广东省1994年急性驰缓性麻痹监测系统评价

广东省１９９４年急性驰缓性麻痹监测系统评价林永杰，陈树本，吴承民，林伟生，柯昌文为如期实现消灭脊髓灰质炎的目标，我省１９９１年开展了急性驰缓性麻痹（简称ＡＦＰ）监测系统工作，１９９４年工作质量显著提高，现将工作状况评价如下：资料来源与方法１资料来源１...     

广东省1994～1996年急性弛缓性麻痹病例和脊髓灰质炎病毒监测评析

自１９９４年以来，广东省已连续３年未发现脊髓灰质炎（脊灰）野病毒病例，表明消灭脊灰工作取得了显著进展。为进一步提高监测系统的工作质量，为进行消灭脊灰证实工作做准备，特将１９９４～１９９６年广东省ＡＦＰ病例监测系统工作状况评价分析如下。１材料和方法１?..     

广东省耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药性及分子流行特征分析

目的 了解广东省耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）的耐药性及相关耐药基因和分子流行病学特征,为指导临床合理用药、有效控制耐药传播提供依据。方法 以广东省2019年收集的58株CRAB为研究对象,采用Vitek MS全自动微生物质谱仪和微量肉汤稀释法进行菌种鉴定及药物敏感性试验,利用全基因组测序技术对菌株进行耐药相关分子特征、菌株同源性及遗传进化关系分析。结果 58株CRAB对大多数抗菌药物耐药率均为100%,仅对替加环素和多粘菌素B表现敏感。共检测到26种耐药基因,所有菌株均同时携带bla_OXA-23和bla_OXA-66两种碳青霉烯酶基因。27.5%菌株检测到耐药基因元件ISAba1-OXA-23,由Tn2006携带并整合在AbaR4型耐药岛上;其中11株同时检测到由Tn2008VAR携带的耐药基因元件OXA-23-ISAba33。所有菌株均为ST2型。同源性分析显示58株CRAB菌群具有2个聚类（C1、C2群）和4个亚组（g1、2、3、4）,与全球CRAB流行株具有密切的亲缘关系。结论 广东地区CRAB均为泛耐药菌。OXA-23型碳青霉烯酶是CRAB的主要耐药机制,且存在ISAba1插入情况。ST2为本地区主要流行克隆,与全球流行的CRAB多重耐药克隆遗传关系密切,应加强CRAB耐药监测,防止多重耐药广泛流行与传播。     

人副流感病毒HPIV多重RT-PCR快速检测方法的建立

目的建立快速检测人副流感病毒的多重PCR方法。方法通过查阅文献获取副流感病毒的PCR引物序列,并利用分子生物学软件对其进行评估,同时设计合成半巢式PCR引物。提取分离病毒的总RNA,以RNA抽提物为模板,一步法一次反转录扩增HPIV-1,2,3,4等4种型别的副流感病毒。以多重RT-PCR产物作为模板,用半巢式PCR进一步扩增确认。结果利用多重RT-PCR方法一次扩增出人副流感病毒的4个不同型别,条带大小分别是317、507、189和451bp,与目的片段大小一致;半巢式PCR扩增出相应的特异条带,条带大小分别是261、340、145和390bp,扩增结果与目的片段大小一致。结论人副流感病毒多重RT-PCR快速检测方法已初步建立。     

2005年广东省临床分离猪链球菌的MLST分子分型研究

在2005年四川发生猪链球菌人间感染疫情期间.广东省也加强了监测,并发现了5个散发感染病例.从这5个住院临床病例中,分别分离了5个致病性SS2.通过测定猪链球菌基因组上的7个看家基因dpr、thrA、cpn60、recA、gki、aroA和mutS的部分片段.对这5个猪链球菌进行了多佗点测序分型.通过对上述测序片段进行比对分析发现,5个菌株的dpr、cpn60、recA、gki、aroA和mutS等6个基因片段完全相同;而thrA基凶片段存在两个等位基因型即thrA-c和thrA-h,在该等位基因片段的360位的亮氨酸码子第三位发生了一个中性突变(TTA→TTG).MLST分析结果显示,广东省的临床猪链球菌分离株L-SS002、L-SS003和L-SS005菌株.与四川疫情株相同,属于ST7型;而L-SS004和L-SS006,与香港地区发现的猪链球菌相同,属于ST1克隆;但这5个菌株亲缘关系极近,都属于ST1克隆复合物;这一点与四川省暴发的人间猪链疫情明显不同,后者仅由单一的ST7猪链球菌克隆引起.属于ST7的克隆菌株很可能来源于四川;而其余两个ST1克隆系菌株的来源尚待鉴定.     

应用多重TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应检测A型和B型流感病毒的研究

目的 应用多重real-time PCR方法检测A型和B型流感病毒,探讨其在快速诊断流感病毒感染中的优越性.方法 根据A型和B型流感病毒M基因的相对保守序列,设计两套特异性引物和TaqMan MGB探针,进行多重real-time PCR检测A型和B型流感病毒.将该方法与病毒分离、免疫层析、传统RT-PCR进行比较,并对多重real-time PCR的特异性进行评估.并应用multiplex real-time PCR方法和常规的病毒分离方法对广东省流感样病例334份咽拭标本进行检测,比较其灵敏性和特异性.结果 多重real-time PCR反应可以检测到A、B型流感病毒的最低病毒量分别为10-1和10-3TCID50/反应.该方法在对流感病毒株以及其他呼吸道病毒株样品的检测中,未发现假阳性和假阴性现象,特异性为100%.该方法对334份临床标本进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定结合血清学检测)的符合率达100%,且灵敏度明显高于病毒分离.结论 该研究建立的多重TaqMan MGB real-time PCR是一种快速、灵敏性和特异性高的流感病毒检测方法,对于流感的早期诊断及指导临床有重要意义.     

一起急性上呼吸道病毒感染暴发流行的病原学分析

目的探讨2006年2月下旬汕头市某小学暴发的一起急性上呼吸道病毒感染的病原学。方法采集患者急性期咽拭子标本进行腺病毒、B型流感病毒和呼吸道合胞病毒的核酸检测,对PCR结果进行序列测定和分析;咽拭子标本用Hep-2细胞进行病毒分离;用患者双份血清进行腺病毒中和实验和B型流感病毒的血凝抑制试验。结果35份患者的咽拭子标本中用PCR扩增同时检测到了12份腺病毒(阳性率为34.3%)和15份B型流感病毒(阳性率为42.9%),呼吸道合胞病毒核酸检测阴性。序列分析表明腺病毒与江苏省2005年分离的毒株以及广东省2005年分离的3型腺病毒毒株的相似性高达98%,而B型流感病毒与孟斐斯分离到的B型流感病毒同源性高达99%。咽拭子标本用Hep-2细胞未分离到腺病毒和B型流感病毒。病人双份血清的腺病毒中和试验显示抗体没有4倍增长,但腺病毒阳性者晚期血清抗体几何平均值为12.1,腺病毒阴性者即为1.4。而B型流感病毒双份血清血凝抑制试验表明恢复期抗体比较急性期抗体有4倍或以上增长。结论该次急性上呼吸道感染是由B型流感病毒引起的,但可能先前感染过腺病毒。     

HSV-2感染ECV304的形态学变化

目的观察人脐静脉内皮细胞（ECV304）受到单纯疱疹病毒2型（HSV-2）感染后的连续病变过程及形态学特征。方法采用ECV304传代培养,接种HSV-2后用相差显微镜、组织染色观察贴壁生长细胞的病变全过程。结果接种HSV-2后,ECV304于1d逐渐出现细胞肿胀、变圆、胞浆颗粒增多粗大;2d逐渐出现细胞融合,细胞核着色变浅。结论HSV-2接种后在ECV304出现的形态学变化,造成细胞死亡的主要形式是细胞坏死,未见明显的细胞凋亡现象。     

广东省羊种布鲁杆菌菌株分子分型研究

布鲁杆菌（Brucella）是一种胞内寄生兼性厌氧的革兰阴性微小球杆菌,可以经消化道、皮肤粘膜、呼吸道等途径侵入机体而引起感染,布鲁杆菌侵入机体可引起传染-变态反应性的人畜共患传染性布鲁杆菌病（Brucellosis,布病）。20世纪90年代中期以后,由于我国疫区畜间疫情出现回升,导致人间布病疫情呈逐年上升趋势,     

人禽流感死亡病例不同组织器官中H5N1病毒的检测分析

目的了解H5N1病毒在人禽流感死亡病例组织器官中的分布和含量。方法在BSL-3实验室，测定H5N1禽流感病毒分离株的TCID50，并采用荧光定量PCR制作标准曲线；将人禽流感死亡病例的尸解标本，包括心、肝、脾、肺、肾、脑等组织标本研磨处理后，进行荧光定量PCR检测，并根据标准曲线推算H5N1禽流感病毒的病毒载量。结果心、肝、肾、脑组织标本中H5N1禽流感病毒检测为阴性，在肺、脾组织标本中检测到H5N1病毒，病毒载量分别为10^6.3TCID50／ml和10^4.55TCID50／ml。结论除呼吸系统外，在脾组织中也存在H5N1禽流感病毒。