和JNK在石英刺激1 h后,磷酸化水平升高,主要集中于胞浆,2 h后磷酸化水平进一步升高,并主要集中于胞核;200 μg/ml石英处理细胞24 h,G1期细胞所占比例从(63.80±9.57)%下降到(32.23±7.22)%,S期细胞所占比例从(35.17±10.33)%升高到(66.00±8.07)%;AP-1化学抑制剂姜黄素(20μmol/L)可明显减弱石英引起的G1期细胞比例减少和S期细胞比例增加;DN-ERK和DN-JNK的过表达均可明显降低石英诱导的AP-1活性增强,DN-p38的过表达对石英诱导的AP-1活性增强无明显影响.结论 200 μg/ml石英可诱导AP-1活性增强,并通过ERK、JNK/AP-1通路诱导细胞周期改变.     

苯并(a)芘通过活化蛋白-1-细胞周期蛋白D1/E2F-1信号通路引起细胞周期的改变

目的 探讨活化蛋白-1(activated protein-1,AP-1)在苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]引起的人胚肺成纤维细胞(HELF)周期改变中的作用以及AP-1与细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)和E2F-1/4的上下游关系.方法 转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48 h后,加入2μmol/L B(a)P作用24 h,用荧光检测法检测AP-1的相对活性.用AP-1的化学抑制剂姜黄素(curcumin)抑制其活性,观察它与cyclin D1/CDK4和E2F-1/4的上下游关系.采用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用Western blot检测细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白水平的改变.结果 2 μmol/LB(a)P作用24 h后,G1期细胞比例由(71±2)%减少为(48±3)%,差异有统计学意义(P＜0.05);AP-1的活性增加;cyclin D1/E2F-1的蛋白含量增加;CDK4/E2F-4的蛋白水平没有明显改变.抑制AP-1活性后,B(a)P诱导的细胞周期的改变被逆转,B(a)P诱导的cyclin D1/E2F-1蛋白含量的增加被抑制,CDK4/E2F-4蛋白含量没有明显改变.结论 B(a)P通过AP-1引起HELF周期的改变.AP-1是cyclin D1/E2F-1的上游信号分子,但对CDK4/E2F-4的表达不具有调节作用.     

c-Jun氨基末端激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对苯并(a)芘诱导人胚肺成纤维细胞c-Jun活化的调控

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路在调控苯并（a）芘[B（a）P]诱导人胚肺成纤维细胞（HELF）c—Jun活化中的作用。方法2．0μmol/LB（a）P处理HELF0、3、6、12、24h后或加入不同浓度B（a）P（0．0、0．5、1．0、2．0μmol/L）处理12h后，通过免疫印迹法检测B（a）P对细胞c-Jun活性的影响；利用p38、c—Jun氨基末端激酶（JNK）以及细胞外调节蛋白激酶（ERK）的显性失活突变体分别阻断p38、JNK和ERK活性后，观察3种MAPKs信号分子与B（a）P诱导c-Jun活化之间的关系。结果在所观察的B（a）P作用时间和浓度范围内，c—Jun蛋白表达量无明显变化；B（a）P可诱导细胞内磷酸化c—Jun（Ser63／Ser73）水平增高，并随着作用时间的延长，细胞内c—Jun的磷酸化水平也逐渐增强，至12h达到峰值（1．61±0．12，1．82±0．18），c-Jun磷酸化Ser63、Ser73与actin灰度比值分别是对照组的20．1倍、15．2倍，作用24h时细胞内c-Jun磷酸化水平呈现下降趋势，而且随着B（a）P浓度的增加，细胞内c-Jun的磷酸化水平也逐渐升高，呈现剂量-反应关系；使用显性失活突变体分别阻断JNK和ERK活性均可明显抑制B（a）P诱导细胞c—Jun磷酸化水平增加，但是阻断p38活性对B（a）P诱导细胞c—Jun磷酸化水平升高无明显影响。结论JNK和ERK信号通路调控B（a）P诱导的HELF细胞c—Jun活化，B（a）P促进c-Jun磷酸化的过程与p38信号通路无关。     

“缠腰龙”的故事

1 砬子沟的西北山洞说是出“蛇仙”了。于是乎,山洞前的青石小庙一下子热闹起来。十里八村的人都前来讨药,人来人往,络绎不绝。 2 山洞周围的蒿草树叶,几天工夫就被采得一干二净,连香灰、泥土也被拿去当药吃。     

p53蛋白在苯并(a)芘诱导的p21、E2F-1表达及细胞周期改变中的作用

目的 探讨p53蛋白在苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变中的作用及其与p21、E2F-1的关系.方法 转染p53 siRNA质粒(p53-H)和载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)无血清培养48 h后,加入2 μmol/L B(a)P作用24 h.用流式细胞仪检测细胞周期的变化.用Western blotting检测细胞中p53、p21蛋白含量的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位.用免疫荧光法观察E2F-1蛋白含量及细胞核、细胞浆分布.利用p53 siRNA质粒和化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察p53与p21、E2F-1的上下游关系以及其在B(a)P引起的细胞周期改变中的作用.结果 2 μmol/L B(a)P作用24 h后,G1期细胞比例由(71±5)%减少为(39±4)%;p53、p21以及E2F-1蛋白含量增加,并且主要分布在细胞核内.用p53 siRNA质粒和PFT抑制p53表达后,B(a)P诱导的p21高表达被抑制,细胞核内的含量明显减少;B(a)P诱导的E2F-1蛋白含量增加以及细胞周期的改变没有明显变化.结论 B(a)P通过p53非依赖的信号通路引起HELF细胞周期的改变;p53对p21的表达具有调节作用,而对E2F-1的表达不具有调节作用.     

腰椎退变滑脱的X线与CT表现分析

目的探讨X线平片和CT对腰椎退变性滑脱的诊断价值。方法收集腰椎退变性滑脱92例,对其X线平片和CT进行回顾性分析。结果腰椎退变性滑脱好发于第4腰椎,滑脱程度多在Ⅰ度以内,多合并不同程度的退行性变。X线平片能直观地显示腰椎退变性滑脱,是诊断本病最简单而有效的方法,而CT能清楚显示椎间盘、硬膜囊、关节突和椎管内外结构的变化。结论X线平片与CT结合对腰椎退变性滑脱的诊断和治疗有着重要作用。     

甘利欣联合阿托莫兰治疗肾移植术后急性肝损害

目的探讨甘利欣联合阿托莫兰治疗肾移植术后肝损害的疗效。方法选择肾移植术后肝损害患者70例,随机分为2组,治疗组39例,其中男27例,女12例;对照组31例,其中男20例,女11例。术前肝功能检查各项指标均正常。治疗组给予甘利欣注射液30ml加入10%葡萄糖250ml静脉滴注,1次/d,连用14d;阿托莫兰1.2g加入10%葡萄糖250ml静脉滴注,1次/d,连用14d为1个疗程。对照组选用维生素C2.0g＋肝泰乐针1.0g加入5%葡萄糖250ml静脉滴注,1次/d,连用14d。结果治疗组39例中显效30例,有效7例,总有效率为94.9%;对照组31例中显效17例,有效率7例,总有效率为77.4%,治疗前后2组患者临床症状及肝功能各项指标均有不同程度改善,治疗组与对照组比较总有效率差异有统计学意义（P〈0.01）,而其肾功能指标血清肌酐无明显变化（P〉0.05）。结论甘利欣联合阿托莫兰治疗肾移植术后肝损害,疗效好、安全可靠。并不需停用抗排斥药物,对移植肾功能无影响,值得临床推广应用。     

c-Jun在肿瘤发生中作用的研究进展

c-Jun是核转录激活蛋白1(activation protein,AP-1)家族的组成成员.AP-1蛋白家族主要包括Jun(c-Jun、Jun-B和Jun-D)和Fos(c-Fos、FosB、Fra-1和Fra-2)2个蛋白家族.c-Jun不仅和Jun或Fos家族成员结合,以AP-1的形式发挥生物学功能,也可以单独作为转录因子参与基因转录调控.