应用FITC系统建立非均衡竞争睾酮(T)化学发光法

目的 建立可广泛应用于睾酮(T)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人T多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记T-类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-T类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,固相抗原与血清中T竞争结合抗T抗体-HRP,建立化学发光法(CLIA)血清T检测系统(FITC系统),进行方法 学评价,并与直接用T-牛血清清蛋白包被系统(非FITC系统)和罗氏公司Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.05~20 ng/mL,灵敏度为0.05 ng/mL;批内、批间变异系数均小于5%,优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果 的相关系数为0.973 2,测定结果 差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功建立基于FITC系统的非均衡竞争T检测CLIA系统,精密度、灵敏度等指标均符合临床要求,可用于临床标本检测.     

人血清胱抑素C化学发光免疫分析检测系统的建立

目的 建立可用于人血清胱抑素C(Cys C)检测的化学发光免疫分析(CLIA)系统.方法 制备抗人Cys C多克隆及单克隆抗体,以单克隆抗体包被发光板,以辣根过氧标记多克隆抗体作为游离抗体,以夹心法为检测原理,建立Cys C CLIA检测系统;对自建检测系统进行方法 学评价,并与罗氏MODULAR P800颗粒增强透射免疫分析(PETIA)系统进行比对.结果 自建CLIA检测系统线性范围为0.05~20 mg/L,灵敏度为0.05 mg/L,标准曲线线性相关系数为0.999 7,批内、批间变异系数均小于5%;与罗氏MODULAR P800 PETIA检测系统检测结果 的相关系数为0.980 2.结论 成功建立人血清Cys C CLIA检测系统,该检测系统灵敏度高、精密度好、稳定性高,能够满足临床应用要求.     

肺巨噬细胞在矽肺肺纤维化发生发展中的作用

矽肺是由于长期吸入大量含游离二氧化硅粉尘引起的以肺间质纤维化为主要病变的全身性疾病.肺巨噬细胞作为与矽尘作用的第一道防线,在矽肺的早期炎症和肺组织纤维化中发挥着重要的作用.肺巨噬细胞具有活跃的吞噬能力.吸入体内的矽尘,绝大部分经纤毛-黏液系统排出体外,一部分由肺巨噬细胞吞噬排出,极少数滞留于肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)内,诱导AM的活化,释放大量的自由基、细胞因子、生长因子、趋化因子、溶酶体酶,最终导致细胞的凋亡或坏死,释放矽尘颗粒.游离的矽尘又可被其他的AM再吞噬.矽尘摄取和再摄取伴随着AM、中性粒细胞、淋巴细胞的补充,导致持续的细胞聚集和慢性炎症.     

应用FITC系统建立非均衡竞争游离甲状腺素化学发光法

[目的]制备抗人甲状腺素多克隆抗体并应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)系统建立非均衡竞争FT4化学发光法.[方法]以T4-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰兔,制备抗人T4多克隆抗体,亲和层析法吸附掉与3-碘-L-甲状腺原氨酸(3-iodo-L-tyrosine)、3,5-二碘-L-甲状腺原氨酸(3,5-diiodo-L-tyrosine)、D-三碘甲状腺原氨酸(D-T3)、L-三碘甲状腺原氨酸(L-T3)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)有交叉反应多抗,纯化特异性的抗人T4多克隆抗体并用FITC标记T4类似物,用抗FITC抗体包被微孔板.反应时,将FT4校准品或样品、FITC-T4类似物、T4抗体-HRP依次加入包被有抗FTTC抗体的化学发光板中,FITC -T4类似物与FT4校准品或样品,非均衡竞争结合T4抗体-HRP,从而在微孔板上形成免疫反应复合物T4类似物-T4抗体-HRP,通过酶促化学发光反应,就可以显示出与样品FT4浓度负相关的相对光单位(relative light unit,RLU),建立FT4化学发光检测方法.[结果]抗体经酶联免疫吸附实验证明对T4具有高度特异性,与3-iodo-L-tyrosine、3,5-diiodo-L-tyrosine、L-T3、D-T3、rT3无交叉反应.该方法建立的试剂盒标准曲线的线性相关系数不小于0.9900;分析灵敏度为0.9 pmol/L;线性检测范围0.9～130 pmol/L;精密度测试批内变异系数CV＜ 10％;与进口发光免疫分析系统做线性相关比较,线性回归系数为1.0852,相关系数为0.9673,临床符合率良好;本方法建立的试剂盒经加速稳定性试验37℃放置7d与2～8℃放置7d无异.[结论]综上所述,应用FITC系统建立的非均衡竞争FT4化学发光免疫分析灵敏度高、特异性好适于临床诊断应用.     

维持性血液透析患者心外膜脂肪组织与冠状动脉钙化、趋化素的关系

目的探讨维持性血液透析患者心外膜脂肪组织与冠状动脉钙化、趋化素的关系。方法选取天津市第五中心医院维持性血液透析患者90例,依据Framingham危险评分分为低危组(10%)、中危组(10%~20%)和高危组(20%)。选取60例健康体检者作为对照组。检测血趋化素、C反应蛋白、血常规、血生化,对维持性血液透析患者行胸多层螺旋CT检查,飞利蒲工作站软件测量心外膜脂肪组织体积和冠状动脉钙化评分。分析维持性血液透析患者心外膜脂肪组织体积与冠状动脉钙化评分、趋化素、C反应蛋白、Framingham危险评分等之间的关系。结果维持性血液透析组血趋化素、C反应蛋白、血中性粒细胞与淋巴细胞比率较对照组升高(P0.01);维持性血液透析高危组、中危组心外膜脂肪组织体积、冠状动脉钙化评分、趋化素明显高于低危组(P0.05或P0.01),高危组心外膜脂肪组织体积、趋化素明显高于中危组(P0.05);维持性血液透析患者冠状动脉钙化评分、趋化素、C反应蛋白及Framingham危险评分为心外膜脂肪组织的影响因素(P0.05或P0.01)。结论维持性血液透析患者血趋化素、C反应蛋白、血中性粒细胞与淋巴细胞比率升高,维持性血液透析患者存在微炎症状态。维持性血液透析患者高危组、中危组心外膜脂肪组织体积、冠状动脉钙化评分、趋化素均高于低危组,心外膜脂肪组织与维持性血液透析患者冠状动脉钙化评分、趋化素及Framingham危险评分相关,心外膜脂肪组织可预测维持性血液透析患者心血管疾病发生风险。     

非酒精性脂肪性肝病从脑论治刍议

随着我国经济水平提高,非酒精性脂肪性肝病(脂肪肝)已经成为我国最重要公共卫生问题之一。目前,脂肪肝的中西医治疗均缺乏安全高效的药物。新的治疗实践提示我们应该注意脑神在脂肪肝形成过程中的重要作用。中医学认为脑神为生命主宰,可统摄五脏。现代医学也发现脑肠轴的重要作用。无论是传统服食辟谷的实践还是针对食欲中枢调控的现代研究,均支持从脑调肝的可行性。基于前期实践,我们提出脂肪肝的治疗不应局限于五脏系统,更应重视中医脑神的调控。脑神为本,肝脾为标,痰热瘀血为末。通过调神,达到抑食欲、促运动和最终治愈脂肪肝的目标。脑肝同治理论或许是未来破解脂肪肝治疗困局的关键思路。     

妇癌术后盆腔淋巴囊肿的超声诊断--附28例报告

我院于 2 0 0 0年 12月～ 2 0 0 1年 12月对妇癌根治术后行盆腔超声检查 ,诊断出盆腔淋巴囊肿 2 8例。总结报告如下。1　临床资料1 1　一般资料本组 2 8例均为我院 2 0 0 0年 12月～ 2 0 0 1年 12月门诊及住院患者 ,女性 ,年龄 2 5～ 61岁。原发肿瘤病变均经手术病理证实 ,均为手术后于 5～ 8ｄ或 6个月内进行常规超声检查的患者。1 2　检查方法仪器 :日本东芝 2 40 ,美国泰索尼 ＦＸ ,腹部凸阵探头 ,频率3 75ＭＨｚ。患者适度充盈膀胱 ,检查时体位常规取平卧位 ,作纵向、横向和多角度扫描。若有囊肿时常在髂血管前方显示 ,此时作横向、…     

应用FITC系统建立非均衡竞争三碘甲腺原氨酸化学发光法

目的 制备抗人三碘甲腺原氨酸(T3)多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测总三碘甲腺原氨酸(TT3)的方法.方法 以T3-牛血清清蛋白(BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化特异性的抗人T3多克隆抗体并连接辣根过氧化物酶(HRP).用FITC标记T3类似物,采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,固相抗原与T3校准品或样本中的T3非均衡竞争结合T3-HRP抗体,建立标准曲线,血清中TT3通过标准曲线计算浓度.由此建立TT3化学发光检测方法进行方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(BGG)包被(非FITC系统)的检测系统进行比较.将该方法应用于临床100份血清标本的检测,定量结果与德国Roche 2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elecsys 2010)结果进行比较.结果 抗体对T3具有高度特异性,线性相关系数r>0.99,线性范围为0.1～8 ng/mL,分析灵敏度为0.1 ng/mL,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测.对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys 2010定量试剂盒的结果有很好的相关性,相关系数为0.961 9,临床符合率良好.结论 该方法精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,适用于临床标本的检测.     

应用FITC系统建立非均衡竞争游离雌三醇(E3)化学发光法

目的 建立可以广泛应用于游离雌三醇(E3)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记雌三醇类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-E3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,并与血清中的free E3竞争结合抗E3抗体-HRP,建立化学发光血清free E3检测系统(FITC系统),进行方法学评价,并与E3-牛血清白蛋白直接包被系统(非FITC系统)和西门子ADVIA CentaurXP系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1～40 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%优于非FITC系统;与西门子ADVIA CentaurXP系统检测结果有良好的相关性(r=0.965 7).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争free E3化学发光免疫分析系统灵敏度高、特异性强,可用于临床标本的检测.