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目的通过噬菌体展示技术构建人源抗恶性疟原虫单链抗体库(ScFv),从中筛选出高亲和力的抗体基因片段,为进一步单链抗体表达打下基础。方法收集患者新鲜外周血,进行淋巴细胞分离和总RNA的提取,提取总RNA经RT-PCR扩增出人源抗体重链和轻链抗体库,采用用重叠延伸拼接法将VH与VL以Linker相连组装成单链抗体基因(ScFv),将ScFv基因片段连接至载体pCANTAB5E,转化大肠杆菌TG 1感受态细胞,构建的鼠源性抗恶性疟原虫天然噬菌体抗体库。结果从20个噬菌体克隆中筛选到15个具有弓形虫可溶性抗原结合活性的阳性克隆。结论从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗恶性疟原虫单链抗体的策略是可行的。 相似文献
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目的为了更准确地对蛔虫感染进行检测。方法术研究以蛔虫虫卵蛋白为可溶性抗原,建立了间接血凝试验(1HA)、间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)方法,检测100份来自农村小学生的血清样本。结果间接ELISA阳性检出率为10.00%(10/100),IHA阳性检出率为7.0%(7/100),AGP阳性检Ⅲ率为4.00%(4/100)。结论间接ELISA具有灵敏度高,特异性强的优点,可用于蛔虫病的诊断。 相似文献
3.
目的 寻找能更准确地对蛔虫感染进行检测的方法。方法 以蛔虫虫卵可溶性蛋白为抗原,建立检测蛔虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果 ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为1 μg/mL,血清最佳稀释度为1: 80,酶标二抗的最佳工作浓度为1: 8 000。对100份人血清样本采用本方法进行检测,其阳性检出率为10.0 %;血清样本对应粪便样本进行现场粪检虫卵法确定阳性率为2.0 %。结论 本研究建立了稳定而特异的抗蛔虫体IgG 的间接ELISA检测方法,可用于蛔虫感染的临床监测。 相似文献
4.
目的 通过噬菌体展示技术构建抗类风湿人源单链抗体库,为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法提取患者外周淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以人源免疫球蛋白H链和L链可变区的扩增引物,分别扩增出H链和L链可变区基因。采用SOE—PCR法将VH和比片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库。结果初级库库容量为3×10^6,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.2×10^6的次级抗体库。结论本研究成功构建类风湿人源单链抗体库,拟为类风湿病的预防、诊断、治疗奠定基础。 相似文献
5.
目的 通过GC-TOF-MS代谢组学探讨不同剂量的黄连解毒汤对SD大鼠粪便代谢组的影响,进而为黄连解毒汤的作用机制提供参考。方法 SD大鼠45只适应性喂养7天后,随机分为5组:黄连解毒汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、抗生素组和空白组,每组9只。中药干预组不同剂量黄连解毒汤灌胃,1 mL/次,2次/天,连续给药21天;抗生素组,1 mL/次,2次/天;空白组生理盐水灌胃,1 mL/次,2次/天,连续给药21天;末次给药后,禁食禁水12 h,处死并收集大鼠粪便。采用气相色谱-飞行时间质谱(Gas Chromatography Tandem Time-of Flight Mass Spectrometry,GC-TOF-MS)检测各组大鼠粪便,运用多元分析OPLS以及单变量统计学方法筛选差异代谢物,通过MetaboAnalyst平台进行代谢通路分析。结果 对于粪便中的内源性代谢物小分子,高剂量组的黄连解毒汤影响的主要有:核糖、硫酸、棕榈酸、花生酸、茜素等;中剂量组的黄连解毒汤影响的主要有:乌头酸、胆固醇、乳酸、棕榈油酸、茜素等;低剂量组的黄连解毒汤影响的主要有:硫酸、棉子糖;氨苄西林钠影响的主要有:蛋氨酸1、麦角固醇、正亮氨酸1、棕榈酸、硫酸、乳酸等;不同剂量的黄连解毒汤和氨苄西林钠都能够影响到半乳糖代谢及硫代谢通路。结论 黄连解毒汤可改善糖尿病和心脑血管疾病相关的代谢物小分子,不同剂量的黄连解毒汤对粪便代谢的影响不同,其中中剂量的影响最为广泛。 相似文献
6.
目的 综述白细胞介素-4(IL-4)及其受体(IL-4R)研究现状。方法 对有关文献进行查阅、整理和归纳。结果 IL-4及其受体在检测和防治哮喘、类风湿性关节炎和肿瘤等相关疾病具有重要的作用。结论 IL-4细胞因子及其受体在检测和防治相关疾病有着极为广阔的应用前景。 相似文献
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目的探索重组IL-4R蛋白对过敏性哮喘动物模型的干预作用。方法选择6周龄SD大鼠60只,采用安全随机分组法分成哮喘模型组、IL-4R组、布地奈德组和对照组,每组15只。哮喘模型组在腹部选取3处于皮下注射10%鸡卵清白蛋白(OVA)混合液1ml(OVA100mg、氢氧化铝100mg及灭活的百日咳杆菌5×109个)进行致敏,1周后用上述同样药物再进行致敏,第2次致敏1周后将大鼠分别放入不完全封闭的箱中,用5%OVA与0.9%氯化钠混合溶液,连续10d超声雾化激发30min。IL-4R组和布地奈德组同法造模,但每次雾化激发前30min,IL-4R组腹腔注射重组IL-4R蛋白稀释液(400滋g/d)。布地奈德组腹腔注射布地奈德稀释液(400滋g/d),对照组用0.9%氯化钠溶液连续10d超声雾化激发30min。取4组大鼠肺组织作HE染色的光镜病理切片,观察肺组织病理变化。建立间接ELISA方法,检测实验中4组大鼠肺泡灌洗液中的IL-4和IFN-γ的含量。结果哮喘模型组大鼠肺组织有大量嗜酸性粒细胞浸润,对照组大鼠肺组织几乎无嗜酸性粒细胞浸润,IL-4R组和布地奈德组大鼠肺组织嗜酸性粒细胞浸润明显少于哮喘模型组。IL-4R组和布地奈德组肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ的含量明显高于哮喘模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论研究结果提示IL-4R蛋白对过敏性哮喘有良好的干预作用。 相似文献
8.
总结近年来国内外有关杜仲的研究情况,包括其在降压、调节血脂、对免疫系统的作用、抗衰老作用和抗肿瘤作用等方面,为杜仲的进一步开发利用提供参考。 相似文献
9.
目的:基于ERIC-PCR技术分析黄连解毒汤对2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)大鼠肠道菌群结构及DNA同源性的影响。方法:从36只SD大鼠中随机选取6只作为对照组,其余大鼠给予高脂饲料联合1%链脲佐菌素(30 mg·kg-1)建立糖尿病模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄连解毒汤高剂量组(6.25 g·kg-1)、黄连解毒汤中剂量组(3.13 g·kg-1)、黄连解毒汤低剂量组(1.56 g·kg-1)及二甲双胍组(100 mg·kg-1),每组各6只。各药物组按照相应剂量灌胃给药,对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续21 d。第7天、第14天及第21天灌胃后,收集大鼠粪便,提取肠道菌群DNA。利用ERIC-PCR技术和Sanger测序检测大鼠肠道菌群结构与DNA同源性。结果:灌胃第7天,对照组条带较多集中在100~750 bp;与对照组比较,模型组条带在1 000~2 000 bp的亮度增强,在300~750 bp的亮度减弱;与模... 相似文献
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