希森美康XN9000血液分析流水线复检规则的制定与评估

目的:以国际血液学复检专家组推荐的41条血细胞复检规则为基础,根据希森美康XN9000血液分析流水线(简称XN9000)的仪器性能特征,制定希森美康XN9000血液分析流水线复检规则草案,并对复检规则进行评估。方法:随机选取1000份乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K)抗凝的静脉全血标本,在XN9000上进行检测并涂片染色,由一名副主任技师与一名主管技师对所有标本进行双盲法人工镜检,根据仪器检测结果及人工镜检结果对复检规则的制定进行评估。结果:通过人工镜检1000份标本,验证现有复检规则草案的假阴性率为1.08%,低于国际血液学复检专家组要求的5%的最大允许范围。其假阴性主要集中于红细胞形态、血小板的计数及异形淋巴细胞3个项目。结论:针对希森美康XN9000血液分析流水线制定的改良复检规则,能够有效地筛选出真正的异常样本,同时操作人员在最短的时间复检真正异常的标本,进而提高了工作效率,保证了血细胞分析检测的准确性。     

耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌整合子分布与多位点序列分析

目的通过检测临床分离耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌(Carbapenem-resistant enterobacter cloacae,CRECL)整合子,采用多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)了解其流行特点,为医院控制感染提供依据。方法收集并保存临床CRECL 15株;鉴定与药敏试验采用BD phoenix M50全自动细菌鉴定仪;整合子、可变区、MLST和碳青霉烯酶测定采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)和琼脂糖凝胶电泳,并对可变区阳性、七对管家基因和碳青霉烯酶的菌株DNA测序,所得数据与数据库比对分析。结果 15株CRECLⅠ类整合子阳性检出率80.0%(12/15),未检出II类及III类整合子;全部CRECL菌株均扩增出可变区,其中11株检测出耐药基因盒,分别为aacA 4-cr、blaOXA30、CatB 3、ARR-3、QacEdelta 1共5种;15株CRECL菌株检出5种序列分型(ST),其中11株为ST 93型,其余为ST 167型、ST 1108型、ST 136型、ST 4型;12株菌株检测出新德里金属-β-内酰胺酶1基因(NDM-1)。结论Ⅰ类整合子与阴沟肠杆菌耐药存在相关性,可能在耐药基因传播中起重要作用;医院CRECL整合子阳性菌株检出率较高;ST型主要为ST 93型,整合子阳性菌株及NDM-1与ST型有较好一致性。     

2株皮肤软组织感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌全基因组测序分析

目的 对2株(1株ST59型,命名为QY01;1株ST338型,命名为QY02)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行全基因组测序分析,了解2株菌携带的耐药基因和毒力基因及其差异,为后续对MRSA的耐药机制、群体进化研究提供模板比对序列。方法 使用二代测序平台Illumina Hiseq 2000,PE150测序策略对2株MRSA进行全基因组测序分析;使用FastQC进行测序质控;使用SPAdes进行序列拼接;使用RAST(http://rast.nmpdr.org)进行基因预测及功能注释;使用毒力基因数据库(http://www.mgc.ac.cn/VFs/search_V Fs.html)对携带的毒力基因进行筛查;使用抗生素耐药基因数据库(CARD;http://card.mcmast er.ca/)对携带的耐药基因进行筛查。结果 QY01菌株基因组大小为2 760 018 bp,GC占比32.7%,其基因组草图序列已提交至NCBI GenBank数据库(BioSample:SAMN09711465),QY01菌株携带6个耐药基因,分别是blaZ、mecA、aph(3’)-III、ant(6)-Ia、erm(B)、tet(K);QY02菌株基因组大小为2 776 622 bp,GC占比32.7%,其基因组草图序列已提交至NCBI GenBank数据库(BioSample:SAMN09711466),QY02菌株携带7个耐药基因,分别blaZ、mecA、aph(3’)-III、ant(6)-Ia、erm(B)、tet(K)、cat(pC233)。QY01和QY02菌株均携带11个相同的毒力基因,分别是aur、scn、lukS-PV、lukF-PV、seb、sek、seq、hlb、hlgA、hlgB、hlgC。结论 QY02(ST338型)菌株较QY01(ST59型)菌株携带更多的耐药基因,QY01和QY02菌株携带的毒力基因无差异,2株菌均可产生潘顿-瓦伦丁杀白细胞素(PVL)、金属蛋白酶(AUR)、葡萄球菌补体抑制剂(SCN)等致病物质。     

屎肠球菌耐药性与相关耐药基因研究

目的 研究从临床感染者分离的屎肠球菌耐药性与耐药基因、整合子携带相关性,为屎肠球菌引起各种感染治疗提供依据。方法 收集并保存广州医科大学附属第六医院临床送检标本中分离屎肠球菌30株,鉴定与药敏试验采用Vitek compact全自动细菌鉴定仪,同时用质谱仪复核,并采用聚合酶链式反应（PCR）及琼脂凝胶电泳方法对耐药基因及整合子进行检测。结果 30株屎肠球菌分别来自尿液13株、胆汁5株、血液4株、腹腔引流物3株、伤口分泌物3株、腹水1株、皮肤分泌物1株。药敏结果显示,屎肠球菌对红霉素、左氧氟沙星耐药率为100%,对青霉素、阿莫西林/克拉维酸、氨苄青霉素、阿莫西林耐药率分别为93.33%、90.00%、90.00%、86.67%,对高水平庆大霉素、四环素耐药率分别为46.67%、40.00%,对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁表现为全敏感。耐药基因检测阳性率从高到低分别为：qacE△1-sull阳性率73.33%、aac(6')/aph(2')阳性率40.00%、aph(3')阳性率63.33%、ant(6)-I阳性率53.33%、tet M阳性率43.33%、erm B、 vanA、 vanB均为阴性,未检出Ⅰ类整合子。结论 屎肠球菌耐药性与耐药基因携带呈一定相关性,未检出Ⅰ类整合子,可能与地区分布差异有关。     

血流感染和皮肤软组织感染金黄色葡萄球菌耐药特征及多位点序列分型

目的了解血流和皮肤软组织感染金黄色葡萄球菌(金葡菌)耐药特征及多位点序列分型(MLST)特征。方法采用BD Phoenix~(TM) 100进行金葡菌鉴定与药敏检测,采用WHONET 5.6软件及SPSS 19.0软件对细菌耐药率进行统计分析,采用MLST方法对金葡菌进行分子分型。结果共收集47株血流感染金葡菌和62株皮肤软组织感染金葡菌,血流和皮肤软组织感染金葡菌中MRSA检出率分别为21.3%(10株)和61.3%(38株),未发现对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁、夫西地酸和高水平莫匹罗星耐药菌株。血流感染MRSA株MLST分型以ST59为主(40.0%,4/10),MSSA株以ST7、ST188为主(各16.2%,6/37)。皮肤软组织感染MRSA株以ST338为主(47.4%,18/38),MSSA株以ST5、ST88为主(各12.5%,3/24)。结论血流感染MRSA检出率低于皮肤软组织感染(P0.05),血流感染和皮肤软组织感染MRSA株优势ST分别为ST59和ST338,MSSA株ST呈多样化分布。     

清远地区儿童腹泻病原菌分布及药敏分析

目的:探究清远地区儿童腹泻病原菌分布及对抗菌药物敏感性,为流行病学研究及临床用药提供依据。方法:选取2016年1月至2017年6月清远市人民医院门诊和住院腹泻儿童的粪便标本100例,取大便分别接种于麦康凯、SS和血琼脂培养基上进行细菌培养,经菌落特征、生化实验鉴别及血清分型鉴定到属,并采用BD Phoenix 100全自动细菌鉴定药敏检测系统进行抗菌药物敏感性鉴定。结果:100例大便样本,检出38例病原菌,阳性率为38%,新生儿期(0~28 d)7例,占比18.42%;婴儿期(29 d~1岁)14例,占比36.84%;幼儿期(1~3岁)6例,占比15.79%;学龄前期(3~7岁)5例,占比13.16%;学龄期(7~10岁)3例,占比7.89%;青春期(10~14岁)3例,占比7.89%。38例病原菌,沙门菌20株,占比52.63%;大肠埃希菌11株,占比28.95%;白色念珠菌3株,占比7.89%;普通变形杆菌2株,占比5.26%;蜡样芽胞杆菌2株,占5.26%。通过药敏检测结果显示,大肠埃希菌对β–内酰胺类抗菌药物(加酶抑制剂除外)敏感率较低,沙门菌属多重耐药但对三代头孢和β–内酰胺类抗菌药物(加酶抑制剂除外)敏感率较高。所有菌株对哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南均具有高敏感率。结论:清远地区儿童腹泻患儿中,1岁以下婴幼儿为易感人群,在分离病原菌中,以沙门氏菌为主,特别是鼠伤寒沙门菌居多。在临床用药时,针对不同类型腹泻采用不同的抗生素,提高杀菌效果,保证临床用药合理性。     

尿胰蛋白酶原-2、淀粉酶在急性胰腺炎诊断中的应用评价

目的 探讨血液淀粉酶、尿液淀粉酶、尿胰蛋白酶原-2联合测定在急性胰腺炎诊断中的应用价值.方法 对89例急腹症患者进行尿胰蛋白酶原-2(TPGⅡ),血、尿淀粉酶联合测定,其中38例确诊为急性胰腺炎.结果 38例急性胰腺炎患者中有35例尿胰蛋白酶原-2阳性,敏感度为92.1%;51例非急性胰腺炎患者中有4例尿胰蛋白酶原-2阳性,特异度为92.1%.血AMY特异度为82.4%,敏感度为76.3%;尿AMY特异度为88.2%,敏感度为78.9%.结论 尿胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎诊断中的灵敏度和特异度均高于血、尿淀粉酶,三者同时检测能减少漏诊误诊.     

3种方法检测尿红细胞敏感度和准确性比较

目的比较UF-100尿沉渣全自动分析仪、尿液干化学分析仪与显微镜3种方法检测尿中红细胞（RBC）的敏感度和准确性。方法按要求收集2000份尿液样本,按仪器操作规程和尿沉渣显微镜检查规程,分别使用UF-100尿沉渣分析仪、GEB-600尿干化学分析仪和光学显微镜测定尿中RBC（每高倍视野大于3个为阳性样本）,采用SPSS10．0统计软件对所得数据进行统计学处理和配对资料卡方检验。结果3种方法检出RBC阳性率分别是：尿干化学法38．5％,UF-100全自动尿沉渣分析仪法33．0％,镜检法25．0％,尿干化学法及UF-100全自动尿沉渣分析仪法明显高于镜检法,三者间两两比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论3种方法联合检测可以提高尿中RBC检测的敏感度和准确性。     

沙门菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与血清学分型比较及药敏结果

目的 研究血清学试验和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）在沙门菌分型检测中的应用和药敏试验结果,比较鼠伤寒沙门菌和其他所有沙门菌的耐药差异,为临床用药提供依据。方法 收集腹泻儿童粪便标本中分离非重复沙门菌属40株;采用BD phoenix M50全自动细菌鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定和药敏试验,再进行沙门菌血清型分型;利用WHONET 5.6软件及SPSS13.0软件对细菌耐药性进行统计分析;采用MALDI-TOF-MS法对沙门菌进行质谱鉴定。结果 40株经仪器鉴定为沙门菌株,血清学试验分为10个血清型,分属5个血清群,优势血清型为鼠伤寒沙门菌,占65.0%;其次为肠炎沙门菌和斯坦利沙门菌,各占7.5%,未检出伤寒和副伤寒沙门菌;MALDI-TOF-MS鉴定结果均能鉴定到种属水平,且匹配分数均>2.300。当差异水平为200时,可分为20个型别,其中14株为单株菌。血清学分型与MALDI-TOF-MS鉴定结果相比：28株鉴定结果与血清型一致,主要为鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌和斯坦利沙门菌;12株鉴定结果与血清型不一致。血清学分型与MALDI-TOF-MS法关系密切,但两者不完全对应。沙门菌药敏试验结果显示,耐药率较高的抗菌药物依次为氨苄西林、哌拉西林、四环素,耐药率均大于70.0%;对阿米卡星、美洛培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、亚胺培南均敏感。结论 两种方法均能快速准确鉴定出沙门菌,MALDI-TOF-MS法和血清学分型配合使用,对沙门菌的快速鉴定有重要意义。