核糖体蛋白S3a RNA干扰重组慢病毒载体的构建及其对细胞凋亡的影响

目的 构建表达小鼠核糖体蛋白S3a 特异性RNA干扰重组慢病毒载体(Lenti-shmRPS3a),分析其对细胞凋亡的影响。方法 设计针对小鼠RPS3a mRNA 4条干扰序列,合成相应的发夹序列,连接入慢病毒载体系统 pLLU2G-eGFP中构建重组质粒,将重组质粒与辅助包装质粒共转染293T细胞组装病毒,检测病毒滴度。病毒感染RAW264.7细胞后,RT-PCR和Western blot检测干扰效果,流式细胞术分析其对凋亡的影响。结果 PCR和测序证明成功构建出Lenti-shmRPS3a慢病毒载体,病毒滴度为6-9×10₇TU/ml;RT-PCR表明Lenti-shmRPS3a的沉默效率高达72.64%、Western Blot证明RPS3a蛋白水平表达降低;流式细胞术证明感染了Lenti-shmRPS3a慢病毒载体的细胞凋亡率较对照组明显升高。结论 表达小鼠核糖体蛋白S3a shRNA慢病毒载体能有效沉默RPS3a基因表达,促进细胞凋亡。     

核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达

目的 构建核糖体蛋白RPS3a的腺病毒表达载体,并进一步验证其在细胞中的表达。方法 应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,并将RPS3a亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及测序鉴定后,再将含RPS3a基因的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-RPS3a进行Pme I酶线性化处理,转化到含有骨架质粒的BJ5183感受态菌,进行同源重组。鉴定后,经Pac I线性化转染HEK293细胞,包装重组腺病毒。病毒感染NIH3T3细胞,Western blot 分析RPS3a蛋白的表达。结果 证实pAdTrack-CMV-RPS3a及pAdEas-RPS3a质粒构建正确;Western blot检测病毒感染的NIH3T3细胞总蛋白,与pAd-GFP阴性对照组相比,RPS3a蛋白表达量显著提高。结论 成功构建了能表达RPS3a基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其生物学功能奠定基础。     

课题式教学在基因工程药物教学中的应用

基因工程药物课程内容庞杂,理论体系复杂且实践性强,单纯采用传统课堂讲授式教学难以达到理想的教学效果.介绍了在基因工程药物教学中引入课题式教学法以提高教学质量的一些做法,不仅可以使学生更加深刻地理解基因工程药物相关的概念、原理,还可以提高获取知识的兴趣和能力,培养科学研究的思维和创新意识,增强交流沟通、团队合作等多方面的综合素质.     

中药对组织器官纤维化防治机制研究

纤维化类疾病严重影响机体组织、器官功能。目前纤维化类疾病的防治研究已成为国内外热点和重点。中药以其独特的疗效,在抗纤维化研究中占日益重要的位置。中药成分复杂,因此通常其防治过程涉及多种机制且干预不同纤维化的形成。该文主要从单味中药及其有效成分、中药复方在防治纤维化过程中对细胞、细胞因子、细胞外间质方面的影响进行总结。认为中药在防治纤维化中具有较好的疗效,相信随着现代生物技术的发展,探索、筛选理想的抗纤维化药物成为可能。     

生物技术药物教学互动模式探讨与思考

生物技术药物是一门知识更新快、专业性很强的课程,是生物技术专业和药学专业学生重要的专业课。在教学过程中,我们通过构建有效的课堂教学互动,开展创新教育和网络教学,全面推动师生相互交流、相互促进,最大限度地实现教学相长,为培养学生的学习能力和创新能力营造有利的环境,使教学质量得到稳步提高。     

肝细胞核因子4在肝细胞分化和肝细胞癌中的作用

肝细胞核因子（HNFs）是肝脏优势表达的转录因子。HNFs家族不同成员之间互相网络调控,在转录水平调控肝脏重要功能基因表达,对肝脏发育,肝脏结构和功能维持起核心作用。其中肝细胞核因子4a（HNF4a）是细胞核激素受体家族的转录因子,处于转录因子“网络调控”上游,是肝细胞分化和功能维持最为关键的转录因子。     

生物活性化合物的靶点鉴别方法

生物活性化合物作用靶点的确认是化学生物学和药物开发中的关键问题之一.随着科技的进步与发展,许多靶点鉴别的方法和技术已经被报道.目前的靶点鉴别方法主要有两大类：亲和色谱为基础的直接法,通过检测药物与其靶点的结合来鉴别靶点;非亲和为基础的间接法,通过生理学反应或生物化学标记而推断药物的靶点或作用途径.本文主要围绕这两类靶点鉴别方法进行综述.     

ZNF24基因过表达慢病毒载体的构建及其在人结直肠癌HCT116细胞中的表达

目的 通过构建ZNF24基因过表达慢病毒载体,建立ZNF24基因过表达的人结直肠癌HCT116细胞株,为开展后续研究提供物质基础。方法 通过PCR扩增ZNF24基因序列片段和3FLAG标签序列片段,并将两产物通过同源重组克隆至慢病毒载体pMT406中,构建成重组表达ZNF24慢病毒质粒pMT-ZNF24。将重组质粒pMT-ZNF24与辅助包装载体质粒p CMV-dR8.9和pCMV-VSV-G一起共转染293T细胞并收集慢病毒。应用孔稀释法检测病毒滴度,用qRT-PCR和蛋白印迹法检测慢病毒转染HCT116细胞后ZNF24的表达水平。结果 成功构建了重组载体pMT-ZNF24,并获得相应的病毒,病毒滴度为3.25×10⁹ TU/ml。转染重组ZNF24慢病毒的HCT116细胞中ZNF24表达水平显著高于空白组和阴性对照组细胞。结论 构建了ZNF24基因过表达慢病毒载体,并获得相应的病毒和稳定表达ZNF24的HCT116细胞株。     

转录因子ZNF191腺病毒表达载体的构建及鉴定

目的:构建转录因子ZNF191腺病毒表达载体,为进一步研究ZNF191的生物学功能与肿瘤的基因治疗奠定基础.方法:从HEK293细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增ZNF191基因,并将ZNF191亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及DNA测序鉴定后,将含ZNF191基因的重组穿梭质粒pAdTrack-Z...