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[摘要] 目的 建立能够特异性检测微量肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, MP)A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR(probe-based allele-specific real-time PCR, 探针ASPCR)方法。方法?建立特异性检测A2063G耐药突变位点的探针ASPCR方法,并验证其灵敏度、特异度及准确度等性能。结果?特异性扩增2063G和非特异性扩增2063A/G的引物/探针组合分别扩增105拷贝野生基因型(2063A)模板的Ct值的差(△Ct)高达10.93,能够特异性检测A2063G突变。探针ASPCR方法检测2063G基因型占总MP的比例的准确度可低至1%;检测MP的灵敏度低至10拷贝,检测A2063G耐药突变比例的灵敏度低至0.01%。探针ASPCR方法与前期建立的染料ASPCR方法检测临床样本的MP感染结果一致,MP阳性检出率均为94.83%(55/58),高于传统巣式PCR联合测序方法的检测结果(75.86%,44/58);探针ASPCR和染料ASPCR 2种方法检测MP耐药率分别为63.64%(35/55)、70.91%(39/55),高于传统巣式PCR联合测序方法检测结果59.09%(26/44)。结论?新建探针ASPCR方法是一种具有高特异度、准确度和灵敏度的快速检测MP微量A2063G耐药突变的方法;与染料ASPCR方法相比,探针ASPCR方法检测耐药MP的灵敏度略低,但其临床样本检测复查率也低于染料ASPCR方法,且其结果判读简单,更适合在临床中应用推广,能够为临床制定MP及耐药MP感染的治疗方案提供理论依据。 相似文献
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本文从经济学角度,对5种检测旋毛虫抗体和4种检测旋毛虫抗原的方法进行了成本分析。应用方法有(1)对试验成本进行合理的界定与分类;(2)根据各类成本的特点确定对其变化的测量方法并进行实际测算。最终得出既经济又实用的检测旋毛虫抗体的方法为快速-ELISA(F-ELISA),其次是SPA-ELISA和ELISA,其单位成本依次为:3.98、4.13、10.89元。采用同样的分析方法,得出检测旋毛虫循环抗原的方法为快速-多克隆抗体夹心-ELISA法(F-ELISA),其单位成本为4.22元。建议在实际应用时,可先用F-ELISA进行初筛,结合F-PcAb的结果作出诊断。 相似文献
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本文首次对来自我国不同地区、不同宿主来源有代表性的6个旋毛虫分离株从基因组DNA的限制性酸切长度多态性、同工酶及可溶性蛋白进行综合研究。核酸结果显示:长春株与其余各地域株的限制性酶切困话间存在着差异,用长春株特异性DNA片段(1.12kb)制成探针,与各株DNA进行Southern杂交,发现各虫株的杂交带型不一,且仅长春株出现1.12kb杂交带。同工酶结果显示:长春株与其余各珠在5种同工酶(GPI、G6PD、HK、6PGDH及AK)酶谱中有显著不同。等电聚焦电泳结果显示:长春株具有一条约4.1PI的特异带。上述结果提示:我国6株旋毛虫分离株间存在着差异,长春株与其余各株差异显著,从而推断我国旅毛虫虫株至少存在2种不同的生物学类型,其间的差异主要与不同的地理分布和/或不同宿主来源有关。 相似文献
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管圆线虫中间宿主调查及皮试液的制备和应用 总被引:4,自引:0,他引:4
1999年9月,我所先后收治了5例管圆线虫病人,该组患者均于起病前在辽宁省盘锦市餐馆内食用过未熟的螺肉。为此,我所收集了当地人工饲养的褐云玛瑙螺,进行了带虫情况的调查。同时,制备了管圆线虫皮试液,进行了初步临床观察。 相似文献
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目的 分析口服阿苯达唑治疗广州管圆线虫病致急性肝损害作用. 方法 对41例广州管圆线虫病患者接受阿苯达唑治疗后出现的急性肝损害(肝功能变化)、基础疾病及转归进行分析. 结果 1)用阿苯达唑治疗广州管圆线虫病疗程结束后,26例患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高,范围为42.00~252.00 U/L,平均(97.66±56.66)U/L;9例患者天门冬氨酸氨基转移酶(AST)增高,范围为41.00~131.00 U/L,平均(60.66±29.34)U/L;13例患者γ-谷氨酰转移酶(GGT)升高,范围为56.90~213.00 U/L,平均(99.52±46.65) U/L;碱性磷酸酶(ALP)、蛋白质及胆红素水平未见显著变化;2)阿苯达唑治疗过程中,同时加用保肝药物(甘利欣、肝泰乐)组68.42%(13/19)氨基转移酶升高,未使用保肝药物组59.09%(13/22)氨基转移酶升高,差异无统计学意义(P>0.05);3)肝功异常者停用阿苯达唑后开始出现好转,出院2个月后血清氨基转移酶大多恢复至正常水平. 结论 口服阿苯达唑可导致急性肝损害,其剂量须根据患者具体情况进行调整,临床应用时注意监测肝功能,并合理使用保肝药物. 相似文献
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疟疾的实验室诊断对于临床治疗至关重要,诊断失误会造成患者误诊、漏诊甚至死亡。血涂片的染色镜检是疟疾实验室诊断的金标准。本研究旨在对感染人体的4种疟原虫:恶性疟原虫P.falciparum、间日疟原虫P.vivax、以及卵形疟原虫P.ovale和三日疟原虫P.malaiae在红细胞中的各期形态进行系统梳理,以提高形态诊断过程中的准确率。本文对2018年疑似疟疾样本的快速检测试剂条(RDT)和镜检形态学检测结果进行比较。结果发现,虽然RDT检测快速、易于操作,但镜检仍然是疟疾确诊的金标准。同时定期形态学培训及质控考核应该成为疟疾检测实验室的常规工作。 相似文献