浙江省丽水市狂犬病新发疫区病毒检测及在防制中的应用

目的了解狂犬病毒在疫区犬间的流行状况。方法收集浙江省丽水市198份狂犬病新发疫区犬脑组织标本,用直接免疫荧光试验（DFA）特异性检测狂犬病毒抗原和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）特异性检测狂犬病毒核酸,确定犬感染狂犬病毒状况。 结果犬脑组织DFA和RT-PCR平行检测阳性的标本13份,阳性率为6.57%（13/198）,其中松阳县9份,占采集标本的69.23%（9/13）,具有攻击人/犬史或者被犬攻击史的疑似狂犬病犬标本10份,占采集标本的76.92%（10/13）。 结论免疫学和分子生物学两种方法平行进行犬狂犬病毒的实验室检测,可以更准确地进行狂犬病的实验室诊断。市民暴露于犬后要及时到所在地狂犬病暴露门诊严格按照国家相关标准及规范正确处理伤口并注射狂犬病疫苗及抗血清或人源免疫球蛋白。建议相关部门加强犬的管理,同时对犬进行全面的狂犬病疫苗免疫接种。     

浙江省丽水市监测点鼠类恙虫病东方体的检测

目的 对丽水市莲都区鼠肝脾组织进行恙虫病东方体(Ot)检测,了解该区鼠恙虫病感染情况。 方法 收集丽水市鼠的肝脾标本,采用巢式PCR法检测56 kD蛋白基因,确定阳性标本。 结果 在丽水莲都区捕获鼠132只,在黑线姬鼠中检测到Ot阳性标本3份,在小家鼠中检测到Ot阳性标本1份,鼠Ot总阳性率为3.03%(4/132)。 结论 丽水市鼠中存在Ot自然感染,且宿主动物呈多样性,为深入进行恙虫病疫源地的调查奠定了基础。     

浙江省丽水山区134份犬脑组织狂犬病病毒抗原检测

目的对浙江省丽水市山区犬脑组织标本进行狂犬病病毒抗原检测,了解犬狂犬病毒感染状况。方法收集丽水市山区狂犬病和疑似狂犬病犬以及外观健康犬脑组织标本134份,用直接免疫荧光试验（DFA）检测狂犬病病毒抗原,确定阳性标本。结果134份犬脑组织标本印片DFA检测9份为阳性,占所检标本的 6.72%（9/134）,其中外观异常并攻击人/犬导致人或犬间疫情的犬脑组织标本8份,均阳性;外观正常犬脑组织标本共126份,1份阳性,阳性率0.79%（1/126）。结论在丽水市首次用免疫学方法进行狂犬病病毒的实验室检测,狂犬病病毒在丽水山区狂犬病疫区的犬间相互传播,犬狂犬病疫情存在扩散的现象。     

浙江省山区狂犬病新宿主动物调查

目的 了解浙江省狂犬病疫区野生宿主动物种类及感染状况.方法 采集浙江省丽水市和杭州市淳安县猫、鼬獾、黑线姬鼠、跳麂、野猪脑组织标本共160份,分别取大脑、中脑、小脑和海马回部位组织,用直接免疫荧光试验(DFA)检测狂犬病病毒特异性抗原和RT-PCR方法检测狂犬病病毒特异性核酸,确定阳性标本.结果 脑组织抗原印片经特异性抗狂犬病病毒核蛋白(NV)单克隆抗体免疫荧光染色后在荧光显微镜下可见大量的苹果绿荧光颗粒;狂犬病病毒NP特异性目的基因Nested-PCR得到与预期结果大小一致的扩增产物,两种方法 同时检出狂犬病病毒阳性的野生宿主动物脑组织标本5份,其中鼬獾脑组织阳性标本4份,阳性率为8.33%(4/48);黑线姬鼠脑组织阳性标本1份,阳性率为1.75%(1/57);猫、跳麂、野猪脑组织未检出阳性标本.结论 在浙江省生物多样性的山区检测出狂犬病病毒感染阳性的野生动物鼬獾和野鼠,从病原学角度说明鼬獾和野鼠可能是人间狂犬病的传染来源和狂犬病病毒的宿主动物.     

浙江省野生动物鼬獾狂犬病毒全基因组序列测定分析

目的 测定浙江省分离的2株野生动物鼬獾狂犬病毒株全基因组序列,从分子水平进行遗传变异特征分析,了解狂犬病毒在浙江省的流行和变异情况.方法 RT-PCR测定鼬獾狂犬病毒株全基因组核苷酸序列,并进行基因序列和编码蛋白相似性比较及种系发生分析.结果 测序获得2株鼬獾狂犬病毒全基因组核苷酸序列信息:基因组全长11 923 nts,leader长58 nts,由5个编码区组成:NP(1353 nts)、PP(894 nts)、MP(609 nts)、GP(1575 nts)、LP(6386 nts),N-P-M-G间隔序列长2、5、5 nts;G-L基因间伪基因ψ长423 nts;trailer长70 nts.核酸BLAST及多序列比对显示,浙江省鼬獾狂犬病毒株全基因组序列的组成和结构符合弹状病毒科狂犬病毒属特征;鼬獾病毒株负链RNA基因组5个基因编码氨基酸的长度没有变异,编码区基因没有发生重组,编码蛋白仅表现较少的序列变化,多数只发生碱基的替代;中国病毒株之间特别是同种动物狂犬病毒之间各个基因区域核苷酸与氨基酸序列相似性最高,鼬獾狂犬病毒基因组序列相似性在氨基酸水平明显高于核苷酸水平,蛋白质编码基因的核苷酸变异大多属于同义突变.结论 鼬獾狂犬病毒与研究中选择的代表性疫苗株或者街毒株的变异位点和变异类型相似,多序列相似性比较和N基因种系发生分析显示,鼬獾狂犬病毒均属于基因1型,具有中国地域性特点,2株野生动物鼬獾狂犬病毒极有可能是存在于自然界中固有的街毒株.     

15个VNTR位点用于87株丽水市结核分枝杆菌分离株的基因分型研究

目的:选取2008年-2010年间丽水市结核分枝杆菌临床分离株,通过多位点可变数目串联重复序列分型,了解丽水市结核分枝杆菌流行菌株基因分型情况。方法:对临床分离株进行常规培养,收集菌体,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)分别对15个VNTR位点进行检测分析,基因聚类分析采用BioN-umerics软件。结果:经聚类分析,87株结核分枝杆菌分为4个基因群(I群、Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅳ群)69个基因型。其中Ⅳ群占74.7%,含49个基因型,I群占9.2%,含8个基因型,Ⅱ群占8%,含7个基因型,Ⅲ群占5.75%。含5个基因型。结论:丽水市的结核分枝杆菌存在基因多态性,其主要流行型为Ⅳ型。     

浙江省丽水市鼠狂犬病感染率的调查研究

目的对丽水市狂犬病新发疫区的鼠脑组织进行狂犬病毒检测,了解鼠中狂犬病毒的感染情况,为防制该病提供科学依据。方法收集丽水市狂犬病疫区鼠的脑组织样品,采用直接免疫荧光方法检测鼠脑组织狂犬病毒特异性抗原,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒特异性核酸,确定阳性样品。结果在丽水地区捕获鼠165只,在黑线姬鼠中检测到狂犬病毒阳性样品1份,鼠狂犬病毒阳性率为0.61%(1/165)。结论疫区鼠中存在狂犬病毒,狂犬病疫情存在扩散的现象。     

浙江鼬獾狂犬病毒F01株P和M基因序列测定分析

狂犬病毒(mbies virus,RABV)广泛存在于多种哺乳动物体内,并在宿主动物之间相互传播.鼬獾又名白面鼬,野生小型貂科动物,杂食性,浙江全境均有分布.