DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价

构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Lip-pOprF-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pOprF-VP22对pVAX1-OprF-VP22的包封效果、对DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-pOprF-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-pOprF-VP22),检测其转染DC2.4后OprF蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响。结果表明,Lip-pOprF-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5∶1时即能很好的包封pVAX1-OprF-VP22;当Lip-pOprF-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-pOprF-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2∶1增加到10∶1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4∶1、5∶1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5∶1时,Lip-pOprF-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-pOprF-VP22转染DC2.4后可表达更多OprF蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。     

pH响应性PTEN/PLGA-(HE)10-MAP纳米粒的构建及体外评价

构建一种pH响应性细胞穿膜肽（cell-penetrating peptides,CPPs）修饰的载抑癌基因第10号染色体同源缺失性磷酸酯酶-张力蛋白（PTEN）质粒DNA的纳米粒PTEN/PLGA-（HE）₁₀-MAP,探讨其基因递送和体外靶向抗肿瘤作用。采用双乳化-溶剂挥发法制备载PTEN质粒DNA的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒PTEN/PLGA;利用酰胺缩合反应将pH响应性组氨酸-谷氨酸（HE）重复寡肽与模型两亲性多肽（MAP）的重组体（HE）₁₀-MAP偶联至PLGA纳米粒表面,得到纳米粒PTEN/PLGA-（HE）₁₀-MAP。以粒径、Zeta电位以及包封率与载药量为指标对其进行表征分析;通过考察其细胞毒性、细胞摄取,以及靶向转染真核表达质粒和抗肿瘤细胞增殖的能力,分析其作为目的基因靶向递送系统的可行性。结果显示,制备的纳米粒粒径为（266.5 ± 2.86） nm,包封率为（80.6 ± 6.11）%,在pH 7.4、7.0和6.5条件下Zeta电位分别为-（6.7 ± 0.26） mV、 +（0.7 ± 0.22） mV和+（37.5 ± 0.85） mV;未载质粒DNA的空载体纳米粒PLGA-（HE）₁₀-MAP在肿瘤和正常细胞中的细胞毒性试验显示细胞存活率均在80%以上,制备的纳米粒可以被细胞摄取表达,且具有pH靶向抑制肿瘤细胞增殖的作用,在肿瘤的基因治疗中具有一定的应用前景。     

载铜绿假单胞菌DNA疫苗温敏水凝胶系统的构建及体内评价

构建载铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗的PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶系统,评价该系统的体内免疫效力.通过简单物理混合法制备PADNA疫苗的PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶,测量其胶凝温度;评价其体外毒性、体外累计释放率;通过凝胶体积变化评价水凝胶的体内降解;将小鼠...     

淫羊藿苷对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用机制研究

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路参与淫羊藿苷对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的作用机制。方法 SD大鼠按随机数字表法将分成为正常组、模型组和实验组,每组15只。向大鼠大脑右侧中动脉插入线栓模拟缺血2 h后缓慢拔出制备CIRI模型。模型组和实验组大鼠构建CIRI模型,正常组大鼠仅切开颈部皮肤暴露右侧中动脉。术前30 min,实验组灌胃100 mg·kg^-1淫羊藿苷,正常组和模型组灌胃等体积的生理盐水。再灌注24 h后,用Zea-Longa’s 5级标准评分法对3组大鼠进行神经功能的缺损性评价,测定脑组织的干湿重评价脑含水量,用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)进行神经元凋亡检测,用蛋白质印迹法检测患侧脑组织PI3K/Akt蛋白的表达水平。结果 正常组、模型组和实验组的神经功能缺损评分分别为(0.00±0.00),(2.53±0.36)和(2.04±0.31)分;这3组脑含水量分别为(61.33±5.69)%,(89.34±5.24)%和(75.34±3.19)%;这3组TUNEL染色细胞凋亡率分别为(0.00±0.00)%,(...