N-端融合蛋白对重组HBeAg抗原性的影响

目的　研究 Ｎ－ 末端融合蛋白对大肠杆菌中表达的 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 抗原性的影响。方法　用 Ｐ Ｃ Ｒ 法,从抗－ Ｈ Ｂｃ（ ＋ ） 血清标本中获得 Ｈ Ｂ Ｖ Ｐｒｅ ｃ － ｃ 基因片段,将其插入质粒 Ｔｒｃ９９ Ａ,重组成亚克隆 Ｐ Ｈ Ｂ Ｉ。以 Ｐ Ｈ Ｂ Ｉ为模板,扩增获得编码乙肝病毒核心蛋白１ ～１４０ 氨基酸的基因片段,加上终止信号,分别插入质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ－ ２ Ｔ 和 Ｔｒｃ９９ Ａ 中,各自转化后,以 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导,大肠杆菌表达插入基因。以 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 和 Ｓ Ｄ Ｓ－ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 方法测定表达产物的分子量和 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 、 Ｈ Ｂｃ Ａｇ 滴度。结果　在 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导下,大肠杆菌中分别表达 Ｎ－ 端融合的 Ｇ Ｓ Ｔ－ Ｈ Ｂｅ Ａｇ 融合蛋白和非融合 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 蛋白。分子量各为４１０００ Ｄ 和１５０００ Ｄ。培养裂解物经 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 测定,融合蛋白 Ｈ Ｂｅ Ａｇ ： Ｈ Ｂｃ Ａｇ 的滴度比为２５６ ：１ ,非融合蛋白为１６ ：１ 。结论　 Ｎ－ 端融合蛋白 Ｇ Ｓ Ｔ－ Ｈ Ｂｅ Ａｇ 抗原性更接近血清 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 。     

毛蚶中甲肝病毒净化实验研究

[目的 ]　研究被甲肝病毒污染的毛蚶净化方法。　 [方法 ]　采用二氧化氯 (ClO2 )、臭氧 (O3)和紫外线等物理和化学联合方法 ,通过循环水系统 ,净化被人工染毒的毛蚶。　 [结果 ]　应用ClO2 、O3和紫外线不同组合方法净化 4d能有效灭活甲肝病毒浓度 (TCID50 )为 1 0 4 的人工染毒毛蚶中的甲肝病毒 (HAV)。　 [结论 ]　ClO2 、O3和紫外线联合净化方法具有灭活毛蚶体内HAV的作用 ,但其效果与净化时间和毛蚶体内HAV浓度密切相关。     

幽门螺杆菌ureA、ureB基因克隆、序列分析及在E.coli中表达

目的　构建含幽门螺杆菌 （Hp） ure A、ure B基因重组质粒 ,测定、分析其核酸序列及推定的氨基酸序列 ,在 E.coli中高效表达两基因 ,为检测试剂和疫苗研究提供基础依据和抗原。方法　PCR法扩增 Hp菌株 HPSH4的 ure A、ure B基因 ,分别与 p GEX- 2 T载体连接并转化大肠杆菌JM10 5 ,测定克隆基因的核酸序列并与 Gen Bank公布的国外 5株 Hp菌株 （2 6 6 95 ,HPK 5 ,J99,CPM6 30 ,M6 0 398）的 ure A、ure B基因作序列比较 ,以 IPTG诱导 ,ure A、ure B基因在 E.coli中高效表达。结果　 ure A核酸同源性 96 .3%～ 98.1% ,氨基酸同源性 98.3%～ 10 0 % ;ure B核酸同源性95 .8%～ 98.0 % ,氨基酸同源性 96 .4 %～ 99.6 %。以 IPTG诱导 ,在 E.coli中表达 rure A融合蛋白5 5 6 0 0 D,rure B融合蛋白 85 5 0 0 D。结论　不同地区 Hp菌株的 ure A、ure B存在程度不同的变...     

上海部分健康体检人员中感染TTV的基因分型

目的 调查上海地区健康人群TTV感染情况及其基因分型。方法 用PCR法检测血清标本中的TTVDNA，对TTVDNA阳性标本作核酸序列测定。结果 100份健康体检人员血清标本，用PCR法检出TTVDNA阳性标本21份。其中14份作了部分序列测定，10份部分序列与TTVG1a基因亚型组的TA278株等的同源性为96．2％－99．5％。另4份与G1a组同源性为662．％－67．6％，与TTVG4基因型相同源性为81．9％－84．8％，与国内报道的各株TTV中同源性最大的61．SEQ为81．9％－84．3％。结论 上海地区部分健康人群中除分布有TTGG1a基因亚型感染外，还分布有国内未见报道的TTV基因型感染，其可归为TTVG4的一基因亚型。     

超速离心法分离人血清脂蛋白组分

从流行病学资料和临床证据说明,动脉粥样硬化的进展程度以及它的并发症——冠心病,与血清低密度脂蛋白(LDL)的浓度呈正比关系,而与血清高密度脂蛋白(HDL)的浓度呈负相关。因此,分离、测定血清中各种脂蛋白组分,对于临床诊断及研究脂蛋白各组分的结构、功能及致病机理,都有一定的     

金黄色葡萄球菌蛋白A的纯化

葡萄球菌蛋白 A(简称 SpA)是大多数金黄色葡萄球菌所具有的细胞壁成份,它能与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fo 片段发生非特异性结合。为进一步研究 SpA 的结构和生物学特性,必须获得纯化的 SpA。纯化方法有用酸沉淀和电泳或用柱层析、凝胶过滤等,但都较繁复,产率不高。Hjelm 等(1972)用溶葡萄球菌素(Lysostaphin)消化细菌后再经 IgG 柱的亲和层析以纯化 SpA,产率高,但溶葡萄球菌素来源困难,价格昂贵。我们利用现有实验条件对这一方法作些改良,获得产率较高的纯化 SpA。     

幽门螺杆菌ureA、ureB基因克隆、序列分析及在E.coli中的表达

目的：构建含幽门螺杆菌（Hp）ureA、ureB基因重组质粒，测定、分析其核酸序列及推定的氨基酸序列，在E.coli中高效表达两基因，为检测试剂和疫苗研究提供基础依据和抗原。方法：PCR法扩增Hp菌株HPSH4的ureA、ureB基因，分别与pGEX-2T载体连接并转化大肠杆菌JM105，测定克隆基因的核酸序列并与GenBank公布的国外5株Hp菌株（26695，HPK5，J99，CPM630，M60398）的ureA、ureB基因作序列比较，以IPTG诱导，ureA、ureB基因在E.coli中高效表达。结果：ureA核酸同源性96.3％-98.1％，氨基酸同源性98.3％-100％；ureB核酸同源性95.8％-98.0％，氨基酸同源性96.4％-99.6％。以IPTG诱导，在E.coli中表达rureA融合蛋白55600D，rureB融合蛋白85500D。结论：不同地区Hp菌株的ureA、ureB存在程度不同的变异，克隆并表达HPSH4的ureA、ureB与GenBank已公布的多数Hp菌株有极高同源性，在E.coli以融合蛋白高效表达rureA和rureB。     

分子生物学技术检测水中病毒

对饮用水、环境水源乃至各级污水中污染病毒的检测,是预防控制疾病、评估水源卫生质量、环境卫生状况的一项有价值的工作。病毒的细胞培养是检测水中病毒的方法之一,尤其是对水中病毒的感染性评价,更是其他方法难以取代。但病毒的细胞培养检测周期长,且有不少病毒目前还难以分离培养,故难以完全满足检测水中病毒的要求。分子生物学技术己逐渐应用于检测水中病毒,不断有报道对水中污染的甲型肝炎病毒（HAV）、戊型肝炎病毒（HEV）、脊髓灰质炎病毒（Poliovirus）、轮状病毒（Rotavirus）、诺澳克病毒（Norwalk　virus）、柯萨奇病毒（Coxsackievirus）、腺病毒（Adenovirus）、呼肠弧病毒（Reovirus）等等病毒的检测,并以敏感、快速、特异等优点扩大在这一领域中的应用。现将分子生物学技术检测水中病毒作一简介,以供参考。     

日本血吸虫微粒体抗原的研究——Ⅰ、成虫微粒体的制备及其抗原性质的初步报告

血吸虫病的血清诊断通常用成虫或虫卵的可溶性抗原。鉴于宿主对寄生虫的免疫反应不仅是对可溶性抗原产生抗体,曾用高浓度尿素溶液对血吸虫卵匀浆的离心沉淀物进行再提取,得到的尿素溶解性抗原在与宿主抗体的反应中显示的活力较常用的水溶性虫卵抗原(SEA)高。这种尿素溶解性抗原是大分子量蛋白质的复杂混合物,来自细胞的各种颗粒成分,为进一步阐明颗粒性抗原的性质,我们从日本血吸虫成虫中分离出微粒体部分。以此作为抗原,用ELISA法测定宿主的抗体,效果良好。     

聚合酶链反应对霍乱病原菌快速检测方法的建立

霍乱弧菌快速、准确的鉴定是控制霍乱流行的重要手段,多年来全球对霍乱弧菌进行了不懈的研究,创立了许多行之有效的检定方法,如生物学试验等.在分子生物学飞速发展的今天,创立霍乱弧菌鉴定的分子生物学方法已成必然趋势,其中聚合酶链反应(PCR)就是应用较多,发展较快的有效的方法之一,它具有较高灵敏度及强大的特异性,运用NESTED-PCR法更能达到10 0/ml的检定水平.