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1.
2.
(His)6 -eIF3s4融合蛋白在人乳腺癌细胞Bcap37中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建真核细胞翻译起始因子3第4亚单位(eIF3s4)真核表达载体用于进一步功能研究。方法:设计引物,以K562细胞的总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增eIF3s4的全长编码区cDNA,克隆于pGEM-TEasy载体,经DNA测序并与GenBank数据库序列进行比对后,将该cDNA序列亚克隆于真核表达载体pcDNA4/HisMaxB载体,构建成(His)6-eIF3s4融合蛋白的表达载体,用LipofectamineTM2000瞬时转染人乳腺癌细胞株Bcap37,利用Westernblot方法检测(His)6-eIF3s4融合蛋白的表达。结果:DNA序列测定表明,利用RT-PCR方法克隆的eIF3s4全长编码区cDNA序列与GenBank数据库序列一致,Westernblot结果证实(His)6-eIF3s4融合蛋白在Bcap37细胞中获得预期表达。结论:成功地构建了eIF3s4的真核表达载体并在人乳腺癌细胞Bcap37中表达,为建立稳定的eIF3s4高表达细胞系,进而研究eIF3s4与肿瘤细胞多药耐药相关性打下了基础。 相似文献
3.
4.
人大肠癌中基质金属蛋白酶-7 mRNA的表达 总被引:11,自引:0,他引:11
目的:探讨基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase 7,MMP-7)与大肠癌浸润和转移的关系.方法:用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大肠癌和正常黏膜、炎性息肉、腺瘤及淋巴结中MMP-7 mRNA的表达.结果:97.4%(37/38)的大肠癌和1例肝转移中MMP-7 mRNA表达阳性,而相应正常黏膜几乎不表达;大肠癌中MMP-7 mRNA的表达水平随Dukes分期的进展而逐渐升高(P<0.01),A期(0.28±0.08),B期(0.54±0.17),C期(0.55±0.09),D期(0.73±0.06).5例腺瘤MMP-7均为阳性,但表达水平低于癌组织(P<0.01);3例炎性息肉均未见MMP-7表达.传统组织学检查有癌转移的13个淋巴结MMP-7表达均为阳性;组织学检查未见转移的12个淋巴结MMP-7表达6个阴性、6个阳性,再次行组织学检查于6个MMP-7阳性者中发现3个有微转移.结论:MMP-7的高表达可能在大肠癌的浸润和转移过程中具有重要作用;用RT-PCR方法检测淋巴结中MMP-7mRNA的表达是诊断大肠癌淋巴结微转移的敏感方法. 相似文献
5.
肝癌相关性甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测法 总被引:8,自引:2,他引:6
目的:进一步探讨血清肝癌相关性GPDA同工酶分离检测条件,提高其对原发性肝癌的诊断价值。方法:对分离血清肝癌相关性GPDA同工酶电泳体系的凝胶浓度及梯度、缓冲液的pH及离子强度、电泳的环境温度、标本 用量以及呈色条件等进行了逐项摸索,建立了稳定且分离效果好的GPDA同工酶检测方法。结果:采用三层阶段梯度聚丙烯酰胺凝胶体系将血清GPDA分为肝癌相关性的快带(GPDA-F)和相关性的慢带(GPDA-S),肝癌相关性GPDA的检出率明显提高。结论:肝癌相关性血清GPDA检测法稳定可靠、敏感,适合于临床推广应用。 相似文献
6.
目的:探讨老年冠心病患红细胞免疫功能与胰岛素抵抗(IR)之间的关系。方法:将老年冠心病人(59%)分为不稳定型心绞痛组(27例)和稳定型心绞痛组(22组),并与32例健康老人组对照。采用“郭峰改良法”及PEG双抗法分别检测各组的红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR),红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)及空腹和餐后2h胰岛素(IS)。结果:老年冠心病组RBC-ICR,空腹及糖负荷后的IS均明显高于对照组,P<0.01,老年冠心病组RBC-C3bRR与对照组无显性差异。结论:RBC-ICR和IR参与老年冠心病的发病过程,并相互影响,加重血管内皮的损伤。 相似文献
7.
8.
目的 介绍后颅窝骨性扩大术治疗Chiari畸形合并脊髓空洞症。方法 该手术分为两种亚术式 ,一种是枕颈固定扩大术 :取自体髂骨 5cm× 10cm ,打磨成“凹”字形。上端为齐头端 ,固定在后颅窝减压窗缘。缺口端为下端 ,固定在枢椎棘突上 ,将扩大的硬脑 (脊 )膜修补筋膜片固定在植骨片内面 ,使筋膜片贴附在植骨片内面 ,形成帐篷状 ;另一种是单纯骨性扩大术 :取自体髂骨 6cm× 8cm的梯形骨片 ,并利用较厚的髂骨缘打磨成弧形。植骨片固定在后颅窝减压窗上 ,弧形端构成枕骨大孔后缘。将扩大的硬脑 (脊 )膜修补筋膜片也固定在植骨片内面 ,使筋膜片贴附在植骨片内面 ,也形成帐篷状。结果 本组病例随访 2~ 7年 ,术后症状体征缓解总有效率为91.6% ,肌力比以前提高 2~ 3级。结论 该术式比其他治疗Chiari畸形合并脊髓空洞症的术式 ,治疗效果显著 ,疗效切实可靠 相似文献
9.
目的:研究蛋白激酶C抑制剂十字饱碱(staurosporine,ST)逆转耐长春新碱KB细胞(简称KB/VCR)的机制。方法:用MTT法比较ST作用前后KB/VCR细胞耐药性的改变,用流式细胞术观察KB/VCR药物代谢的变化,用RTPCR法和免疫组织化学方法研究耐药膜糖蛋白(Pglycoprotein,Pgp)、耐药相关蛋白(multidrugresistanceassociatedprotein,MRP)和肺耐药蛋白(lungcancerresistancerelatedprotein,LRP)在细胞mRNA水平和蛋白水平上的表达。结果:1ng/mLST使KB/VCR细胞耐药性下降了158倍。亲本株KB/S细胞几乎不表达Pgp,而KB/VCR细胞却近100%强表达Pgp,P=0.004;ST使KB/VCR细胞的Pgp表达强度明显降低,但阳性率未见明显改变。MRP在两种细胞的基因转录水平和蛋白水平均呈现弱表达,ST也不影响其表达。1ng/mLST作用24h后,KB/S和KB/VCR细胞的LRP在mRNA水平及蛋白水平上表达指数均明显地高出用药前,P=0.006。结论:ST可通过降低Pgp表达强度和药物外排功能来逆转肿瘤细胞的多药抗药性,但这种作用可部分地被LRP蛋白表达增强所抵消。 相似文献
10.
术前明确卵巢肿瘤的性质对于处理方式和手术方法的选择至关重要,如以卵巢肿瘤的大小为是否手术的标准,则有一部分卵巢癌患者就被延误治疗,而对卵巢肿瘤的所有患者均手术,又会导致把一部分生理性卵巢肿瘤患者进行不必要的手术而增加患者的痛苦及负担,为了避免上述的不良后果,我们应用RT-PCR法检测卵巢肿瘤腹腔液中的CK7mRNA、CvclinE mRNA表达及放射免疫法测定血CA125水平,并与术后的病理结果相比较,旨在探讨三者单独及联合应用在卵巢肿瘤的定性诊断及早期诊断的价值. 相似文献