创建健康促进医院的实践与思考

《上海市预防和控制慢性非传染性疾病中长期规划》要求到2005年全市50％的医疗机构达到健康促进医院标准，2010年全市所有医疗机构达到健康促进医院的标准。因此创建健康促进医院势在必行。     

荧光标记肿瘤转移体内模型的建立

目的 建立一种带荧光标记的肿瘤转移模型并探讨其应用价值.方法 人胃癌MGC-803细胞和小鼠宫颈癌U14细胞进行体外传代培养,转染pEGFP-N1质粒,24h检测转染效率,用无限稀释法筛选稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的单克隆细胞株MGC-803-GFP和U14-GFP.分别体内移植于BALB/c-nn裸鼠和C57BL/6J小鼠,观察成瘤潜伏期,绘制体内生长曲线,利用活体荧光成像系统活体连续观察GFP在体内的表达,观察肺部和淋巴结的转移情况,计算转移率.免疫组织化学检测与转移相关的分子CD44和E-cadherin在移植瘤中的表达.结果 MGC-803细胞和U14细胞pEGFP-N1转染24 h后的转染效率分别为30%和60%.获得了GFP(+)的单克隆MGC-803-GFP细胞株和U14-GFP细胞株.MGC-803-GFP在BALB/c-nu裸鼠和U14-GFP在C57BL/6J小鼠移植成瘤的潜伏期分别是3～5 d和2～4 d,成瘤率均为100%.利用活体荧光成像系统连续观察,可以清楚直观地观察表达GFP的MGC-803-GFP移植瘤在体内的生长,接种后第60天处死全部荷瘤鼠,解剖后仅有1只可见同侧腋窝下淋巴结的转移.接种U14-GFP后,分别在第28、37和52天观察了荷瘤小鼠肿瘤转移的发展过程.在U14-GFP原发瘤体积达到≥5 cm3时,肺部和淋巴结转移率分别为67%和100%.在MGC-803-GFP和U14-GFP的移植瘤中都可以检测到CD44的表达,而无E-cadherin的表达.结论 成功建立了表达绿色荧光蛋白单克隆细胞株MGC-803-GFP和U14-GFP,体内移植建立了荧光标记的肿瘤转移模型.该模型可用于可视化肿瘤体内的研究.     

囊泡运输相关蛋白VAP-33在小鼠树突状细胞肉瘤细胞株DCS细胞中的表达及其功能

目的 探讨囊泡运输相关蛋白VAP-33在小鼠树突状细胞肉瘤细胞株DCS细胞中的表达及其功能.方法 用1%TritonX-114提取DCS细胞膜蛋白,用已制备的DCS细胞多克隆抗体(pAb)及蛋白A+G琼脂糖进行免疫沉淀,所得样品利用质谱技术进行分析,检测到VAP-33蛋白在DCS细胞中有表达,继而DCS细胞经不同量抗原(150、850、1500μl)刺激24、48、72 h后观察细胞形态及吞噬能力的变化,同时通过间接免疫荧光、共聚焦显微镜、Western blot等方法检测了VAP-33的分布及表达变化.0.5 mol/L胰岛素刺激DCS细胞20 min后,采用Western blot检测DCS细胞全蛋白、胞质蛋白、膜蛋白中VAP-33、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)的表达变化,共聚焦方法观察胰岛素刺激前后VAP-33和GLUT-4在DCS细胞中的表达及定位变化.实验中均以常规培养的DCS细胞作为对照.结果 VAP-33蛋白主要表达在DCS细胞膜和胞质中;在外来抗原刺激下,随抗原量的增加及作用时间的延长DCS细胞趋向成熟树突状细胞,VAP-33表达量降低,对辣根过氧化物酶的吞噬能力增强.胰岛素刺激后,VAP-33与GLUT-4有共定位.结论 VAP-33在树突状细胞来源的肿瘤细胞中表达,与树突状细胞的抗原加工有关,在葡萄糖的转运中起一定作用.     

肿瘤干细胞特性研究进展

早在1855年,Rudolph Virchow就已经注意到肿瘤形成和组织发育之间的关联性,并根据发育中的胚胎和畸胎瘤形态学上的相似性提出了肿瘤发生的“残留胚胎组织”学说——认为肿瘤来源于成体组织中残留的休眠胚胎组织的激活。随着研究的深入,人们发现干细胞和肿瘤细胞之间存在着很多相似之处：他们都有无限增殖的能力,可以自我更新;都具有特异性分化的能力,可以产生表型和生物学特性不同的子代细胞;     

ISO9001标准在社区卫生质量管理中的应用

随着社会经济发展和医疗卫生事业改革的不断深入，社区卫生服务的内涵与功能发生了新的变化，对社区卫生的发展提出了挑战和机遇。社区卫生原有的管理模式已远远不能适应需要。为了不断提高社区居民的满意度，提高社区卫生服务中心的综合实力，提高服务质量和工作效率，建立规范化、系统化、可操作性的质量管理体系，我中心在区卫生局的重视和支持下，自2005年12月引入ISO9001质量管理体系认证工作。     

囊泡膜蛋白相关蛋白VAP33对小鼠树突状细胞肉瘤恶性行为的抑制作用

  目的  探讨囊泡膜蛋白相关蛋白（VAP33）过表达对小鼠树突状肉瘤细胞DG6增殖及侵袭转移的影响。  方法  反转录获得VAP33 cDNA，利用基因重组技术构建VAP33-GFP融合基因慢病毒表达载体（pWPXL-VAP33），在脂质体Lipofectamine 2000介导下与辅助质粒（PsPAX₂、MD₂G）共转染293T细胞包装生产重组慢病毒。取病毒上清感染内源性低表达VAP33的DG6细胞，通过荧光显微镜挑选、Western-blot鉴定获得VAP33稳定过表达的阳性单克隆细胞株（DG6-VAP33）。MTT法检测细胞增殖情况，Transwell和集落形成检测肿瘤细胞体外侵袭、成瘤能力。同时建立小鼠皮下移植瘤模型，连续6周观察VAP33过表达对活体内肿瘤细胞生长、成瘤、转移能力的影响。  结果  重组慢病毒表达载体pWPXL-VAP33构建成功，包装滴度达6×107IU/mL，感染DG6细胞后筛选到VAP33稳定过表达细胞株（DG6-VAP33）。与DG6细胞相比，DG6-VAP33细胞体外增殖减慢，每孔集落数分别为（52±8）个和（36±5）个（P < 0.05）；Transwell方法观察到，DG6-VAP33细胞体外侵袭能力显著下降，穿膜细胞数（14±11）个少于DG6（36±17）个（P < 0.01）。通过6周的连续观察，DG6-VAP33组肿瘤生长速度显著慢于DG6组，成瘤率50%（5/10）、肺转移率（0）也明显降低（DG6组成瘤率100%、肺转移率80%）。  结论  VAP33过表达可抑制肿瘤细胞的增殖、成瘤及侵袭转移能力。      

外源EGFP表达对肿瘤细胞体外生物学行为的影响

 摘要：目的 探讨常用的可视化细胞标记技术--外源EGFP表达对肿瘤细胞生物学行为的影响。 方法 选择不同的携带EGFP的载体,利用脂质体转染或慢病毒感染技术,在不同肿瘤细胞系中强制表达外源EGFP,筛选稳定表达外源EGFP的细胞系,MTT法检测细胞体外增殖能力;细胞分析计数仪（CasyTT型）检测细胞大小的分布状况; Transwell体外迁移实验检测细胞体外侵袭能力。结果 成功建立了稳定表达外源EGFP的人结肠癌细胞系HCT116-GFP、HCT116-EGFP、COLO 320DM-EGFP和小鼠树突状细胞肉瘤细胞系DG6-EGFP。 外源EGFP表达后,HCT116-GFP细胞的增殖能力没有明显改变;而HCT116-EGFP细胞、COLO320DM-EGFP细胞和DG6-EGFP细胞的体外增殖能力明显降低。外源EGFP表达后,HCT116-EGFP细胞体积增大：平均直径分别为14.53 μm（HCT116）和18.28 μm（HCT116-EGFP）;DG6-EGFP细胞体积无明显改变,平均直径分别为：16.43 μm（DG6）和16.58 μm（DG6-EGFP）。外源EGFP表达后,HCT116-EGFP细胞的体外侵袭能力明显降低,DG6-EGFP细胞体外侵袭能力无明显改变。结论 外源EGFP可视化标记细胞后,可能会影响肿瘤细胞的生物特性,利用这些模型进行科研时,需注意对相关指标的影响。     

靶向HER2嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及其特异性杀伤肿瘤的作用北大核心CSCD

目的以靶向HER2的人源化单克隆抗体H1．2scFv为基础构建第三代嵌合抗原受体（CAR）,并探讨CAR修饰的T淋巴细胞（CAR—T）对HER2高表达肿瘤的杀伤作用。方法运用分子克隆方法将CAR的表达框和H1．2scFv装人慢病毒表达载体,利用慢病毒载体将H1—2CAR基因转导至T淋巴细胞构建CAR．T细胞,通过酶联免疫吸附测定检测细胞因子白细胞介素2的表达,通过LDH释放实验检测CAR—T细胞杀伤肿瘤细胞的效率。最后用NOD／SCID小鼠移植瘤模型来检测CAR．T细胞在体内杀伤肿瘤细胞的能力。结果成功构建了靶向HER2的第三代嵌合抗原受体H1—2CAR表达载体,该载体转染的H1—2CAR—T细胞能与HER2’的肿瘤细胞结合并提高了细胞因子白细胞介素2的释放。在本研究中Hi一2CAR—T细胞与HER2高表达的肿瘤细胞相互作用时白细胞介素2分泌量可达到1000¨g／L以上,而外周血单个核细胞与肿瘤细胞相互作用时基本上不分泌白细胞介素2。在体外肿瘤细胞培养体系中,H1—2CAR—T细胞对HER2高表达肿瘤细胞的杀伤率明显高于HER2低／不表达的细胞。当效靶比为20：1时,H1—2CAR—T细胞对HER2高表达的乳腺癌细胞SK—BR-3的杀伤率可以达到（90．1±2．8）％．而H1．2CAR—T对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA—MB-231的杀伤率只有（13．5±4．7）％。在NOD／SCID小鼠体内,CAR．T细胞治疗组乳腺癌移植瘤的生长速度减慢,实验结束时H1-2CAR—T细胞治疗组肿瘤质量平均为（0．74-0．1）g,未转染T细胞治疗组为（1．2±0．2）g,PBS组为（1．2±0．2）g。H1—2CAR—T治疗组与未转染T细胞治疗组相比较有明显差异（P〈0．05）,而未转染T细胞治疗组与PBS治疗组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论靶向HER2的H1．2CAR．T细胞能特异性杀伤HER2高表达的肿瘤细胞,为CAR—T靶向治疗HER2’的肿瘤提供了研究基础。     

社区全科医学教学的实践与思考

本文从利用整合社区卫生资源优势,探索构建全科社区教学框架和评估体系,阐述了全科医疗模式在社区实习教学中的实践,初步积累了经验和体会,总结了社区全科教学中存在的不足并提出了相应的对策。     

临床医学本科生全科医学社区实习的实践

20世纪80年代中后期，我国开始从国外系统地引进全科医学理论，全科医学研究也在全国迅速开展。然而，对于培养全科医学人才尚缺乏经验，至少没有一种统一的模式可循。2002年四平社区卫生服务中心成为上海交通大学临床医学院社区全科医师规范化培训基地，从2003年起承担了全科医学社区培训任务，2006年通过了市卫生局组织的评估和认定。