TAK1/NF-κB在小鼠心肌肥厚中的变化及意义

目的 研究转化生长因子活化激酶1/核因子-κB(TAK1/NF-κB)与炎性反应在心肌肥厚中的作用,探索心肌肥厚的分子机制并寻找潜在的防治靶点。方法 使用野生型C57BL/6J小鼠,以主动脉缩窄术(AB)建立压力负荷诱导的心肌肥厚模型,假手术(Sham)组作为对照组。AB术后8周超声心动图评估小鼠心室结构与功能,处死小鼠称量心脏质量。HE与PSR进行心肌组织病理学与纤维化。CD68免疫荧光检测单核-吞噬细胞浸润,实时定量RT-PCR检测炎性反应标志物的表达,Western blot法检测TAK1/NF-κB通路蛋白质磷酸化水平。结果 与Sham组比较,AB组小鼠的室壁厚度、室腔大小及心脏质量/体质量明显增加(P<0.05),心功能下降(P<0.05),心肌细胞横截面积与胶原沉积量显著增大(P<0.05)。此外,AB组心肌组织中CD68阳性细胞数明显增多(P<0.05),TNF-α与IL-1β等炎性反应标志物的mRNA表达水平明显升高(P<0.05);AB组TAK1、κB抑制蛋白激酶β与κB抑制蛋白α(IκBα)的磷酸化水平较对照组明显上调,IκBα总蛋白水平降低,NF-κB p65磷酸化水平增加。结论 压力负荷诱导的心肌肥厚伴有TAK1/NF-κB通路激活与心肌组织炎性浸润,提示TAK1/NF-κB参与了心肌肥厚的发生、发展。     

小鼠自身免疫性心肌炎发病过程中4-1BB/4-1BBL和IL-15的表达及意义

目的： 探讨在小鼠自身免疫性心肌炎发病过程中4-1BB/4-1BBL、IL-15的表达和变化,及其免疫学活性对心肌炎的影响。方法：将提纯的猪心肌肌球蛋白和完全弗氏佐剂等体积混合成乳浊液在1 d、8 d及30 d免疫具有遗传易感性的BALB/c小鼠,建立实验性自身免疫性心肌炎（EAM）模型。对照组小鼠仅用完全弗氏佐剂皮下注射。分别于初次免疫后21 d、80 d进行心肌炎症评分及血清肌钙蛋白I(cTnI)测定,免疫组化检测心肌淋巴细胞活化诱导受体配体（4-1BBL）的表达,ELISA法检测血清白细胞介素-15(IL-15)的浓度,RT-PCR技术检测4-1BB/4-1BBL和IL-15 mRNA在小鼠心肌组织中的表达。结果：在急性期21 d,EAM组小鼠心肌组织见不同程度的炎性细胞浸润和心肌细胞变性坏死、血清cTnI水平升高（P<0.05）;80 d EAM组小鼠心肌组织炎症减弱伴有纤维化出现、cTnI较前期降低;心肌4-1BBL和血清IL-15在EAM组中表达明显,在对照组中少量表达（P<0.05）;21 d EAM组小鼠心肌组织中4-1BB/4-1BBL和IL-15基因表达水平均高于对照组(P<0.01),且与心肌炎症呈明显的正相关,80 d时表达仍然升高(P<0.05)。结论：4-1BB/4-1BBL和IL-15在EAM小鼠发病过程中的表达上调,4-1BB/4-1BBL共刺激通路和IL-15可能协同参与了自身免疫性心肌炎的发生发展过程。     

实验性自身免疫性心肌炎BALB／C小鼠模型中Annexin Ⅵ的表达变化

目的探讨实验性自身免疫性心肌炎BALB／C小鼠模型心肌组织中annexin Ⅵ的表达变化及意义。方法1．模型复制合成与心肌肌球蛋白抗原表位具有相同氨基酸序列的多肽，与完全佛氏佐剂混合后于第0、7天在腹股沟和腋下皮下免疫BALB／C小鼠；2．指标检测HE染色光镜下观察模型的炎症情况，间接ELISA法检测小鼠血清中抗肌球蛋白IgG抗体，Western Blot法检测心肌组织中annexin Ⅵ的表达变化。结果光镜下表现与血清学指标均一致提示心肌炎症；annexin Ⅵ检测结果示实验组与对照组相比，第14天、21天、30天组Annexin Ⅵ表达降低，差异具有显著性（P〈0．05）；实验组间相比，第14天、21天、30天组与第60天组间均具有显著性差异（P〈0．05）。结论本实验中的多肽可以诱导出心肌炎；炎症急性期annexin Ⅵ表达下降可对抗心肌收缩力的减弱，在心肌炎早期心功能下降过程中起到代偿作用。     

白介素1受体相关激酶4重组过表达质粒pcDNA3.1-IRAK4的构建及转染

目的构建重组过表达质粒pc DNA3.1-IRAK4并检验其在H9c2细胞中的表达。方法在全球科学家质粒共享非盈利组织Addgene申请到p DONR223-IRAK4质粒菌种,摇菌提取质粒后测序。设计引物将目的片段扩增并跑胶回收。将目的片段PCR扩增产物和空质粒pc DNA3.1采用Bam HⅠ和EcoRⅠ酶切,构建重组表达质粒。将重组质粒使用两种转染试剂转染入H9c2细胞中,并借助Western blot法检测IRAK4蛋白在H9c2细胞中的表达。结果重组过表达质粒经菌落PCR、序列测定证实,扩增基因片段IRAK4与基因数据库中序列一致,并且含有终止密码子。转染入H9c2细胞中能够过表达,表明IRAK4重组过表达质粒构建成功。结论成功构建IRAK4基因过表达重组质粒,获得外源性IRAK4转染的H9c2细胞。     

TNFSF13B在实验性自身免疫性心肌炎小鼠心肌组织中的表达及意义

目的：探讨肿瘤坏死因子超家簇成员TNFSF13B在实验性自身免疫性心肌炎小鼠心肌组织中的表达及其意义。方法：用包含心肌肌球蛋白致病性抗原表位的人工合成多肽在d1、d8免疫遗传易感BALB／c小鼠，建立实验性自身免疫性心肌炎动物模型。在初次免疫后d14、d21，取实验组小鼠和对照组小鼠的心肌组织作病理学检查，用免疫组化技术检测TNFSF13B在心肌组织中的表达情况，用ELISA法测血清中抗心肌肌球蛋白自身抗体滴度。结果：初次免疫后d14，实验组15只（15／18）小鼠出现心肌炎症，至d21，实验组17只（17／18）小鼠出现心肌炎症，且程度进一步加重，而对照组小鼠未出现心肌炎症；TNFSF13B在炎症小鼠心肌中的表达明显，而在对照组小鼠心肌中未发现TNFSF13B的表达；与对照组小鼠相比，出现心肌炎症的小鼠血清中有较高滴度的抗心肌肌球蛋白自身抗体。结论：TNFSF13B参与了自身免疫性心肌炎的发生发展过程。     

纤维连接蛋白及其受体在免疫性心肌炎小鼠心肌的表达

目的观察纤维连接蛋白（FN）及其受体CD29在实验性自身免疫性心肌炎（EAM）中的表达情况。方法人工合成心肌肌球蛋白致病性抗原表位多肽,与弗氏完全佐剂（CFA）混合,在1d和8d免疫实验组小鼠（多肽剂量:100μg/只）,诱发EAM;对照组则给予PBS与CFA混合液。分别于21d及75d,检测心肌炎症评分、胶原容积分数（CVF）、Ⅲ型胶原（COLⅢ）mRNA的表达、FN及CD29的表达。结果21d时,实验组小鼠心肌炎性浸润明显,间质出现少量胶原沉积,COLⅢmRNA、FN及CD29的表达均显著高于对照组（均P<0.01）。至75d时,实验组小鼠心肌炎性浸润显著减少,间质胶原沉积更加明显,COLⅢmRNA的表达进一步上调（P<0.05）,FN的表达有所下降,CD29的表达则显著降低（P<0.01）,但仍显著高于对照组（P<0.01）。结论在EAM时,FN及其受体在心肌的表达上调,可能参与了自身免疫性炎症损伤、组织修复及纤维化改变过程,从而促进心肌炎向心肌病的转化。     

选择性β1受体阻滞剂对高血压合并糖尿病患者糖代谢的影响

目的系统评价高选择性β1受体阻滞剂（美托洛尔、阿替洛尔、比索洛尔）对原发性高血压合并2型糖尿病患者糖代谢的影响。方法计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、Web of Knowledge、中国期刊全文数据库、万方数据库。检索时限均为建库至2013年7月。收集高选择性β1受体阻滞剂治疗高血压合并2型糖尿病患者糖代谢影响的随机对照试验（RCT）。由两位研究者按照纳入与排除标准独立对文献进行筛选、质量评价及数据提取,采用RevMan 5.0软件进行meta分析。结果共纳入相关文献9篇,其中英文文献8篇,中文文献1篇。meta分析结果显示,与对照组相比,高选择性β1受体阻滞剂组的空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbA1c）等有统计学意义上的升高;而空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、体重、C反应蛋白等相关指标,无统计学差异。结论高选择性β1受体阻滞剂在治疗原发性高血压合并2型糖尿病患者时,会导致患者血糖升高,糖耐量降低,但尚未见胰岛素抵抗发生。     

黄芪注射液治疗扩张型心肌病疗效的系统评价

目的评价中药黄芪注射液治疗扩张型心肌病的疗效。方法计算机检索PubMed(1966～2011年1月)、Co-chrane图书馆2011年第1期、中国期刊全文数据库(1979～2010年)、中国医学生物文献光盘数据库。按纳入、排除标准纳入合格的随机对照研究并对其方法学质量进行评价后,采用RevMan 5.0.25软件进行Meta分析。结果共纳入5篇研究,总计353例患者。Meta分析结果表明黄芪注射液+西医基础治疗在改善扩张型心肌病患者的症状、体征、心电图与心功能异常以及实验室各项指标等方面,优于单纯的西医基础治疗,其OR(95%CI)为4.50(2.33～8.70)。结论黄芪注射液作为西医基础治疗的辅助药物,在改善扩张型心肌病患者的症状、体征、心电图与心功能异常以及实验室各项指标等方面优于单纯的西医基础治疗。     

早期生长应答因子-1在压力超负荷诱导的心肌肥厚及纤维化中的作用

目的通过早期生长应答因子-1基因敲除(EGR-1-/-)小鼠研究其在压力超负荷诱导的心肌肥厚及心肌纤维化中的作用。方法将20只EGR-1-/-小鼠和20只EGR-1野生型(EGR-1+/+)小鼠分别随机分为模型组和假手术组(n=10),通过主动脉缩窄术建立小鼠心肌肥厚模型,运用超声检测评价手术4周后小鼠心功能,组织病理学方法评价心肌肥厚及纤维化程度,实时定量聚合酶链式反应在mRNA水平检测心肌肥厚标志物心钠肽、脑钠肽及心肌纤维化标志物Ⅰ、Ⅲ型胶原。结果主动脉缩窄术后4周,EGR-1-/-模型组与EGR-1+/+模型组相比,EGR-1-/-模型组小鼠心功能有关指标得到明显改善(P<0.05,n=10),且心肌肥厚及纤维化有关指标显著降低(P<0.05,n=10)。结论 EGR-1基因敲除后能显著降低心肌肥厚及纤维化的程度。