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[目的]制备抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因,为基因治疗重症肌无力奠定基础.[方法]构建含有抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因的重组原核表达载体pHEN 2-单链抗体A 7,将其转化至大肠杆菌HB 2151中,以异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)为诱导剂,在外周质中进行表达,以硼酸钠裂解细菌细胞壁,制备含有单链抗体的裂解液,应用鼠抗c-myc单克隆抗体的斑点杂交试验检测表达的单链抗体A 7基因.[结果]在大肠杆菌的外周质中可见单链抗体A 7基因表达,培养上清液中未见单链抗体A 7基因表达.[结论]抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因在原核细胞成功表达. 相似文献
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目的:探讨M型磷脂酶A2受体( M-type phospholipase A2 receptor, PLA2R)与Nephrin在特发性膜性肾病(idiopath-ic membranous nephropathy, IMN)发病中的作用及对预后的影响。方法采用免疫组化EliVision法检测IMN及正常对照组中PLA2R及Nephrin的表达,应用Image Pro-Plus软件半定量分析并判断其对预后的影响。结果 IMN 组织中Nephrin表达较对照组明显减低(P<0.01),而PLA2R表达升高(P<0.05),IMN中PLA2R与Nephrin表达量呈负相关(P<0.01),Nephrin表达与24 h尿蛋白定量呈负相关(P<0.01),PLA2R的表达量与尿蛋白定量无相关性。各预后组PLA2R及Nephrin相对表达量差异无统计学意义。结论PLA2R、Nephrin均表达于IMN肾小球毛细血管袢,二者表达量呈负相关。二者表达与患者预后无明显相关性,但存在PLA2R表达越高,患者完全缓解率越高的趋势。 相似文献
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抗人乙酰胆碱受体scFv-人血清白蛋白融合蛋白的构建及在大肠杆菌中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:制备抗人乙酰胆碱受体单链抗体637(scFv637)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白,提高scFv637的稳定性。方法:用PCR扩增人HSA基因,并克隆到含有抗人乙酰胆碱受体scFv637基因的载体pHEN2中构建重组载体pHEN2-scFv637-HSA。以重组载体转化E.coliHB2151,表达产物用斑点杂交试验检测,并以SDS-PAGE和Westernblot鉴定其融合蛋白的相对分子质量(Mr)。结果:琼脂糖凝胶电泳显示,扩增的人HSA基因和融合基因的大小分别为1770bp和7054bp。构建的scFv637-HSA经测序证实核苷酸序列正确,并且正确克隆至载体的开放读码框架内。表达产物仅存在于pHEN2-scFv637-HSA转化的E.coliHB2151外周质裂解液中。表达的融合蛋白的Mr约为95900。结论:在E.coli中成功地表达scFv637-HSA融合蛋白,为进一步对其进行功能研究和应用奠定了基础。 相似文献
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外周代谢器官和中枢神经系统间的多向性相互作用在维持全身代谢平衡、感知营养物质水平以及应对自然环境挑战具有重要作用。为了响应不同的代谢需求,人类在长期进化过程中形成一套器官间“相互交流”的生物通信系统。通过该系统,一些组织可以影响远处组织的代谢功能。然而,当器官间“相互交流”的信号通路失调,可能导致代谢性疾病的发生,如肥胖、糖尿病、肝脏疾病等。肝脏、脂肪组织和胃肠道-内分泌腺是该系统中主要的内分泌器官,除了经典的营养和能量存储/利用作用外,这些器官还分泌大量生物活性分子,参与机体代谢调节。本文就机体各器官间信号通路“串话”作用进行综述,重点讨论肝脏、脂肪组织以及胃肠道-内分泌腺分泌因子协调全身代谢平衡以及器官间信号网络,改善代谢综合征的作用。 相似文献
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目的测定肾病综合征患者血清脂联素水平,分析其与白蛋白、血脂及尿蛋白的关系。方法肾病综合征无并发症患者20例(A组),肾病综合征并发血栓、栓塞组(B组)及正常对照组20例(C组),用ELISA方法测定脂联素,同时测定肾功、白蛋白、血脂、尿蛋白。结果①A组血清脂联素水平明显高于C组,而B组明显低于A组,差异有统计学意义(P〈0.05)。②脂联素水平与白蛋自呈负相关,与尿蛋白、血清胆固醇呈正相关。结论肾病综合征患者血清脂联素水平显著高于正常人,并与尿蛋白量正相关,并发血栓、栓塞后明显下降。 相似文献
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目的:从人免疫球蛋白(Ig)转基因小鼠制备人源性抗乙酰胆碱受体(AChR)单克隆抗体。方法:以电鳐(Torpedo)AChR(tAChR)作为基础免疫原,分别以tAChR或人AChR(hAChR)α亚单位1~210位氨基酸(Hα1-210)与thioredoxin(Trx)融合制备的融合蛋白Trx-Hα1-210作为加强免疫原,注射人Ig转基因小鼠。应用ELISA检查由该小鼠制备的杂交瘤细胞培养上清液中人源性抗tAChR或抗Trz-Hα1-210单克隆抗体的分泌,应用放射免疫测定法(RIA)测定抗tAChR或抗Trx-Hα1-210单克隆抗体与hAChR的交叉反应性。结果:从tAChR作为加强免疫原组小鼠得到433株分泌人源性抗tAChR单克隆抗体的细胞株,从抗Trx-Hα1-210作为加强免疫原组小鼠得到20株分泌人源性抗Trx-Hα1-210单克隆抗体的细胞株。但这些人源性抗体均不能与hAChR起交叉反应。结论:由人Ig转基因小鼠制备人源性抗AChR单克隆抗体是可行的。 相似文献
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目的:检测不同类型膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者肾组织PLA2R、Nephrin及血清anti-PLA2R的表达量,判断它们之间是否存在相关性及其意义。方法:收集MN患者37例为实验组,包括特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)患者23例、HBV相关性MN(HBV-MN)患者8例、V型狼疮性肾炎(stage V lupus nephritis,LN-V)患者6例,选取10例肾肿瘤行一侧肾切术患者为对照组。应用免疫组织化学法检测各组肾组织中PLA2R及Nephrin的表达,通过专业图像处理软件对其表达进行半定量分析,并应用ELISA检测各组血清anti-PLA2R的表达量。结果:1)各实验组及对照组均可见PLA2R及Nephrin沿肾小球毛细血管袢沉积。IMN组PLA2R较其余各组表达量明显升高,差异有统计学意义,而剩余三组比较无统计学差异。各组Nephrin相对表达量,对照组>LN-V>HBV-MN>IMN,差异有统计学意义;2)IMN组肾组织Nephrin相对表达量同肾组织PLA2R及血清anti-PLA2R浓度间均负相关,肾组织PLA2R相对表达量同血清anti-PLA2R浓度呈正相关;3)IMN组中血清anti-PLA2R阳性者其肾组织PLA2R均表达升高。结论:IMN患者肾组织中PLA2R的表达较继发性膜性肾病(secondary membranous nephropathy,SMN)及正常对照组高,IMN组中血清anti-PL A2R阳性者其肾组织PL A2R均表达升高,临床上可联合二者共同鉴别MN是否原发,结合肾组织中Nephrin的检测,可增强其敏感性。PLA2R同足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin于IMN患者肾组织表达量呈负相关,为IMN的发病机制的研究提供进一步支持。 相似文献
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目的:评价贝那普利联合丹参多酚酸盐对链脲佐菌素(STZ)致大鼠糖尿病肾病的肾脏保护作用。方法:SD大鼠32只,分为正常组(A组)、糖尿病模型组(B组)、贝那普利组(C组)、贝那普利联合丹参多酚酸盐组(D组)。B组及C组、D组大鼠单次腹腔注射STZ,制备大鼠糖尿病模型;A组注射等量生理盐水。血糖稳定1周后C组给予贝那普利(10 mg/kg,ig),D组给予贝那普利(10 mg/kg,ig)联合丹参多酚酸盐(18 mg/kg,静脉注射)。给药3个月后处理。结果:比较大鼠血肌酐、肌酐清除率、肾组织乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶等生化指标,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。光镜下观察肾脏病理形态的改变,联合治疗比单用贝那普利效果更好。结论:贝那普利联合丹参多酚酸盐组对糖尿病肾病大鼠肾脏具有更好的保护作用。 相似文献