广东省SARS流行株M基因序列分析

目的：测定广东省不同流行时期13份SARS病毒(SARS CoV)标本的M基因序列，通过分析该基因序列的变异情况，初步了解广东省SARS病毒在流行过程中是否发生了变异。方法：提取病毒RNA，用M基因特异引物进行RT-PCR，将产物纯化后直接测定核苷酸序列。结果：13份标本M基因核苷酸序列同源性很高，为99．7％～100％，M基因核苷酸序列只在2个位点(80和203位)发生变异，1株80位点的变化引起编码的氨基酸从苯丙氨酸(F)变为半胱氨酸(C)，3株203位变化为无义突变。结论：M基因核苷酸序列变异不大，初期和后期M基因核苷酸序列与流行高峰期的毒株相差1个碱基，但氨基酸序列相同；从香港感染病人分离的1株病毒M基因与广东本地感染分离株存在1个氨基酸的差异。     

广东2003年末SARS患者冠状病毒抗原抗体动态特征分析

目的分析SARS-IgG、SARS-IgM、核壳蛋白-IgG抗体和核壳蛋白抗原的变化特点并探讨其意义。方法采用酶联免疫方法对2003年末至2004年初新发4例SARS病人的系列血清进行上述4项的滴度检测。结果在病人较早期的血清中可以检测到核壳蛋白抗原，随着抗体水平的升高，抗原含量迅速下降。抗体E升下降快，在最高水平维持时间短，并且除第1例外，其余3例的抗体滴度均小于1：100，核壳蛋白抗体变化规律与总的IgG抗体一致，但滴度更低。结论抗体变化规律与前次流行不同，抗体水平变化快，应注意及时采集标本。抗原检测可作为一种实验室诊断依据。核壳蛋白抗体可考虑用于早期诊断。     

广东省不同人群SARS病毒抗体水平调查

目的对不同人群进行SARS-IgG抗体水平检测，分析SARS流行规模和特征，评价暴露的危险性，了解人数中是否存在SARS病毒隐性感染，为寻找SARS病毒传染源提供线索。方法抽取7708份不同人群标本，按临床症状和暴露因素分为临床确诊SARS病人、病人或污染物的接触者、普通健康人群和动物销售人员4类，采用酶联免疫方法(ELISA)进行SARS-IgG抗体检测，用免疫荧光法(IFA)复核，并结合流行病学资料进行分析。结果127例临床确诊SARS病人抗体阳性率为66．9％；密切接触者中女性发病率高于男性；SARS病人或其污染物的密切接触者抗体阳性率为0．88％；动物销售人员为13．4％；野生哺乳动物销售者的抗体阳性率显著高于其他动物销售者，普通健康人群未检出抗体阳性。低年龄健康人群ELISA检测阳性率为2．06％，高于总体水平。结论人群总体抗体水平很低，普通健康人群无SARS冠状病毒抗体，但可能存在某种可与SARS冠状病毒起交叉反应的抗体；有无接触史是影响抗体阳性率的重要因素；密切接触者可能存在隐性感染；野生动物可能是本次SARS的传染源。     

颞下颌关节退行性变早期髁突软骨细胞行为改变的实验研究

目的 探索应力诱导颞下颌关节(TMJ)退行性变早期,髁突软骨细胞增殖、凋亡和自噬行为表现及相关信号通路的变化.方法 使用小鼠强制张口模型分别对小鼠加力0 d(对照组)和10 d(实验组),加力结束后取样.髁突软骨行激光共聚焦扫描,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色检测增殖;完整关节区切片行苏木精/伊红、甲苯胺...     

2006年广东省部分检测乙型肝炎标志物ELISA试剂的质量评估

目的对广东省部分乙型肝炎(乙肝)标志物ELISA检测试剂的质量进行评估并分析评估结果。方法对9种不同的乙肝标志物ELISA检测试剂,用中国药品生物制品检定所提供的国家参考品,按照试剂使用说明书,根据2000年版《中国药品生物制品规程》进行检测和结果判定,并通过灵敏度、特异性和精密性等指标对试剂进行评估。结果9种试剂的乙肝标志物5项检测结果均有不合格项,HBsAg检测试剂达标率最高,相对质量较好。在9种乙肝标志物ELISA试剂中,A试剂4项合格,C和F试剂3项合格,其余试剂的合格项均不超过2项。在5个检测项目中,HBsAg有6种试剂合格,HBeAg有4种试剂合格,HBeAb有3种试剂合格,HBsAb和HBcAb只有2种试剂合格。结论国产乙肝标志物ELISA检测试剂的质量有待进一步提高。     

五种SARS冠状病毒-IgG抗体检测试剂的比较

目的 比较五种SARS冠状病毒—IgG抗体诊断试剂，检测SRS冠状病毒特异性抗体的敏感性和特异性。方法 分别用间接免疫荧光(IFA)和四种ELISA诊断试剂(其中SLISA—1为全病毒抗原建立的间接法，ELISA—2为表达抗原片断建立的双抗原夹心法，ELISA—3/4为表达抗原建立的间接法)检测IgG抗体。100份血清标本分别采自发病7d以上的临床确诊SARS病例34例和疑似病例42例、发病6d以内临床确诊病例1例和疑似病例23例。结果 用IFA及四种ELISA诊断试剂检测34份发病7d以上临床确诊SARS病例的血清样本，其IgG检出率与临床诊断的符合率分别为：IFA44．12％，SLISA—1、4为41．17％、ELISA—2、3为23．52％；对42例疑似病例的检出率，IFA、ELISA—3为11．9％，ELISA—-1、2、4为9、52％；发病1～6d内的确诊和疑似病例血清中未能检出特异性的IgG抗体。结论 五种诊断试剂都可以帮助临床做出符合诊断和鉴别诊断，可以作为SARS血清学诊断方法，但其检出率与临床诊断的符合率均较低。     

人副流感病毒HPIV多重RT-PCR快速检测方法的建立

目的建立快速检测人副流感病毒的多重PCR方法。方法通过查阅文献获取副流感病毒的PCR引物序列,并利用分子生物学软件对其进行评估,同时设计合成半巢式PCR引物。提取分离病毒的总RNA,以RNA抽提物为模板,一步法一次反转录扩增HPIV-1,2,3,4等4种型别的副流感病毒。以多重RT-PCR产物作为模板,用半巢式PCR进一步扩增确认。结果利用多重RT-PCR方法一次扩增出人副流感病毒的4个不同型别,条带大小分别是317、507、189和451bp,与目的片段大小一致;半巢式PCR扩增出相应的特异条带,条带大小分别是261、340、145和390bp,扩增结果与目的片段大小一致。结论人副流感病毒多重RT-PCR快速检测方法已初步建立。     

人禽流感死亡病例不同组织器官中H5N1病毒的检测分析

目的了解H5N1病毒在人禽流感死亡病例组织器官中的分布和含量。方法在BSL-3实验室，测定H5N1禽流感病毒分离株的TCID50，并采用荧光定量PCR制作标准曲线；将人禽流感死亡病例的尸解标本，包括心、肝、脾、肺、肾、脑等组织标本研磨处理后，进行荧光定量PCR检测，并根据标准曲线推算H5N1禽流感病毒的病毒载量。结果心、肝、肾、脑组织标本中H5N1禽流感病毒检测为阴性，在肺、脾组织标本中检测到H5N1病毒，病毒载量分别为10^6.3TCID50／ml和10^4.55TCID50／ml。结论除呼吸系统外，在脾组织中也存在H5N1禽流感病毒。     

一起急性上呼吸道病毒感染暴发流行的病原学分析

目的探讨2006年2月下旬汕头市某小学暴发的一起急性上呼吸道病毒感染的病原学。方法采集患者急性期咽拭子标本进行腺病毒、B型流感病毒和呼吸道合胞病毒的核酸检测,对PCR结果进行序列测定和分析;咽拭子标本用Hep-2细胞进行病毒分离;用患者双份血清进行腺病毒中和实验和B型流感病毒的血凝抑制试验。结果35份患者的咽拭子标本中用PCR扩增同时检测到了12份腺病毒(阳性率为34.3%)和15份B型流感病毒(阳性率为42.9%),呼吸道合胞病毒核酸检测阴性。序列分析表明腺病毒与江苏省2005年分离的毒株以及广东省2005年分离的3型腺病毒毒株的相似性高达98%,而B型流感病毒与孟斐斯分离到的B型流感病毒同源性高达99%。咽拭子标本用Hep-2细胞未分离到腺病毒和B型流感病毒。病人双份血清的腺病毒中和试验显示抗体没有4倍增长,但腺病毒阳性者晚期血清抗体几何平均值为12.1,腺病毒阴性者即为1.4。而B型流感病毒双份血清血凝抑制试验表明恢复期抗体比较急性期抗体有4倍或以上增长。结论该次急性上呼吸道感染是由B型流感病毒引起的,但可能先前感染过腺病毒。