灭活前后HIV-1包膜基因变异的研究

目的 深入了解ＨＩＶ在灭活因素作用下包膜基因变异。方法 对ＨＩＶ－１Ｂ３亚型毒株在Ｓ／Ｄ法及低ｐＨ法灭活作用前后的样品,套式ＰＣＲ扩增其民膜基因Ｃ２￣Ｃ３区５６４ｂｐ的核酸自段,进行核苷酸序列测定和分析。结果 两种方法活前后,包膜基因变异均不显著,核苷酸同源性均为９８％。结论 Ｓ／Ｄ法及低ｐＨ法灭活作用前后ＨＩＶ包膜基因变异不显著。体外传代ＨＩＶ包膜基因趋于稳定。     

维生素C对人类免疫缺陷病毒灭活作用的研究

目的验证维生素C对人类免疫缺陷病毒(HIV)的灭活作用,为生物制品提供一种安全可行的HIV灭活的方法。方法通过测半数组织培养感染剂量(TCID50),检测不同浓度维生素C在不同温度和作用时间下对HIV的灭活作用,并对有效剂量组进行MT4细胞毒性试验。结果500μg/ml维生素C在无血清状态下有灭活HIV作用,而此剂量对MT4细胞有不可逆转的毒性作用。结论维生素C不适宜用于血及血制品的HIV灭活。     

山西省215例自然流产患者心磷脂抗体及抗β2糖蛋白抗体分析

目的 对山西省215例自然流产患者进行抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)及抗β2糖蛋白抗体(anti-beta 2-glycoproteinⅠantibody,aβ2-GPⅠ)分析,探讨两神抗体与自然流产的相关性.方法215例自然流产患者与100例健康对照者分为两组,采用间接酶联免疫法分别检测IgG型和IgM型ACA以及aβ2-GPⅠ,并用多因素logistic回归分析其相关性.结果IgG型ACA、IgM型ACA和aβ2-GPⅠ、年龄、有无用药史及有无家族史与自然流产的发生有关,未发现相对体质量与自然流产的发生相关.多因素logistic回归分析显示,IgG型ACA、aβ2-GPⅠ、用药史及家族史与自然流产相关.结论ACA和aβ2-GPⅠ与自然流产关系密切,两类抗体联合检测有助于该疾病诊断.     

小剂量顺铂通过下调Th17细胞频率缓解小鼠自身免疫性肝炎

目的 探索小剂量顺铂对小鼠自身免疫性肝炎(AIH)Th17细胞的影响及相关机制.方法 将24只小鼠随机分为正常组(normal group)、AIH+顺铂组(AIH+Cisplatin group)和AIH+生理盐水组(AIH+NS group).后2组利用S100/FCA建立小鼠AIH模型后,分别腹腔注射0.2 ml...     

FBL3细胞在小鼠体内外诱导CD4+CD25+调节性T细胞增殖的实验研究

目的：通过小鼠体内外实验观察肿瘤细胞是否可以诱导CD4^＋CD25^＋Treg的分化增殖。方法：将小鼠的红白血病瘤细胞系FBL3接种于C57BL/6小鼠腹壁皮下,流式细胞仪检测小鼠外周血、脾脏及瘤组织CD4^＋CD25^＋Treg细胞含量,RT-PCR检测小鼠脾脏及瘤组织Foxp3 mRNA的表达;体外实验检测FBL3细胞培养上清液对小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg细胞的作用。结果：荷瘤鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg比例与正常鼠比较无统计学差异（P〉0.05）,但荷瘤鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg比例显著高于正常对照（P〈0.01）,荷瘤小鼠脾脏组织Foxp3 mRNA的表达量明显增加;体外实验表明FBL3培养上清液促使CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例增高,并诱导Foxp3 mRNA表达增加。结论：FBL3细胞及其分泌的可溶性物质能诱导CD4^＋CD25^＋Treg细胞的增殖,说明是肿瘤的发生促进了CD4^＋CD25^＋Treg增高。     

不同剂量环磷酰胺对小鼠免疫功能的影响

目的探索不同剂量环磷酰胺(CTX)对正常小鼠免疫功能的影响,为CTX临床应用提供实验数据。方法 C57BL/6小鼠24只,随机分为对照组、低剂量组和高剂量组,分别给生理盐水(NS)、低剂量和高剂量的CTX,检测血常规、Treg比率、T细胞和B细胞增殖功能及巨噬细胞吞噬功能、细胞增殖周期及凋亡比率。结果 RBC、WBC、PLT数量在高剂量组显著降低,对照组与低剂量组无差异;Treg占CD4+T细胞的比例在低剂量组显著下降,对照组与高剂量组无差异;T、B细胞增殖指数及巨噬细胞吞噬功能在低剂量组高于对照组和高剂量组,高剂量组低于对照组;细胞凋亡比率在高剂量组明显增加,对照组与低剂量组间无差异;高剂量组细胞阻滞在S期,对照组与低剂量组间无差异。结论低剂量CTX通过下调Treg、增强免疫细胞的功能,促进机体免疫;而高剂量CTX通过抑制DNA的复制、促进细胞凋亡和降低免疫细胞功能,使机体处于免疫抑制状态。相关数据可以为CTX的临床应用提供借鉴。     

灭活前后HIV-1生物学性状改变的研究

S/D法及低 p H法是常用的血制品灭活病毒的有效方法。在评价 S/D法及低 p H法灭活 HIV试验中 ,发现不病变样品经盲目传代可以传出病变 ,说明 HIV在灭活因素作用下发生变异。 HIV具有高度的变异性 ,不同地区不同机体 ,同一机体不同病程 ,甚至同一机体一次取样均可分离到不同基因型不同生物学性状的 HIV株 [1 ]。我们曾在 MT4细胞长期自然传代培养 HIV,分析 HIV包膜基因变异及生物学性状改变 ,获得体外传代 HIV包膜基因变异不显著 ;病毒感染毒力及病毒产量上升 ;亚型不变 ,生物学性状相对稳定的结论。为了进一步了解灭活作用下 H…     

布鲁菌液体气溶胶肺部感染途径小鼠模型建立及毒理评价

目的建立布鲁菌液体气溶胶感染小鼠模型并进行毒理评价。方法选取6~8周龄BALB/c雌鼠,经肺递送和滴鼻2种途径感染布鲁菌S19-CN,分别于第0、2、4、6、8周,观察并记录临床体征,采集样本,分别对脾脏和肺脏载菌量计数及抗体(血清)和细胞因子(血清和肺匀浆)进行检测。结果与空白对照组比较,感染后,肺递送组、滴鼻组小鼠均未见病症;体质量无显著下降;脾重分别在感染后第2周、第4周达到峰值;肺载菌量均在第2周达到峰值,约107 CFU/g;血清抗体均在感染后8周内维持较高水平,肺递送组和滴鼻组的血清和肺匀浆中均可检测到高浓度细胞因子IFN-γ、TNF-α,且肺递送组峰值高于滴鼻组,与空白对照比较差异有统计学意义(P均0.05)。结论本研究通过布鲁菌S19-CN液体气溶胶肺递送感染BALB/c小鼠,成功建立布鲁菌液体气溶胶感染小鼠模型。S19-CN引起BALB/c小鼠慢性感染,脾肿大明显,毒理作用显著;同时激发了较强的细胞免疫和体液免疫反应。     

人巨细胞病毒PP65_(322～561)片段的原核表达及功能鉴定

目的 构建人巨细胞病毒(HCMV)PP65_(322～561)蛋白片段的原核表达载体PQE30-PP65,并表达蛋白.方法 PCR扩增HCMV PP65第976～1686位核苷酸片段;构建重组表达质粒PQE30-PP65转化M15并表达蛋白;PCR、SDS-PAGE及Weatern blot鉴定重组载体及表达产物;ELISA检测目的蛋白的抗原性.结果构建了PQE30-PP65表达载体,在M15菌株中成功表达PP65_(322～561)蛋白,蛋白浓度达到2.2g/t.并与pp65单克隆抗体及HCMV LgG阳性血清反应良好.结论 成功构建PQE30-PP65表达载体,表达的目的蛋白具有良好的抗原性.