猫疱疹病毒Ⅰ型实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用

目的建立猫疱疹病毒I型(FHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和Taq Man探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立FHV-1实时荧光定量PCR方法,并对方法的线性、特异性、敏感性、及稳定性等进行测定。用建立的方法对48份猫临床样品进行检测。结果成功建立FHV-1实时荧光定量PCR方法;该方法的线性范围为(1×102~1×109)copies/μL,与单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、犬疱疹病毒(CHV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猫细小病毒(FPV)均无交叉反应,检测灵敏度可达到10 copies/μL。批内变异系数均小于5%。应用该方法从48份猫临床样本中检测出33份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点,适合于临床FHV-1的快速定量检测。     

基于足底压力分布的糖尿病患者足部护理特点

目的 探索匀速直线平地行走状态下糖尿病周围神经病变患者足底压力的特点,探讨糖尿病患者足部护理特点。方法 将糖尿病患者分为无神经病变组及合并神经病变组,入组患者在恒定速率(1km/h)及斜率(0°)的跑步机上行走,选取行走过程中的6次步态周期。通过F-Scan分析系统软件对6次步态取足底压力参数的平均值。根据糖尿病周围神经病变患者的足底压力特点,将足底重新分为前足、中足、足跟及外侧足、内侧足。结果 二组患者在一般资料上无明显差异,周围神经病变患者行走中与地面接触时间显著大于无神经病变组(分别(829.7±85.3)ms和(768.2±69.1)ms,P=0.002)。周围神经病变患者中足/足跟应力、外侧足/内侧足比值均显著升高。特别是外侧足与内侧足应力比值在神经病变组中上升最为明显(0.74±0.21 vs. 0.91±0.30,P=0.009)。结论 糖尿病周围神经病变患者在平地匀速行走中足底压力向外侧足倾斜,外侧应力与内侧应力的比值较能反应周围神经病变早期足底压力分布的异常,从而应加强糖尿病患者的足部保护,减轻足底压力,早期有效预防糖尿病足的发生。     

树鼩腺病毒（TAV）PCR方法的建立及初步应用

目的建立树鼩腺病毒(TAV)PCR检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI公布的TAV基因组序列,选择19418-19917区域人工合成一段DNA序列并转入质粒中,作为阳性标准质粒。设计1对特异性引物建立TAV PCR检测方法,考察其特异性和灵敏度。应用该PCR方法对60份树鼩血DNA及56份树鼩粪便DNA进行检测。结果所建立的PCR检测方法经特异性和灵敏度测定,最低可检测13.5 x10-7μg/m L,与其他腺病毒无交叉,特异性好,灵敏度较高。60份树鼩血DNA检测均为阴性,56份树鼩粪便DNA检测有24份阳性,通过测序证实树鼩粪便中TAV感染率为42.9%,与扩增结果一致。结论建立的树鼩腺病毒PCR检测方法特异性强,灵敏度高,可用于树鼩腺病毒的常规检测中。     

鸡胚致死孤儿病毒（CELO）和鸡减蛋综合症病毒（EDS） 多重PCR检测方法的建立及初步应用

【摘要】目的 建立鸡胚致死孤儿病毒（CELO）和鸡减蛋综合症病毒（EDS）的多重PCR检测方法并进行初步应用。方法 参照GenBank提供的基因序列,设计了2对特异性引物分别扩增CELO长纤突蛋白和EDS六邻体蛋白的基因序列,建立检测CELO和EDS的多重PCR方法,考察该方法的特异性和敏感性,并使用该方法检测流感疫苗主种子批病毒是否存在外源性禽腺病毒的污染。结果 该多重PCR方法成功扩增得到了两条特异性目的条带,并经测序验证。该方法特异性好,灵敏度显示核酸最低检测量可达10-4ug/ml。使用该方法检测12批次流感疫苗主种子批病毒,外源性禽腺病毒的检测结果均为阴性。结论 成功建立鸡胚致死孤儿病毒和鸡减蛋综合症病毒的多重PCR检测方法,灵敏度高,特异性好。在流感疫苗主种子批病毒的外源性禽腺病毒的检测中具有很高的使用价值和应用前景。