糖尿病小鼠视网膜碱性成纤维细胞生长因子的表达及细胞损害的电镜观察

目的：为临床研究提供形态学资料。方法：用免疫组化方法，观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在糖尿病小鼠视网膜的分布及表达密度；用透射电镜观察不同病程视网膜细胞的损害情况。结果：糖尿病及正常小鼠视网膜各层细胞均表达bFGF，反应强度和密度不同。发病组自6月龄起，居于大血管周围的阳性节细胞密度增加；不同病程bFGF的表达有不同程度的增加。随糖尿病病程延长，细胞超微结构受到不同程度的损害。结论：糖尿病时增多的bFGF直接或间接作用于血管内皮细胞和平滑肌细胞，刺激二者增殖，促进微血管病变的发生；另一方面，减弱视细胞与双极细胞间的信息传递，对糖尿病性盲的发生起重要作用。同时，各种细胞的超微结构及相应的功能也受到不同程度的损害。     

微孢子虫性角膜基质炎

微孢子目是形成孢子的，专性的真核原和寄生物，属于微孢子门。眼部的微孢子虫病，根据感染微孢子虫种属的不同，具有特征性的眼部临床表现。脑炎微孢子虫属引起的感染局限在角膜和结膜的上皮细胞，产生弥漫性、点状的上皮角结膜炎。小孢子虫属和微孢子虫属引起的感染通常侵及包括角膜细胞在内的角膜基质。     

重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA的构建、鉴定及其对人脐静脉内皮细胞增生的影响

背景 脉络膜新生血管(CNV)是多种眼部疾病致盲的原因之一,研究发现补体系统在CNV的发病机制中起重要作用.目的 构建针对补体因子B(CFB)的小干扰RNA(siRNA)重组质粒,体外观察其对人脐静脉内皮细胞ECV-304增生的影响.方法 根据人CFB的基因序列设计引物,经PCR扩增后与质粒pRNAT-U6.1连接,得到重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA,并进行测序鉴定和PCR鉴定.ECV-304细胞株进行常规培养,用电转染技术将重组质粒或空质粒分别转染人ECV-304细胞株,分为CFB-siRNA转染组和空质粒转染组,未转染的细胞为空白对照组.细胞转染后继续培养48 h,于倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并计算转染效率;采用半定量逆转录PCR(RT-PCR)法测定各组细胞中CFB mRNA的相对表达量;用MTT法检测各组细胞转染24、48和72 h时细胞的增生值(A)并计算生长抑制率;利用流式细胞技术检测各组细胞的生长周期变化.结果 PCR扩增的目的片段序列与CFB基因序列完全相符,ECV-304细胞转染后,倒置荧光显微镜下可见CFB-siRNA转染组和空质粒转染组的细胞中GFP呈绿色荧光.半定量RT-PCR结果显示,CFB-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组的CFB mRNA相对表达量分别为0.07±0.04、0.14±0.02和0.14 ±0.03,总体比较差异有统计学意义(F=233.05,P=0.00);其中CFB-siRNA转染组CFB mRNA相对表达量明显低于空质粒转染组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).MTT法检测结果显示,各组不同时间细胞增生抑制率总体比较差异有统计学意义(F分组=212.99,P=0.00);CFB-siRNA转染组细胞转染24、48、72 h后细胞增生的抑制率分别为(23.45±0.01)％、(33.48±0.02)％和(45.49±0.01)％,明显高于同时间点空质粒转染组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,CFB-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组G1期的细胞数占总细胞数的(44.4±0.5)％、(25.8±0.4)％和(27.9±0.6)％,总体比较差异有统计学意义(F=58.98,P=0.00);CFB-siRNA转染组G1期和G2期细胞所占百分比显著高于空白对照组和空质粒转染组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA可通过将细胞阻滞在G1期而有效抑制人脐静脉内皮细胞的增生.     

结膜印迹细胞学检查在干眼病诊断中的价值

目前,干眼病成为眼科门诊的常见病和多发病,原有的三项诊断性试验(角膜荧光素染色、泪液分泌试验、泪膜破裂时间)越来越不能满足对干眼病的确切诊断,亟待开展新的方法。结膜印迹细胞学技术是近年来新开展的一项实验室检查手段,可以从形态学方面对结膜上皮细胞和杯状细胞的病理改变进行确切的描述,且不会给患者带来任何痛苦,具有良好的临床应用前景。因此,我们对2004年6月-2005年6月门诊诊断为或高度怀疑干眼病的患者共16例进行了结膜印迹细胞学检查,以期探讨结膜印迹细胞学技术在干眼病早期诊断中的价值及意义。资料和方法1.病例选择与分组:…     

重组B因子小干扰RNA对激光诱导大鼠脉络膜新生血管的抑制作用

目的　探讨重组B因子（CFB）小干扰RNA(siRNA)抑制激光诱导的大鼠脉络膜新生血管(CNV)的效果。方法　采用基因重组的方法获得重组CFB siRNA,取棕色挪威（BN）大鼠42 只84 只眼,用激光光凝方式建立CNV模型,随机分为尾静脉注射组、玻璃体腔注射组、视网膜下腔注射组、对照组。3种不同的注射方式组分别设有相应的空质粒注射组。除对照组外,其余各组于激光光凝后第1、3、5天分别进行注射CFBsiRNA,尾静脉、玻璃体腔、视网膜下腔注射组的注射剂量分别为50、20、10 μg;对照组激光光凝后不给于任何干预。激光光凝前和光凝后14 d分别行荧光素眼底血管造影(FFA),根据荧光渗漏程度对各激光光斑评分来检测CNV的生成情况;免疫组织化学法检测各组大鼠脉络膜内血管内皮生长因子(VEGF)、第Ⅷ因子的表达情况。结果 各组激光光斑荧光渗漏程度评分结果显示,CFB-siRNA尾静脉注射组与对照组相比荧光渗漏程度明显减轻 (χ2=15.1620,P<0.05)。免疫组织化学结果显示,CFB-siRNA尾静脉注射组VEGF、第Ⅷ因子的阳性表达强度在激光光凝后不同时间点之间差异无统计学意义(F=20.35,18.33;P>0.05),而与同时间点其他各组相比,明显降低(F=77.96,55.68;P<0.05)。其他各组VEGF、第Ⅷ因子的阳性表达强度在激光光凝后14 d均显著强于激光光凝后7 d (F=60.89,61.12;P<0.05)。结论 通过下调VEGF及第Ⅷ因子的表达水平,重组CFB-siRNA能有效的抑制CNV的生成。     

前部缺血性视神经病变荧光素眼底血管造影的局限性

应用荧光素眼底血管造影(fluoresceinfundusangiogra-phy,FFA)的方法研究前部缺血性视神经病变(anteriorischemicopticneuropathy,AION),使人们对AION的临床特点、病因和发病机制的认识逐渐加深。然而,AION的FFA视盘荧光形态很复杂,依据病期长短,是部分还是全部视盘梗塞,是否累及视盘表层毛细血管网等而有很大差别[1]。现对106例AION患者的117只眼的FFA表现进行分析,探讨其局限性。1　病例资料和方法1.1　病例选择回顾性分析我院眼科1995年12月～1999年3月有完整病历记录的AION患者106例117只眼的临床资料。其中男性55例,女性51…     

姜黄素的药理作用及其在眼科的应用研究进展

姜黄素是从姜黄中提取的活性单体成分，具有抗纤维化、抗肿瘤、抗炎症及抗微生物等多种药理作用．且无明显毒副作用。目前，姜黄素在眼科的应用也取得了一定的进展，包括抑制翼状胬肉成纤维细胞增生，抑制角膜和视网膜新生血管生成．抑制晶状体上皮细胞增殖，抑制视网膜色素上皮细胞增殖，预防白内障及防治增殖性玻璃体视网膜病变等。     

替奈替普酶对增值型糖尿病视网膜病变玻璃体手术的辅助作用

目的评价替奈替普酶（tenecteplase,TNK-TPA）玻璃体腔注射对增殖性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy,PDR）患者增殖膜的溶解、分离作用和对视网膜组织的毒副作用。方法将PDR患者54例55只眼随机分成研究组29例30只眼,对照组25例25只眼。研究组于常规玻璃体切除术前3d,玻璃体腔内纤维增殖膜与视网膜的交界面区注射TNK-TPA50μg/0.1ml;对照组为空白对照。注药前后和玻璃体切除手术后均检查视力、裂隙灯显微镜、双目间接检眼镜、B型超声和标准视网膜电流图（ERG）,随访6个月。结果研究组5只眼在注药后发生了完全性玻璃体后分离,增殖膜-视网膜粘连点松解率、术后6个月视力增长幅度、一次手术视网膜复位率均较对照组高（P〈0.05）;医源性视网膜裂孔发生率较对照组低（P〈0.05）;注药前后b波波幅未见明显变化。结论 50μg/0.1ml TNK-TPA可有效的溶解、分离PDR中的纤维增殖粘连,提高手术成功率,减少医源性视网膜裂孔发生率,有利于保护视功能,ERG显示未见视网膜毒性。     

转化生长因子-β2对实验性近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响

背景以往对近视眼巩膜力学特性变化的研究局限于其巩膜整体和条带的力学特性变化方面,目前对近视眼细胞水平力学特性的研究日益受到重视。目的明确TGF-β2对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响。方法2周龄豚鼠12只,随机选取一侧眼用镜片诱导方法制备近视动物模型,对侧眼为对照。造模30d后,用组织块培养法培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞并传2代,采用免疫组织化学法以兔抗鼠波形蛋白、结蛋白、角蛋白、S-100抗体进行细胞鉴定。将不同质量浓度的TGF-β2（分别为0、1、10、100mg／L）加入无血清DMEM中作用24h,利用细胞微管吸吮的方法测定各组巩膜成纤维细胞的力学特性。结果模型眼0mg／LTGF—p：组与对照眼0mg／LTGF—p：组比较,模型眼的巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数明显升高,二者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。模型眼与对照眼在TGF-β2作用下,0mg／L组与1mg／L组、10mg／组比较,细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均有统计学意义（P〈0．05）。模型眼和对照眼培养细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数与TGF-β2的质量浓度均呈正相关（r=0．743、r=0．533;r=0．654、r=0．576）,模型眼和对照眼中的0mg／L组与100mg／L组比较细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均无统计学意义（P〉0．05）,模型眼1mg／L组、10mg／L组与对照眼1mg／L组、10mg／L组比较,巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数之间差异有统计学意义（P〈0．05）;模型眼组100mg／LTGF-β2与对照眼的100mg／LTGF-β2组比较,巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论随着TGF—B,质量浓度的增加,近视眼巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数值明显升高,1mg／L和10mg／LTGF-β2可以降低正常巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量及黏弹性参数,导致细胞力学特性的更大变化。     

中心性浆液性脉络膜视网膜病变荧光素和吲哚氰绿血管造影及眼球后血流动力学分析

目的 探讨中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)患者眼球后血管血流动力学变化特征、脉络膜循环异常特点及其与视网膜色素上皮病变的关系.方法 病例对照研究.应用彩色超声多普勒检测57例(57只患眼,57只对侧眼)CSC单侧受累患者及25例(50只眼)正常对照者的眼动脉、睫状后动脉、睫状后短动脉,记录其血管收缩期峰值血流速度(PSV)和舒张末期血流速度(EDV)及阻力指数(RI),并对CSC患者的患眼、对侧眼及正常对照眼的血流参数两两间分别进行比较研究.采用海德堡激光扫描眼底造影系统,对57例患者行同步吲哚氰绿脉络膜血管造影(ICGA)、荧光素眼底血管造影(FFA),并对其图像进行对比分析.采用SPSS 12.0统计学软件.对CSC患者的患眼与对侧眼的眼动脉、颞侧睫状后动脉、颢侧睫状后短动脉的PSV、EDV、RI血流参数进行比较,采用自身配对t检验;对正常对照眼与CSC患者的对侧眼和患眼血流参数进行比较,采用成组设计t枪验.以P＜0.05作为差异有统计学意义.结果 CSC患者的患眼和正常对照者的颞侧睫状后动脉(PSV:t=3.044,P=0.005;EDV:t=3.731,P=0.001)、颞侧睫状后短动脉(PSV:t=2.822,P=0.008;EDV:t=3.194,P=0.003),患者对侧眼和正常对照者的颞侧睫状后动脉(PSV:t=3.219,P=0.003;EDV:t=3.807,P=0.001)、颞侧睫状后短动脉(PSV:t=3.931,P=0.000,EDV:t=3.145,P=0.003)血流参数均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).患者的患眼与对侧眼的颞侧睫状后动脉(PSV:t=0.608,P=0.548;EDV:t=0.122,P=0.904)、颞侧睫状后短动脉(PSV:t=0.730,P=0.470;EDV:t=0.109,P=0.914)的血流参数比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).ICGA、FFA检查结果显示,57例患者的患眼所有视网膜色素上皮渗漏点均出现在相对应的脉络膜弱荧光区内,其中52例在早期弱荧光区内继发脉络膜血管扩张,晚期呈现高荧光渗漏灶.患眼和对侧眼所有视网膜色素上皮窗样荧光处,相对应的脉络膜部位,在ICGA造影晚期均呈现高荧光渗漏灶.而20只患眼及其16只对侧眼的脉络膜在ICGA晚期呈现高荧光渗漏灶处,经FFA检查未见视网膜色素上皮窗样荧光.结论 CSC是与全身因素有关的舣眼疾病,其眼球后和脉络膜微循环异常的基本特征为血管的低灌注和缺血,视网膜色素上皮病变继发于脉络膜微循环异常.(中华眼科杂志,2009,45:243-247)