原发性肝癌患者CD8+CD28-和CD8+CD28+细胞亚群的分析

目的研究原发性肝癌(HCC)病人外周血CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子的表达.方法用流式细胞仪对20例原发性肝癌病人的CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子(即CD8+CD28+和CD8+CD28)的表达进行检测.结果HCC病人CD8+细胞百分率升高,CD8+CD28+细胞百分率降低,CD8+CD28细胞百分率升高,与对照组相比具有显著性差异.CD8+CD28+、CD8+CD28-细胞百分率与CD8+T细胞百分率的相关性研究表明,CD8+CD28-细胞数与CD8+T细胞数之间呈正相关.结论HCC病人CD8+细胞升高,CD8+细胞上CD28分子的表达是异常的,即CD8+CD28-细胞数升高,CD8+CD28+细胞数降低;CD8+T细胞的升高是CD8+CD28-细胞亚群升高的结果.     

谷胱甘肽S-转移酶M1基因缺失与子宫内膜异位症易感性的关系

目的探讨谷胱甘肽S-转移酶M1(GSTM1)基因遗传缺失与子宫内膜异位症(内异症)易感性的关系。方法采用PCR技术对76例经腹腔镜或手术证实为内异症的患者(内异症组)和80例非内异症的妇科手术患者(对照组)的GSTM1基因型进行检测。两组均为广东籍汉族妇女。结果GSTM1空白基因型频率在内异症组和对照组中分别为65.8%和46.3%,差异具有显著性(字2=6.03,P=0.014)。GSTM1空白基因型的个体患内异症的风险是GSTM1非空白基因型个体的2.24倍(OR=2.24,95%CI=1.17~4.27)。结论GSTM1基因缺失可能是广东汉族妇女内异症发病的危险性因素之一。     

特异性靶向的戊肝嵌合DNA疫苗的构建及免疫效果研究

目的制备特异性靶向的嵌合DNA疫苗,并探讨其诱导机体产生免疫应答的效果。方法用基因重组技术构建细胞毒T淋巴细胞抗原4(CTLA4)与戊肝病毒抗原HEVE2嵌合基因的真核表达质粒,同时构建不带CTLA4的pHEVE2作为平行对照质粒,体外转染COS-7细胞,Westernblotting法检测细胞培养上清表达产物;于BALB/c小鼠皮内注射,每隔2周1次,共免疫3次,100μg/次;于免疫的第3、5和10周ELISA检测抗体效价。结果获得pHEVE2和pCTLA4-HEVE2嵌合基因真核表达质粒,测序证实各连接点阅读框序列正确;体外转染COS-7细胞,证明真核质粒以分泌形式表达;接种pCTLA4-HEVE2小鼠产生高滴度的特异性抗HEVE2抗体,比接种pHEVE2的对照组高50~100倍;pCTLA4-HEVE2诱导高水平的IgG2a、IgG2bTh1型抗体和IgG1Th2型抗体应答,pHEVE2则以IgG1Th2型抗体应答为主。结论CTLA4-HEVE2嵌合DNA疫苗有效地增强动物对HEVE2抗原的免疫应答,为进一步研究抗原靶向性的嵌合DNA疫苗奠定基础。     

应用改进的AdEasy系统制备重组腺病毒

目的改进AdEasy系统,使之更简便、高效、快捷。方法pAdtrack经酶切线性化后,转化经氯化钙处理的感受态AdEasier-1细菌,获得重组腺病毒质粒。最后将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒。荧光显微镜下细胞中重组腺病毒观察绿色荧光蛋白的表达。结果应用氯化钙法由pAdtrack转化AdEasier-1细菌,可获得极高比例的(20/20)阳性重组腺病毒克隆。结论应用改进后的AdEasy系统构建腺病毒相比于传统AdEasy系统,方法更简便、成功率更高、实验周期更短、对实验室的条件要求低。     

电泳技术结合计算机凝胶图像系统检测细胞凋亡

目的探讨检测细胞凋亡的新方法。方法利用常规电泳技术结合计算机凝胶图像分析系统对经地塞米松处理的巨噬细胞做细胞凋亡的定性定量检测。结果经地塞米松处理的巨噬细胞发生细胞凋亡,用1%琼脂糖凝胶电泳出现典型梯状条带,同时用流式细胞术检测出现凋亡峰,计算机凝胶图像光密度分析电泳结果,地塞米松处理0、0.5、1.0、2.04.0h巨噬细胞的凋亡率分别为0%、16.37%、30.72%、35.87%、56.60%,与流式细胞术的检测结果基本一致。结论琼脂糖凝胶电泳结合计算机凝胶图像分析系统是一种简便、低耗、准确的细胞凋亡定性定量检测新方法。