人resistin基因原核表达载体构建和表达

[目的]构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础.[方法]酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒.重组表达质粒转化大肠杆菌JM109,经1 mmol/LIPTG在32℃诱导表达2 h,裂解细菌,进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达.[结果]RT-PCR扩增产物分子大小为327 bp,序列分析表明为人resistin基因完整编码区.PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后,从细菌质粒中酶切回收了目的片段.重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327 bp、4 980 bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5 kD的融合蛋白.[结论]成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打下了实验基础.     

中央沟上段及其邻近沟回的体表定位及其临床意义

目的：探讨在MRI和CT图像上观测中央沟上段及其邻近沟回的特征，进行精确体表定位。方法：30例成人头颅和扫描无颅恼器质性病变10份CT，100份MRI片，在头颅正中欠状面上观测头颅外形和平行于耳眦线平而以上100mm内的前后正巾线的中点及中垂线。在横位图像上观测中央沟上段及其邻近沟回的特征和二维坐标参数。结果：成人头颅近似标准球形。住82％头颅卜平行耳眦线平面的正中点的的投影在垂直耳眦线过外耳道的直线卜，另外18％偏离基线面中垂线小于7mm。上段中央沟在耳眦线平面上70～95mm。84％额上沟与中央前沟相交呈倒T字征，交点住前后中线旁24～27mm，耳眦线平面的中垂线前2～6mm。中央沟上段起点前后中线旁1～15mm，耳眦线平而的中垂线后12～28mm，手结征98％。中央后沟在中央沟之后8～13mm与其平行。结论：每人上段中央沟及其邻近沟回的特征能被MRI精确体表定位。     

CS-3000 plus血细胞分离机在治疗性血液成分单采中的临床应用

【目的】观察应用CS-3000plus血细胞分离机进行治疗性血液成分单采的临床疗效，分析影响血液成分单采效果的相关因素。【方法】对87例患者应用CS-3000plus血细胞分离机进行161次治疗性血液成分单采，分析临床效果和实验室指标的改善情况。【结果】应用CS-3000plus血细胞分离机进行血浆置换后，71．43％患者临床症状、体征或者实验室指标取得明显改善。相关分析提示，进行治疗性血细胞成分单采患者的白细胞、血小板、红细胞、血红蛋白、红细胞比容下降值与采前相应初始值均呈正相关（P〈0．05）。白细胞单采术的患者白细胞计数下降值与处理全血量呈正相关（P〈0．05），在处理血量达到5000～7000ml时，血小板单采术患者血小板计数下降值与处理全血量无明显相关性（P〉0．05）。当处理全血量达到500～800ml时，红细胞单采术患者红细胞、血红蛋白、红细胞比容下降值与处理全血量无明显相关性（P〉0．05）。【结论】应用CS-3000plus血细胞分离机进行治疗性血液成分单采对迅速缓解临床症状，减少并发症的发生和提高临床药物治疗效果均有较大意义。合理设定全血处理量，调整采集相关参数，有助于采集的顺利进行和采集效果的进一步提高。     

硫酸镁联合亚低温治疗对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的　探讨硫酸镁对SD大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用。方法　将 4 0只大鼠随机分成模型对照组、硫酸镁治疗组、亚低温治疗组、硫酸镁联合亚低温治疗组。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型。通过计算大鼠神经功能缺陷评分 ,测量脑梗死体积 ,观察神经元超微结构改变 ,评定硫酸镁联合亚低温治疗作用。结果各治疗组大鼠神经功能评分及脑梗死体积均显著低于对照组 (P <0 0 5 ) ,联合治疗组大鼠明显低于对照组 (P<0 0 1) ;联合治疗组神经元超微结构改变轻微。结论　硫酸镁联合亚低温治疗对大鼠局灶脑缺血有明显保护作用     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制NF-κB活化对HL-60细胞的化疗增敏作用

目的：探讨化疗诱导性核因子κB的活化机制及抗氧化抑制NF-κB活化对白血病细胞凋亡及化疗敏感性的影响。 方法： 采用间接免疫荧光方法和凝胶迁移率变动试验（EMSA）观察不同浓度的化疗药物单独或与抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）联合作用于HL-60细胞后NF-κB的活化反应；运用流式细胞术和MTT试验比较NF-κB活化及活化抑制对HL-60细胞凋亡及化疗敏感性的影响。 结果： EMSA试验表明，柔红霉素（DNR）和足叶乙甙（VP-16）均呈剂量依赖性诱导NF-κB活化；RelA亚基位于细胞核进一步证实了NF-κB活化。PDTC呈剂量依赖性抑制诱导性NF-κB活化，当其浓度达到100 μmol/L时，NF-κB活化被完全抑制。比较PDTC干预前后细胞的凋亡反应，发现2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L VP-16诱导的细胞凋亡指数分别由(5.34±0.62)%、(10.16±0.42)%、(17.32±1.15)%增至(8.97±0.81)%、(16.01±1.06)%、(22.96±1.33%)，且PDTC显著增强DNR及VP-16对HL-60细胞的生长抑制率(P<0.01)。 结论： 反应性氧中间产物介导化疗诱导性NF-κB活化，抗氧化抑制NF-κB活化可以增进HL-60细胞凋亡及化疗敏感性。     

胆碱酯酶监测在抢救有机磷农药中毒中的临床意义

目的 探讨胆碱酯酶活性在决定有机磷农药中毒抢救中氯磷定、阿托品的用量,停药时间及对患者预后判断的作用。方法 将口服有机磷农药中毒抢救传统治疗组列为对照组（３２例）,将口服有机磷农药中毒采用胆碱酯酶指导氯磷定、阿托品用量及停药列为观察组（５０例）。结果 观察组阿托品用量和氯磷定用量与对照组阿托品用量和氯磷定用量有显著差异（Ｐ〈０．０１）。观察组治愈５０例,治愈率１００％;对照组治愈２８例,治愈率８７     

改革医学物理学教学，培养高素质人才

目前,我国教育从应试教育向素质教育转变,21世纪的大学生应充分受到创新精神和实践能力的培养。从更新教育观念,更新教学体系、内容,运用多媒体教学等方面论述了改革后的医学物理学教学,能更有效地培养高素质人才。     

氯吡格雷联合阿司匹林、溶栓治疗急性ST段抬高型心肌梗死的疗效观察

目的观察常规溶栓联合氯吡格雷治疗对急性ST段抬高型心肌梗死近期心脏事件的影响。方法符合入选条件的患者随机分为常规溶栓治疗组(34例)和氯吡格雷组(36例,在常规溶栓治疗的基础上即刻300mg,随后每日1次75mg,连用7d)。结果7d后氯吡格雷组复合终点(13.90%)与常规治疗组(29.41%)比较差异有统计学意义(P<0.05),而主要的副作用两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论氯吡格雷对急性ST段抬高型心肌梗死患者的近期(7d)心脏事件是安全有效的。     

咳特灵颗粒提取工艺研究

目的优选咳特灵颗粒的提取工艺.方法以干膏得率和芦丁的含量作为指标,考虑不同的煎煮时间、加水量、含醇量,采用正交实验法,确定最佳提取工艺.结果最佳的提取工艺为煎煮时间第1次1.5 h,第2次1.0 h、加溶媒体积14(8 6)倍、含醇量80%.结论该提取工艺为制备咳特灵颗粒的最佳提取工艺.     

KA1表达再分布对神经元兴奋毒性的影响

背景:特异的兴奋性神经递质受体过度活化时便发生细胞的兴奋性中毒,有关NMDA受体和AMPA受体活化致细胞兴奋性中毒死亡通路较为明确,但关于红藻氨酸(Kainate,KA)受体的功能到目前为止仍未明了。目的:探究小鼠海马内注射KA之后KA1受体的再分布状况对中枢神经元兴奋性中毒的影响。方法:成年雄性C57BL6小鼠海马内注射KA或PBS,2h后进行Bederson体征评分、全脑切片免疫组化分析和死亡神经元检测。结果与结论:海马内注射KA2h后,Bederson体征评分表明中枢神经功能出现明显损伤;KA1受体表达的变化主要出现在海马CA1和CA3区,在CA1区的表达上调明显,并开始出现神经元死亡,4~6h后可见大量神经元死亡。结果表明KA促使KA1受体亚单位在海马神经元CA区重新分布,增加神经元对兴奋性氨基酸毒性的敏感性,导致神经细胞死亡,中枢神经功能缺失。